药物分析第七版期末考试重点.docx
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药物分析第七版期末考试重点
药物分析
第一章概况
药典基本结构凡例正文附录索引(中英文)
凡例解释和正确使用CHP进行质量检定的基本原则,并对有关共性问题进行规定
1)名称及编排
2)项目与要求
3)检验方法和限度
4)标准品、对照品
用于鉴别、检查和含量测定的标准物质。
不包括色谱用的内标
标准品:
是指用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质,按效价单位或ug计。
对照品:
除另有规定外,均按干燥品或无水物计算后使用。
5)计量法定计量单位
6)精确度取样量的准确度和实验精密度
精密称定:
准确至所取重量的千分之一
称定:
准确至所取重量的百分之一
取用量约若干:
指该量不得超过规定量的正负10%。
精密量取:
量取体积的准确度应符合该体积移液管的精密度要求
称取:
根据数据的有效数位确定
分别称取:
2g2.0g2.00g
则可称:
1.5-2.0g1.95-2.05g1.995g-2.005g
量取:
用两桶或按照量取体积的有效数位选用量具
恒重:
供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg以下的重量。
按干燥品计算:
除另有规定外,应取未经干燥的供试品进行试验,测得干燥失重后,再在计算式从取用量中扣除
空白试验:
不加供试品或以等量溶剂替代供试液,同法操作所得结果。
第二章药物的鉴别试验
目的:
项目:
1.性状外观溶解度物理常数(熔点m.p,
比旋度:
在一定波长与温度下,偏振光透过长1dm且每1ml中含有旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度
吸收系数:
在给定的波长,溶剂温度等条件下,吸光物质在单位浓度,单位液层厚度时的吸收度)
2.一般鉴别试验(generalidentificationtestGIT)根据某一类药物的化学结构或物化性质,通过化学反应鉴别药物的真伪。
只能证实药物的类别,不能证实是哪一种药物,区别不同类别的药物。
仅适用于确认单一的化学药物。
3.专属鉴别试验(SPECIFICIDENTIFICATIONTEST,SIT)
在git的基础上进行,根绝每一种药物在化学结构和理化性质上的特殊性差异,采用更灵敏、选择性更强的反应,进一步鉴别药物的真伪。
区别同类药物。
方法验证:
化学法,光谱法,色谱法,生物学法
最低检出量:
应用某一反应,在一定反应条件下,能观测除反应结果所需的供试品的最小量。
空白试验:
消除试剂和器皿可能带来的影响
对灵敏度很高的鉴别试验,很重要
提高反应灵敏度的方法:
消除干扰
改进观测方法
加入少量与水互不相容的有机溶剂,颜色加深,易观察
第三章药物的杂质检查
第一节、杂质来源:
①生产过程中引入(合成药,药物制剂的生产过程中,引入溶剂、酸碱性试剂、催化剂,从金属工具中引入金属杂质,引入低效无效的药物异构体或晶型)
②贮藏过程中引入,(保存不善或贮藏时间过长,微生物作用,外界条件影响导致水解、氧化、霉变、异构化、晶型改变)
杂质限量:
含义,在不影响药物的疗效和不产生毒性的情况下,药物中可允许的咋质量。
即药物中允许杂质存在的最大量。
杂质限量检查:
不要求测定杂质的含量,只需检查杂质是否超过限量。
方法:
①对照法:
去一定量被检杂质的标准溶液与一定量供试品在相同条件下处理后,比较反应结果。
特点:
注意平行操作,不需知道杂质的准确含量
杂质限量=(杂质最大允许量/供试品量)*100%
=【(标准溶液的浓度*标准溶液的体积)/供试品量】*100%
②灵敏度控制法,在供试品溶液中键入试剂,一定条件下反应
后,观察有无正反应出现。
以不出现正反应为合格。
特点:
不需对照品。
③比较法:
取供试品一定量依法检查,测定特定待检杂质的参数(如吸光度)与规定的限量进行比较,不得更大
一般杂质的检查方法,
1化物检查法
原理
方法1、反应试剂:
AGNO3试液,2、标准溶液:
标准NACL溶液,每1ml相当于10ug的cl-适宜比浊浓度:
50-80ugcl-/ml
原理
氯化物
AGNO3
硫酸盐
Bacl2
铁盐
SCN-
重金属
硫代硫酸钠
砷盐
古蔡式法zn+hcl产生H2,+AsSO33-生成ASH3
炽浊残渣
硫酸灰分
残留溶剂
加入过硫酸钠的作用,将fe2+氧化成fe3+,防止光纤将硫氰酸铁离子还原或分解
第四章药物定量分析与分析方法验证
药物定量分析方法:
一、容量分析法二、光谱分析法三、色谱分析法
一、容量分析法1.关键:
准确地确定等当点(滴定液与被测药物完全作用,反应达到化学计量点即等当点)2.滴定误差:
滴定终点与等当点之间的误差3.特点简便,快速,精密、准确专属性、灵敏度差常用于化学原料药的含测
滴定度T:
每ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量(mg)
aA+bB⇌cC
T=m×(a/b)×M(mg/ml)
百分含量计算
直接滴定:
含量%=
生成物滴定法:
•剩余滴定(做空白实验):
先加入定量过量的滴定液A,当与被测药物反应完全后,再用另一滴定液B回滴剩余的滴定液A
含量%=
:
空白试验消耗滴定液B的体积
:
样品测定消耗滴定液B的体积
二、光谱分析法
(一)UV-Vis分光光度法
1.Lambert-Beer定律
A=CL
:
百分吸收系数
2.特点:
较灵敏、较准确;专属性差
3.仪器校正和检定
⏹波长校正:
仪器使用前校正
⏹杂散光的检查
⏹吸收度准确度的检定:
用重铬酸钾的硫酸溶液检定
⏹对溶剂的要求:
截止波长,纯度
溶剂在所选波长附近的吸收度应不超过一定值。
空气为空白
4.测定
⏹核对检测波长:
供试品的实际吸收峰波长是否与药典给出的波长一致(±2nm)
如果不一致,可能与试样的真伪、纯度及仪器波长的准确度有关.
⏹以配制供试品溶液的同批溶剂为空白
⏹供试品溶液:
吸收度0.3-0.7;溶质没有离解、聚合等
⏹选择合适的定量方法测定
对照品比较法比色法
吸收系数法计算分光光度法
(二)荧光分析法
1.特点:
灵敏度高于UV;荧光淬灭;干扰多
⏹应在低浓度溶液中进行
Ø高浓度:
产生内滤光效应和自吸收现象线性偏离
内滤光效应:
溶液中存在能吸收激发光和荧光的物质,使荧光强度减少。
⏹空白试验排除干扰
溶剂纯度,溶液中的微粒、溶氧、pH、温度、光照等
⏹校正仪器灵敏度:
供试品对激发光稳定:
用待测物的对照品溶液校正
供试品对激发光不稳定:
采用激发、发射光谱与供试品近似且稳定的物质校正
蓝色荧光---硫酸奎宁的稀硫酸溶液
黄绿色荧光---荧光素钠水溶液
红色荧光---罗丹明B水溶液
2.含量测定
•对照法:
荧光强度与药物浓度线性关系良好时用
Cx=×Cr
•标准曲线法:
荧光强度与浓度明显偏离线性时用
三、色谱分析法
特点:
高效,快速,高灵敏度,高专属性
1.HPLC法
⏹最常用固定相:
octadecylsilane-bondedsilicagel
十八烷基硅烷键合硅胶(ODS或C18)
⏹流动相及其pH:
RP-HPLC首选甲醇-水,乙腈-水
pH2-8(以硅胶为基质的键合固定相)
⏹柱温、检测器:
室温、紫外检测器
固定相种类、流动相组分和检测器类型不得任意改变外
系统适用性试验
色谱柱的理论塔板数色谱峰的分离度色谱系统的重复性色谱峰的拖尾因子
⏹药物分析中常用的HPLC定量方法:
–内标法:
内标校正曲线法
内标一点法:
对照法
内标校正因子法
–外标法:
标准曲线法
外标一点法:
对照法
气相色谱法
药品标准中规定的色谱条件除固定液品种、检测器类型及特殊指定的色谱柱材料不得任意改变外
药物分析方法的验证:
根据分析项目的要求,预先设置一定的验证内容,并通过设计合理的试验来验证所建立的分析方法是否科学、合理。
保证分析结果的准确、可靠。
药品质量标准中需验证的分析项目:
鉴别试验
杂质限度或定量检查
原料药或制剂中有效成分的含量测定
制剂中其它成分的含量测定
含量均匀度、溶出度、释放度测定方法
验证内容:
准确度精密度
专属性检测限
定量限线性
范围耐用性
一、准确度accuracy
含义:
测定结果与真实值的接近程度
表示:
回收率
