乳腺浸润性导管癌耐药基因蛋白表达与化疗方案的相关性研究.docx

乳腺浸润性导管癌耐药基因蛋白表达与化疗方案的相关性研究.docx

《乳腺浸润性导管癌耐药基因蛋白表达与化疗方案的相关性研究.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《乳腺浸润性导管癌耐药基因蛋白表达与化疗方案的相关性研究.docx（6页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

乳腺浸润性导管癌耐药基因蛋白表达与化疗方案的相关性研究

乳腺浸润性导管癌耐药基因蛋白表达与化疗方案的相关性研究

【摘要】目的：

了解乳腺浸润性导管癌对不同化疗方案的灵敏性及与耐药基因蛋白表达的关系。

方式：

用免疫组化法检测同一乳腺癌病例新辅助化疗前后耐药基因蛋白谷胱甘肽-S转移酶（GST-π）、拓扑异构酶Ⅱ（ToPoⅡ）、热休克蛋白（HSP）和P-糖蛋白（P-gp）的表达情形，并与3种化疗方案，即环磷酰胺+阿霉素+5-氟尿嘧啶（CAF）、环磷酰胺+氨甲喋呤+5-氟尿嘧啶（CMF）、紫杉醇+阿霉素（TA）方案作相关性分析。

结果：

CAF方案对乳腺浸润性导管癌耐药表型阻碍最大，该组28例中11例GST-π由阴性转为阳性表达，7例化疗后ToPoⅡ表达转阴，化疗前后不同显著（P<;CMF方案31例中，GST-π5例由阴性转为阳性表达，5例化疗后ToPoⅡ表达转阴;TA方案对乳腺癌耐药表型阻碍最小，但该方案24例有8例经化疗后P-gp由阳性转为阴性表达。

结论：

乳腺浸润性导管癌耐药基因表达受不同化疗方案的阻碍。

【关键词】乳腺癌;药物耐受性;基因

[ABSTRACT]Objective:

Tounderstandthesensitivityofbreastinvasiveductalcarcinomatodifferentchemotherapyplanandtherelationshipbetweenthesensitivityandtheexpressionofresistancegene.Methods:

Collecting83freshbiopsyspecimensofbreastcancer,observedtheexpressionofGST-π,ToPoⅡ,HSPandP-gpofthesamecasebeforeandafterthechemotherapy,andmadethecorrelationanalysisoftheexpressionandthreechemotherapyplanssuchasCAF,CMFandTAplan.Results:

TheeffectofCAFplantotheexpressionofresistancegeneofbreastinvasiveductalcarcinomawasthemostimportant.Inthisgroupwhichhaving28casestheexpressionofGST-πof11caseschangedfromnegativetopositive,theexpressionofToPoⅡof7caseschangedfrompositivetonegativeafterthechemotherapyandthereissignificantdifferencebeforeandafterthechemotherapywassignificant（P<.InCMFplangroupwhichhaving28casestheexpressionofGST-πof5caseschangedfromnegativetopositive,theexpressionofToPoⅡof5caseschangedfrompositivetonegativeafterthechemotherapy.TAplanaffecttheexpressionofresistancegeneofbreastinvasiveductalcarcinomaminimally,butinthisgroupwhichhaving24casestheexpressionofP-gpof8caseschangedfrompositivetonegative.Conclusion:

Differentchemotherapyplancanaffecttheexpressionofresistancegeneofbreastinvasiveductalcarcinoma.

　　[KEYWORDS]breastcarcinoma;drugresistance;gene

　　化疗是乳腺癌综合医治的重要手腕，但肿瘤的耐药常致使化疗失败，为幸免化疗的盲目性，有必要探讨癌细胞对化疗耐药的更深层缘故。

本文选取乳腺癌发病率最高的浸润性导管癌83例，比较同一患者新辅助化疗前后乳腺癌耐药基因谷胱甘肽S-转移酶（GST-π）、拓扑异构酶Ⅱ（ToPoⅡ）、热休克蛋白（HSP）和P-糖蛋白（P-gp）的表达转变，以探讨不同化疗方案对耐药基因表达的阻碍。

　　1材料和方式

　　材料

　　搜集河北北方学院附属第一医院2007～2020年行乳腺癌活检患者标本113例，选取经病理证明为浸润性导管癌83例作为研究对象。

患者活检后均行乳腺癌新辅助化疗及改良根治或保乳手术。

化疗方案别离为环磷酰胺+阿霉素+5-氟尿嘧啶（CAF）、环磷酰胺+氨甲喋呤+5-氟尿嘧啶（CMF）、紫杉醇+阿霉素（TA），各1～3个疗程。

所有病例按化疗方案分成3组，即CAF组、CMF组、A组。

活检及手术标本均经甲醛固定，石蜡包埋，持续制成4μm厚切片，别离进行HE染色和免疫组化染色。

　　方式

　　采纳免疫组化染色SP法，鼠抗人P-gp单克隆抗体，兔抗人GST-π单克隆抗体，鼠抗人ToPoⅡ单克隆抗体，鼠抗人HSP多克隆抗体均为美国Zymed公司产品，S-P试剂盒由福州迈新生物技术开发公司提供。