试验样品:
原料的含测:
药物的对照品
制剂的含测:
处方量的空白辅料+药物的对照品
已经测得含量的制剂+药物的对照品
杂质定量:
已经测得杂质含量的原料药或制剂+杂质对照品
溶出度测定:
空白溶出介质+药物的对照品
二.精密度precision
含义:
指在规定的测试条件下,对同一个均匀供试品,经多次
取样测定,所得结果之间的接近程度。
表示:
标准偏差SD
相对标准偏差relativestandarddeviationRSD
试验样品:
供试品
试验内容:
重复性、中间精密度、重现性
三.专属性specificity(选择性selectivity)
含义:
有其他成分(如杂质、辅料等)存在时,分析方法能准确测定
出被测物的特性,即分析方法排除各种干扰的能力。
表示:
对鉴别试验:
不含被测物的供试品,应呈负反应
对杂质检查和含量测定:
被测物应能与其它成分分离
给出代表性图谱,说明专属性
四.检测限limitofdetection,LOD
含义:
指供试品中被测物能被测定出的最低浓度或量。
反映分析方是否具有灵敏的检测能力,没有定量意义。
试验样品:
处方量的空白辅料+药物的对照品(对药物制剂)
药物的对照品(对原料药)
测定方法:
(1)目视法,标准偏差法
(2)信噪比法:
适用于能显示信号和基线噪音强度的仪器分析方法
LOD为S/N=3时的对应浓度或注入仪器的量
检测限验证:
浓度等于检测限的实际样品,进行分析,测试图谱
五.定量限limitofquantitation,LOQ
含义:
指供试品中被测物能被定量测定的最低浓度或量测定结果应有一定准确度和精密度
反映了分析方法定量测定的灵敏度
试验样品:
处方量的空白辅料+药物的对照品(对药物制剂)
药物的对照品(对原料药)
信噪比法测定:
S/N=10时,被测物浓度或注入仪器的量
定量限验证:
测试图谱,测试结果的准确度、精密度
六.线性linearity
含义:
在设计的“范围”内,测试结果与样品中待测物浓度或量直接呈正比关系的程度。
试验样品:
被测物的对照品
数据要求:
回归方程、相关系数和线性图,至少5个点,相关系数大于0.999
七.范围range
含义:
达到一定精密度、准确度和线性,分析方法适用的高、低限浓度或量的区间。
常见规定范围:
原料和制剂的含测:
测试浓度的80%~120%
制剂含量均匀度测定:
测试浓度的70%~130%
溶出度或释放度测定:
限度值的±20%
杂质的含测:
规定限度的±20%
试验样品:
供试品
八.耐用性robustness
含义:
当测定条件有小的变动时,测定结果不受影响的承受程度。
试验样品:
供试品
常见变动条件:
供试品溶液的稳定性
样品制备方法
HPLC中流动相组成的比例,pH,流速
色谱柱的厂牌、批号,柱温等
GC:
色谱柱的厂牌、批号,固定液和载体的类型,柱温等。
第五章体内药物分析概述
体内药物分析的特点
体内样品的特点
待测物浓度低、游离/结合物;干扰物多;样品数多、量小。
体内药物分析的特点
体内样品需要分离、浓集;分析方法需专属、灵敏;分析工作量大、复杂
1.血样
常用稳定剂:
酶抑制剂(NaF、三氯醋酸)抗氧剂
2.尿样
测定尿药浓度的目的:
药物剂量回收,药物清除率,药物代谢和生物利用度
尿样特点:
药物浓度较大但易变,体积大
采样:
常用时间尿
保存:
立即测定;4℃保存;放置较长时间需冷冻;加入防腐剂:
甲苯,氯仿,醋酸等
(二)常用预处理方法
1、体内样品中蛋白质的去除
(1)目的:
●去除蛋白质,释放结合型药物或代谢物,便于测定总浓度;
●预防提取过程中蛋白质发泡,减少乳化的形成;
●保护仪器性能。
(2)方法:
◆蛋白质沉淀法
•与水相混溶的有机溶剂:
乙腈,甲醇,丙酮,THF
•中性盐:
饱和硫酸铵,硫酸钠,磷酸钠,NaCl,枸橼酸盐
•强酸:
10%三氯醋酸,6%高氯酸
•热凝固法:
可将热变性蛋白质除去
◆酶解法
•适用于与蛋白质结合牢固及遇酸或遇热不稳定的药物
•常用蛋白水解酶中的枯草菌溶素(细菌性碱性蛋白分解酶)
2、体内样品中缀合物的水解缀合物(conjugate):
药物或代谢物与内源性物质(葡萄糖醛酸,硫酸等)结合生成的产物;极性大.