操作步骤严格依照说明书进行，用PBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性直肠癌组织作阳性对照。

　　结果判定

　　HSP以细胞浆或细胞核显现棕黄色颗粒为阳性细胞。

P-gp和GST-π要紧依照其散布范围和显色程度，即阳性细胞数比例分为4级。

阴性（-）：

无棕色反映，细胞背景一致不着色或阳性细胞数小于5%;弱阳性（+）：

5%～25%的癌细胞胞浆着棕黄色;中阳性（++）：

25%～50%癌细胞胞浆着棕黄色;强阳性（+++）50%以上的癌细胞胞浆着深棕色。

ToPoⅡ要紧依照其散布范围即阳性细胞数比例分为4级，阴性（-）：

细胞核无棕色反映或阳性细胞数小于1%;弱阳性（+）：

1%～25%的癌细胞胞核着棕黄色;中阳性（++）：

25%～50%的癌细胞胞核着棕黄色;强阳性（+++）：

50%以上的癌细胞胞核着棕黄色。

　　统计学处置

　　采纳χ2查验,查验水准α=。

　　2结果

　　GST-π的表达

　　GST-π表达于胞浆，部份病例阳性细胞散布不均匀（图1A、B），经化疗后CAF组11例GST-π转阳，化疗前后不同有统计学意义（P<，CMF组31例5例由阴性转为弥漫性阳性表达，TA组4例转阴，但化疗前后不同无统计学意义（P>（表1）。

　　ToPoⅡ的表达

　　ToPoⅡ表达于细胞核，阳性细胞散布均匀（图2A、B）。

化疗后CAF组有7例转阴，化疗前后不同有统计学意义（P<，而CMF组31例有5例转阴，TA组有1例转为阳性表达，但化疗前后不同无统计学意义（P>（表1）。

　　HSP的表达

　　HSP细胞浆中呈棕黄色为阳性（图3A、B）。

CAF组有5例转阳，CMF组13例阳性中有2例转阴，化疗后TA组24例有3例转阳，但化疗前后不同无统计学意义（P>（表1）。

　　P-gp的表达

　　P-gp表达于细胞膜和细胞浆，不同病例细胞着色深浅不一（图4A、B）。

TA组24例，8例由阳性转为阴性表达，化疗前后不同有统计学意义（P<。

在CMF组转阴2例，CAF组有5例转阳，但化疗前后自身对照表达的不同无统计学意义（P>（表1）。

表1不同化疗方案化疗前后各基因蛋白表达结果对照图3A:

CMF方案化疗前HSP表达为阳性，定位于胞浆（Envision100）　　3讨论

　　化疗在乳腺癌的综合医治中占有重腹地位，手术前后应用全身性化疗以杀灭亚临床型转移灶是提高医治成效和生存率较为成熟的方式。

而化疗成功的要紧障碍是癌细胞对化疗药物产生耐药性[1]，愈来愈多的研究发觉乳腺癌耐药为多基因、多步骤耐药，涉及P-gp、GST-π、HSP、ToPoⅡ等[24]。

本实验检测同一乳腺癌病例化疗前后耐药基因的表达情形,并作自身对照研究，探讨了CAF方案,CMF方案、TA方案对耐药基因P-gp、GST-π、HSP、ToPoⅡ表达的阻碍，了解化疗是不是能克服耐药问题，结果提示化疗能够诱导乳腺癌耐药基因表达的改变。

　　GST-π是GST家族中的一种要紧同工酶，具有解毒作用，能催化谷胱甘肽和各类亲电子化合物结合，其可减弱化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用，从而造成癌细胞耐药，其高表达对化疗耐药有重要阻碍[5]。

Kim等[6]用免疫组化法检测乳腺癌化疗组与未化疗组的GST-π表达情形，发觉化疗对GST-π表达无阻碍。

但未做化疗前后GST-π表达不同的自身对照研究，也未考虑化疗方案选择对实验结果的阻碍。

本实验中化疗前后自身对照研究说明以CAF方案做化疗可使部份GST-π阴性的乳腺癌变成阳性表达，化疗前后不同显著，提示乳腺癌组织中GST-π可能参与化疗的取得性耐药。

　　TopoⅡ在DNA复制、转录和染色体分离中起重要作用，是催化DNA拓扑状态彼此转换的一种蛋白酶，是多种化疗药物的作用靶点。

它是多种抗癌药物如托扑异构酶抑制剂作用的靶酶，不同的表达量和活性与耐药表性的维持紧密相关，表达水平下降那么肿瘤对抗癌药物灵敏性下降，耐药性增加[7]。

关于乳腺癌化疗对ToPoⅡ活性的阻碍国内外报导较少。

有人将乳腺癌化疗前后病例进行比较后发觉，两组间表达不同不明显，以为短时间的化疗不足以引发ToPoⅡ活性转变[8]。

本实验研究结果说明方案为CAF化疗可使部份乳腺癌病例显现ToPoⅡ表达的明显下降，而CMF组和TA组也有少量病例化疗前后ToPoⅡ表达显现转变，但不同不明显。

　　HSP是细胞受应激源刺激后诱导产生的一组应激蛋白，与肿瘤发生、增殖及分化有关，按其分子量不同可分为3种不同类型，其中HSP70与恶性肿瘤关系紧密，参与操纵肿瘤细胞的增殖和凋亡，在肿瘤发生进展中充当分子伴侣。

避免异样蛋白积聚而产生异样折叠，维持细胞的自稳态，使细胞维持增生状态免于凋亡。

对HSP的转基因研究说明，它与多Y药耐药（MDR）机制有关。

热休克蛋白可能参与调剂细胞对化疗药的灵敏性[9]。

本实验结果说明，CAF方案可使部份乳腺癌病例不同程度显现HSP表达升高，值得进一步研究。

　　P-gp糖蛋白是一种多要耐药基因（MDR1）编码的能量依托性转运蛋白，分子量为170kD。

其耐药机制是将肿瘤细胞内的化疗药物泵出细胞外，从而使细胞内药物浓度降低，产生耐药性[10，11]。

Verrelle等以为乳腺癌的P-gp阳性细胞数量和染色强度与化疗成效和病人预后呈负相关。

Botti等发觉P-gp高表达的乳腺癌病人化疗成效差，容易发生转移，相反，低表达者化疗成效好，预后好。

本研究发觉，P-gp在化疗前乳腺癌组织中有必然表达，说明其在乳腺癌原发耐药中亦有重要作用。

以CAF、CMF方案做化疗，大多数病例化疗前后P-gp表达无明显转变。

而TA方案化疗组部份化疗前阳性的病例化疗后转阴，说明TA方案可能使部份乳腺癌P-gp表达下调。

　　由此可见，新辅助化疗可使乳腺浸润性导管癌耐药基因表达发生转变，不同化疗方案对耐药基因表达阻碍不一致。

TA方案较少使乳腺癌的耐药表型增加，乃至有使P-gp表达水平下调的趋势。

CAF方案对耐药表型阻碍最大，可使GST-π和ToPoⅡ表达显现明显转变，使乳腺癌耐药性增加。

临床医生若是化疗前检测患者耐药基因表达情形，为选择加倍合理的个性化化疗方案提供参考依据，以提高医治成效和延长患者生存期。

【参考文献】

1石晶,滕月娥,赵明芳,等.乳腺癌耐药相关蛋白与多药耐药关系的研究进展[J].有效临床医药杂志，2020，13

（1）：

88-91.

　　2吴达龙，黄丰，吕焕章.乳腺癌耐药蛋白——肿瘤多基因耐药研究新进展[J].癌症，2003，22（4）：

441-444.

　　3McGroganG，RudolphⅡDNAtopoisomeraseexpressionandtheresponsetoprimarychemotherapyinbreastcancer[J].BrJCancer，2003，89：

666-671.

　　4HayesDF,ThorA,DresslerI,etal.HER-2predictsbenefitfromadjuvantpaclitaxelafterACinnode-positivebreastcancerCALGB9344[J].ProcAmSocClinOncol,2006，24（18S）：

510.

　　5林勇，林贤平.60例乳腺癌组织中MRP，GST-π表达及意义[J].福建医药杂志，2003，25（4）：

126-127.

　　6KimSU,LeeKM,ParkSK,etal.GeneticpolymorphismofglutathioneS-transferaseP1andbreastcancerrisk[J].JBiochemMolBiol，2004，37（5）：

582-585.

　　7CardosoF,DurbecqV,LarsimortD,etal.Correlationbetweencompleteresponsetoanthracycline-basedchemotherapyandtopoisomeraseⅡ-alphageneamplificationandpreteinoverexpressioninlocallyadvanced/metasaticbreastcancer[J].IntJOncol,2004,24

（1）:

201-209.

　　8DurbecqV，PaesmansM，CardosoF，etal.Topoisomerase-Ⅱalphaexpressionasapredictivemarkerinapopulationofadvancedbreastcancerpatientsrandomlytreatedeitherwithsingleagentdoxorubicinorsingleagentdocetaxel[J].MolCancerTher，2004，3（10）：

1207-1214.

　　9张焕明，肖益惠，俞晓芳.多西紫杉醇为主的联合方案医治晚期乳腺癌的临床观看[J].临床肿瘤学杂志，2007，12

（1）：

41-47.

　　10AmbudkarSV，Kimchi-SarfatyC，SaunaZE，etal.P-glycoproteinFromgenomicstomechanism[J].JOncogene，2003，22（47）：

7468-7485.

　　11SunJ，HeZG，ChengG，etal.MultidrugresistanceP-glycoproteinCrucialsignificanceindispositionandinteraction[J].JMedsciMonit，2004，10

（1）：

RA5-14.