(1)目的:
使缀合物中的药物或代谢物游离,便于用有机溶剂提取测定尿液中药物的总量
3、体内样品中药物或代谢物的分离
定量分析方法的建立与验证
分析方法的选择:
首选色谱法色谱条件选择及优化
量方法的选择:
首选内标法
建立体内药物分析方法的基本步骤1.色谱条件的初步选择2.空白生物基质试验——方法特异性3.模拟体内样品试验——方法效能指标4.实际体内样品测试——方法特异性
体内定量分析方法的验证:
专属性准确度精密度定量限(定量下限)标准曲线及线性范围提取回收率样品稳定性
质量标准:
是用以检测药品质量是否达到用药要求所作的技术规定。
药品质量标准的分类:
国家药品标准1中华人民共和国药典(疗效确切生产成熟产品稳定)2局(部)颁标准3进口药品注册标准4临床试验用药品标准5监测期药品标准企业药品标准
3.鉴别
药典常用的鉴别方法:
•
(1)化学法优点:
操作简便、快速、成本低,应用广,缺点:
专属性差
(2)仪器分析法UV、IR、TLC、HPLC、GC、PC
•(3)理化常数测定法
•4、检查常用测定方法及其特点:
(1)重量分析法原料准确度高、精密度好灵敏度和专属性差,操作复杂
•分析法原料准确度高、精密度好灵敏度和专属性差
•(3)分光光度法:
原料、单方制剂的含测;含量均匀度、溶出度
•UV法荧光法:
灵敏度、专属性优于UV
•(4)色谱法
•原料、制剂
•HPLC:
准确度、精密度、灵敏度均较好,专属性强
•常选色谱柱:
ODS,硅胶,氨基键合硅胶柱
•首选检测器:
Vis-UV
•GC:
•常选固定液:
SE-30、OV-17、OV-101、SE-54、PEG-20M
•首选检测器:
FID
•6.贮藏
药品稳定性试验的分类及目的:
(1)影响因素试验
(2)除去包装,高温、高湿度、强光照射、其他破坏等试验
主要目的:
研究药物的固有稳定性及其影响因素,为贮藏条件提供依据。
(2)加速试验:
40oC,75%相对湿度
v上市药品包装
目的:
未进行室温或一般条件下长期稳定性试验前,预测药物的稳定性,保证临床研究或试生产期间的药品质量;为制剂设计、包装、贮藏等提供必要资料。
(3)长期试验:
25oC,60%相对湿度
上市药品包装,目的:
考察药品的有效期
(4)配伍稳定性试验:
制剂的稳定性试验有时考察
第七章药物制剂分析
1.药物制剂分析的特点1)鉴别特点①可采用原料的鉴别方法。
②当辅料干扰主药的鉴别时,不能直接采用。
先去除辅料或改用具有分离能力的方法。
2)检查特点杂质检查
①项目可能不同。
不需重复原料药的项目,而检查在制剂制备和贮藏过程中可能引入的杂质。
②限量要求不同。
剂型常规检查
保证均一性、安全性、有效性
3)含量测定特点测定方法可能不同
化学原料注重精密度;制剂注重选择性和灵敏度。
结果表示不同原料多用百分含量,制剂多用标示量。
含量合格要求不同
溶出度dissolutionrate:
系指药物从片剂、胶囊剂等制剂在规定条件下溶出的速率和程度
溶出度试验dissolutiontest:
测定药物制剂溶出度的过程,是一种模拟口服固体制剂在胃肠道中崩解和溶出的体外试验方法。
Noyes-Whitney方程
影响药物溶出的主要因素1药物粒子大小药物的理化性质溶解度、水合状态、晶型等制剂处方和工艺
3.药物制剂的含量均匀度检查
含量均匀度:
系指小剂量或单剂量的固体制剂、半固体制剂和非均相液体制剂的每片(个)含量符合标示量的程度。
检查目的:
控制小剂量或单剂量制剂中药物含量的均匀程度,保证给药剂量的准确性。
片剂分析常规检查:
重量差异崩解时限
糖类的干扰及其排除(排除:
过滤、改用弱氧化剂硫酸亚铁片剂:
铈量法;原料:
高锰酸钾法)
硬脂酸镁的干扰及其排除(掩蔽法:
酒石酸、草酸等掩蔽。
提取分离法:
有机溶剂提取药物UV法:
硬脂酸镁无UV吸收)
注射剂分析常规检查:
装量渗透摩尔浓度装量差异可见异物不溶性微粒无菌热原或细菌内毒素
◆抗氧剂的干扰及其排除避开VitC的最大吸收波长,可排除其对药物UV测定法的干扰。
加掩蔽剂丙酮或甲醛加酸使抗氧剂分解加弱氧化剂氧化溶
◆剂油的干扰及其排除有机溶剂稀释法有机溶剂提取法柱色谱法
第八章羧酸及其酯类药物的分析
结构与性质
羧基---酸性-OH、-OCOCH3:
邻位致活基团酸性增强邻位-OH:
分子内氢键酸性增强
酸性大小水杨酸>阿司匹林>苯甲酸>HAc>H2CO3>苯酚
酯基---水解性酸性介质:
不可能全部水解
过量碱(氢氧化钠和碳酸钠)存在,可水解完全
3)官能团反应特性含酚羟基、潜在酚羟基的水杨酸类与三氯化铁试液反应,显色
◆含芳伯氨基、潜在芳伯氨基重氮化反应、重氮化-偶合反应
◆含硫的丙磺舒分解生成硫化物
阿司匹林鉴定水解反应
与三氯化铁反应
含酚羟基或潜在酚羟基的药物,在中性或弱酸性条件下,可与FeCl3试液反应,生成类似紫色(紫色,紫堇色,紫红色)的配位化合物.
丙磺舒钠盐在pH5.0~6.0水溶液中与三氯化铁试液反应,生成米黄色沉淀
重氮化-偶合反应分解反应丙磺舒
特殊杂质:
乙酸苯酯水杨酸苯酯乙酰水杨酸苯酯,一定量阿司匹林在碳酸钠试液中溶解应澄清。
游离水杨酸水杨酸可直接与高铁盐反应呈色HPLC法
阿司匹林含量测定酸碱滴定法UV法HPLC法
氯贝丁酯的鉴别异羟肟酸铁反应KOHFe3+紫色
卡托普利的鉴别酰化反应HNO2红色
酮洛芬的鉴别缩合反应酮洛芬+二硝基苯肼偶氮化合物(橙色)
第九章巴比妥类药物的分析
环状丙二酰脲母核:
共性部分—与其它类药物区别
取代基:
特性部分
—区别各巴比妥类药物
巴比妥苯巴比妥
◆理化性质
◆1.弱酸性2.与重金属离子的反应3.紫外吸收光谱特征4.官能团反应特性
◆1.弱酸性
酰亚胺基上的氢受邻位羰基的影响,可以发生1,3-质子迁移,由酮式变为稀醇式。
pH10的碱性溶液:
5,5-二取代和1,5,5-三取代药物均发生一级电离
pH13的强碱性溶液(0.1mol/LNaOH):
5,5-二取代药物发生二级电离,共轭结构延长,最大吸收峰在255nm;
鉴别试验
一)丙二酰脲类鉴别反应一般鉴别反应,银盐反应的方法,铜盐反应的方法
◆利用不饱和取代基的鉴别试验--司可巴比妥钠
•与碘或溴试液的加成反应:
碘试液或溴试液褪色,与KMnO4的氧化还原反应:
碱性溶液中,巴比妥类药物将紫色的KMnO4,还原成棕色的MnO2
◆利用芳环取代基的鉴别试验--苯巴比妥
•硝化反应
含芳香取代基的巴比妥类+KNO3+H2SO4黄色硝基化合物
•与硫酸-亚硝酸钠的反应苯巴比妥+硫酸-亚硝酸钠,橙黄色产物,随即变为橙红色。
•与甲醛-硫酸的反应
苯巴比妥+甲醛-硫酸玫瑰红色产物
含量测定
银量法
原理
•巴比妥类药物与硝酸银定量反应生成溶于水的一银盐。
反应比为1:
1
•稍过量的银离子与药物形成难溶性的二银盐沉淀,溶液变混浊,指示滴定终点。
•以银-玻璃电极电位法指示终点,准确。
溴量法
定量反应+Br2剩余滴定+KI置换滴定+硫代硫酸钠+淀粉
第十章芳胺类药物的分析
◆对氨基苯甲酸酯类药物
基本结构:
芳酰胺类药物
基本结构
共性:
芳酰氨基
理化性质:
芳伯氨基特性、水解后显芳伯氨基特,重氮化-偶合反应,与芳醛缩合形成Schiff碱的反应
Schiff碱:
伯胺和醛、酮反应生成的化合物
ArCHO+H2N-R→ArCH=NR+H2O
氧化变色
三.鉴别试验
(一)重氮化-偶合反应
※盐酸丁卡因
酸性溶液中,与亚硝酸钠反应
N-亚硝基化合物的乳白色沉淀
盐酸普鲁卡因
重金属离子
1.与铜和钴离子的反应,Na2CO3试液中:
(ChP)
盐酸利多卡因+CuSO4→蓝紫色配位化合物
→转入氯仿中呈黄色
•盐酸酸性溶液中:
(USP),盐酸利多卡因+CoCl2→亮绿色钴盐
三氯化铁反应
亚硝酸钠滴定法1.原理Ar-NH2+NaNO2+2HCl→
Ar-N2+Cl-+NaCl+2H2O(定量)
2.测定条件
1)加入适量KBr,加快反应速度
2)酸的种类和用量HCL
3)反应温度室温
4)滴定速度
滴定终点:
常用指示剂:
KI-淀粉糊剂或指示液
缺点:
•易混淆终点:
未达终点时,KI在滴定液的强酸性条件下被空气中的氧氧化析出碘,与淀粉显蓝色,多次外试损失样品
第十一章苯乙胺类药物的分析
(一)基本结构
●酚羟基特性:
与Fe3+等重金属离子配合呈色,易氧化呈色
●芳环侧连的氨基醇结构:
双缩脲反应在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物的反应
脂肪伯氨基:
与亚硝基铁氰化钠反应
•含酚羟基的本类药物,易被氧化剂氧化
•氧化剂:
碘过氧化氢铁氰化钾
三.特殊杂质检查
酮体在310nm波长处有最大吸收
第十二章甾体激素类药物的分析
基本结构
均含环戊烷并多氢菲母核
◆甾体化合物取代基构型的确定
Ø甾体分子的4个环处于同一均等平面
Ø若将18-,19-位的角甲基置于平面之上,则:
•伸在平面之上的氢原子或取代基为β构型(实线表示)
•处于平面之下的氢原子或取代基为α构型(虚线表示)
•第二节鉴别试验
•
(一)官能团反应
1.C17-α-醇酮基的呈色反应
⏹鉴别肾上腺皮质激素:
α-醇酮基:
强还原性,能与氧化剂反应
Ø碱性