食品中总汞检验标准操作规程.docx

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食品中总汞检验标准操作规程

食品中总汞检验标准操作规程

文件编号

SOP-ZL

修订号

执行日期

起草人

审核人

批准人

分发部门

质量管理部

目的：

建立食品中总汞检验的标准操作程序，使操作过程规范化。

适用范围：

适用于食品中总汞的检验操作。

责任人：

检验员、质量管理部主管。

内容：

1范围

本标准规定了各类食品中总汞的测定方法。

本标准适用于各类食品中总汞的测定。

原子荧光光谱分析法:

检出限0.15Kg/kg，标准曲线最佳线性范围。

0μg/L-60μg/L;冷原子吸收法的检出限:

压力消解法为0.4μg/kg，其他消解法为10μg/kg;比色法为25μg/kg。

第一法原子荧光光谱分析法

2原理

试样经酸加热消解后，在酸性介质中，试样中汞被硼氢化钾（KBH4）或硼氢化钠（NaBH4）还原成原子态汞，由载气（氨气）带人原子化器中，在特制汞空心阴极灯照射下，基态汞原子被激发至高能态，在去活化回到基态时，发射出特征波长的荧光，其荧光强度与汞含量成正比，与标准系列比较定量。

3试剂

3.1硝酸（优级纯）。

3.230%过氧化氢。

3.3硫酸（优级纯）。

3.4硫酸+硝酸+水（1+1+8）:

量取10m1硝酸和10mL硫酸，缓缓倒人80mL水中，冷却后小心混匀。

3.5硝酸溶液（1+9）:

量取50mL硝酸，缓缓倒人450mL水中，混匀。

3.6氢氧化钾溶液（5g/L）:

称取5.0g氢氧化钾，溶于水中，稀释至1000mL,混匀。

3.7硼氢化钾溶液（5g/L）:

称取5.0g硼氢化钾，溶于5.0g/L的氢氧化钾溶液中，并稀释至1000mL，混匀，现用现配。

3.8汞标准储备溶液:

精密称取0.1354g于干燥过的二氯化汞，加硫酸+硝酸+水混合酸（1+1+8）溶解后移人100mL容量瓶中，并稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于1mg汞。

3.9汞标准使用溶液:

用移液管吸取汞标准储备液（1mg/mL）1mL于100mL容量瓶中，用硝酸溶液（1+9）稀释至刻度，混匀，此溶液浓度为10f}g/mL。

在分别吸取10（ag/mL汞标准溶液1mL和5mL于两个100mL容量瓶中，用硝酸溶液（1+9）稀释至刻度，混匀，溶液浓度分别为100ng/mL和500ng/mL，分别用于测定低浓度试样和高浓度试样，制作标准曲线。

4仪器

4.1双道原子荧光光度计。

4.2高压消解罐（100mL容量）。

4.3微波消解炉。

5分析步骤

5.1试样消解

5.1.1高压消解法

本方法适用于粮食、豆类、蔬菜、水果、瘦肉类、鱼类、蛋类及乳与乳制品类食品中总汞的测定。

5.1.1粮食及豆类等干样:

称取经粉碎混匀过40目筛的干样。

.2g-1.00g，置于聚四氟乙烯塑料内罐中，加5mL硝酸，混匀后放置过夜，再加7mL过氧化氢，盖上内盖放人不锈钢外套中，旋紧密封。

然后将消解器放人普通干燥箱（烘箱）中加热，升温至120℃后保持恒温2h--3h，至消解完全，自然冷至室温。

将消解液用硝酸溶液（1十9）定量转移并定容至25mL,摇匀。

同时做试剂空白试验。

待测。

5.1.1.2蔬莱、瘦肉、鱼类及蛋类水分含量高的鲜样用捣碎机打成匀浆，称取匀浆1.00g～5.00g，置于聚四氟乙烯塑料内罐中，加盖留缝放于65℃鼓风干燥烤箱或一般烤箱中烘至近干，取出，以下按5.1.1.1自“加5mL硝酸⋯⋯”起依法操作。

5.1.2徽波消解法

称取0.10g～0.50g试样于消解罐中加人1mL-5mL硝酸,1mL-2mL过氧化氢，盖好安全阀后，将消解罐放人微波炉消解系统中，根据不同种类的试样设置微波炉消解系统的最佳分析条件（见表1和表2），至消解完全，冷却后用硝酸溶液（1十9）定量转移并定容至25mL（低含量试样可定容至10mL）,混匀待测。

5.2标准系列配制

5.2.1低浓度标准系列:

分别吸取100ng/mL汞标准使用液0.25、0.50、1.00、2.00、2.50mL于25mL容量瓶中，用硝酸溶液（1+9）稀释至刻度，混匀。

各自相当于汞浓度1.00、2.00、4.00、8.00、10.00ng/mL。

此标准系列适用于一般试样测定。

5.2.2高浓度标准系列:

分别吸取500ng/mL汞标准使用液0.25、0.5、1.00、1.50、2.00mL于25mL容量瓶中，用硝酸溶液（1+9）稀释至刻度，混匀。

各自相当于汞浓度5.00、10.00、20.00、30.00、、40.00ng/mL。

此标准系列适用于鱼及含汞量偏高的试样测定。

5.3测定

5.3.1仪器参考条件:

光电倍增管负高压:

240V;汞空心阴极灯电流:

30mA;原子化器:

温度:

300℃,高度8.0mm;氩气流速:

载气500mL/min,屏蔽气1000mL/min;测量方式:

标准曲线法;读数方式:

峰面积，读数延迟时间：

1.0s;硼氢化钾溶液加液时间:

8.0s;标液或样液加液体积2ml。

5.3.2测定方法:

根据情况任选以下一种方法。

5.3.2.1浓度测定方式测量:

设定好仪器最佳条件，逐步将炉温升至所需温度后，稳定10min-20min后开始测量。

连续用硝酸溶液（1+9）进样，待读数稳定之后，转人标准系列测量，绘制标准曲线。

转人试样测量，先用硝酸溶液（1+9）进样，使读数基本回零，再分别测定试样空白和试样消化液，每测不同的试样前都应清洗进样器。

试样测定结果按公式

（1）计算。

5.3.2.2仪器自动计算结果方式测量:

设定好仪器最佳条件，在试样参数画面输人以下参数:

试样质量（g或mL）,稀释体积（mL），并选择结果的浓度单位，逐步将炉温升至所需温度，稳定后测量。

连续用硝酸溶液（1+9）进样，待读数稳定之后，转人标准系列测量，绘制标准曲线。

在转人试样测定之前，再进人空白值测量状态，用试样空白消化液进样，让仪器取其均值作为扣底的空白值。

随后即可依法测定试样。

测定完毕后，选择“打印报告，，即可将测定结果自动打印。

6结果计算

7精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

第二法冷原子吸收光谱法

8原理

汞蒸气对波长253.7nm的共振线具有强烈的吸收作用。

试样经过酸消解或催化酸消解使汞转为离子状态，在强酸性介质中以氯化亚锡还原成元素汞，以氮气或干燥空气作为载体，将元素汞吹人汞测定仪，进行冷原子吸收测定，在一定浓度范围其吸收值与汞含量成正比，与标准系列比较定量。

（一）压力消解法

9试剂

9.1硝酸。

9.2盐酸。

9.3过氧化氢（30%）。

9.4硝酸（0.5+99.5）:

取0.5mL硝酸慢慢加人50mL水中，然后加水稀释至100mL。

9.5高锰酸钾溶液（50g/L）:

称取5.0g高锰酸钾置于100mL棕色瓶中，以水溶解稀释至100mL。

9.6硝酸一重铬酸钾溶液:

称取0.05g重铬酸钾溶于水中，加人5mL硝酸，用水稀释至100ml。

9.7氯化亚锡溶液（100g/L）:

称取10g氯化亚锡溶于20mL盐酸中，以水稀释至100mL，临用时现配。

9.8无水氯化钙。

9.9汞标准储备液:

准确称取0.1354g经干燥器干燥过的二氧化汞溶于硝酸一重铬酸钾溶液中，移人100mL容量瓶中，以硝酸一重铬酸钾溶液稀释至刻度。

混匀。

此溶液每毫升含1.0mg汞。

9.10汞标准使用液:

由1.0mg/mL汞标准储备液经硝酸一重铬酸钾溶液稀释成2.0ng/mL,4.0ng/mL,6.0ng/mL,8.0ng/mI.,10.0ng/mL的汞标准使用液。

临用时现配。

10仪器

所用玻璃仪器均需以硝酸（1+5）浸泡过夜，用水反复冲洗，最后用去离子水冲冼干净。

10.1双光束测汞仪（附气体循环泵、气体干燥装置、汞蒸气发生装置及汞蒸气吸收瓶）。

10.2恒温干燥箱。

10.3压力消解器、压力消解罐或压力溶弹。

11分析步骤

11.1试样预处理

11.1.1在采样和制备过程中，应注意不使试样污染。

11.1.2粮食、豆类去杂质后，磨碎，过20目筛，储于塑料瓶中，保存备用。

11.1.3蔬菜、水果、鱼类、肉类及蛋类等水分含量高的鲜样用食品加工机或匀浆机打成匀浆，储于塑料瓶中，保存备用。

11.2试样消解（可根据实验室条件选用以下任何一种方法消解）

压力消解罐消解法:

称取1.00g-3.00g试样（干样、含脂肪高的试样<1.00g，鲜样<3.00g或按压力消解罐使用说明书称取试样）于聚四氟乙烯内罐，加硝酸2mL-4ml,浸泡过夜。

再加过氧化氢（30%）2mL-3mL（总量不能超过罐容积的三分之一）。

盖好内盖，旋紧不锈钢外套，放人恒温干燥箱，120℃～140℃保持3h-4h，在箱内自然冷却至室温，用滴管将消化液洗入或过滤人（视消化后试样的盐分而定）10.0mL容量瓶中，用水少量多次洗涤罐，洗液合并于容量瓶中并定容至刻度，混匀备用;同时作试剂空白。

11.3测定

11.3.1仪器条件:

打开测汞仪，预热1h-2h，并将仪器性能调至最佳状态。

11.3.2标准曲线绘制:

吸取上面配制的汞标准使用液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ng/ml各5.0mL（相当于10.0ng,20.0ng,30.0ng,40.0ng,50.0ng）置于测汞仪的汞蒸气发生器的还原瓶中，分别加人1.0mL还原剂氯化亚锡（100g/1-）迅速盖紧瓶塞，随后有气泡产生，从仪器读数显示的最高点测得其吸收值，然后，打开吸收瓶上的三通阀将产生的汞蒸气吸收于高锰酸钾溶液（50g/L）中，待测汞仪上的读数达到零点时进行下一次测定并求得吸光值与汞质量关系的一元线性回归方程。

11.3.3试样测定:

分别吸取样液和试剂空白液各5.0mL置于测汞仪的汞蒸气发生器的还原瓶中，以下按11.3.2自“分别加人1.0mL还原剂氯化亚锡⋯⋯”起进行。

将所测得其吸收值，代人标准系列的一元线性回归方程中求得样液中汞含量。

12结果计算

13精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20肠。

（二）其他消化法

14试剂

14.1硝酸。

14.2硫酸。

14.3氯化亚锡溶液（300g/L）:

称取30g氯化亚锡（SnCl2·2H20），加少量水，并加2mL硫酸使溶解后，加水稀释至100mL，放置冰箱保存。

14.4无水氯化钙:

干燥用。

14.5混合酸（1+1+8）量取10mL硫酸，再加人10mL硝酸，慢慢倒人50mL水中，冷后加水稀释至100mL。

14.6五氧化二钒。

14.7高锰酸钾溶液（50g/L）;配好后煮沸10min，静置过夜，过滤，贮于棕色瓶中。

14.8盐酸经胺溶液（200g/l.）,

14.9汞标准储备溶液:

准确称取0.1354g于干燥器干燥过的二氯化汞，加混合酸（1+1+8）溶解后移人100mL容量瓶中，并稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于1.0mg汞。

14.10汞标准使用液:

吸取1.0mL汞标准储备溶液，置于100mL容量瓶中，加混合酸（1+1+8）稀释至刻度，此溶液每毫升相当于10.0μg汞。

再吸取此液1.0mL置100mL容量瓶中，加混合酸（1-{-1+8）稀释至刻度，此溶液每毫升相当于0.10μg汞，临用时现配。

15仪器

15.1消化装置。

15.2测汞仪，附气体干燥和抽气装置。

15.3汞蒸气发生器，见图1

16分析步骤

16.1试样消化

16.1.1回流消化法

16.1.1.1粮食或水分少的食品:

称取10.00g试样，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒，加45mL硝酸、10mL硫酸，转动锥形瓶防止局部炭化。

装上冷凝管后，小火加热，待开始发泡即停止加热，发泡停止后，加热回流2h。

如加热过程中溶液变棕色，再加5mL硝酸，继续回流2h，放冷后从冷凝管上端小心加20mL水，继续加热回流10min，放冷，用适量水冲洗冷凝管，洗液并人消化液中，将消化液经玻璃棉过滤于100mL容量瓶内，用少量水洗锥形瓶、滤器，洗液并人容量瓶内，加水至刻度，混匀。

按同一方法做试剂空白试验。

16.1.1.2植物油及动物油脂:

称取5.00g试样，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒，加人7mL硫酸，小心混匀至溶液颜色变为棕色，然后加40mL硝酸，装上冷凝管后，以下按16.1.1.1自“小火加热......”起依法操作。

16.1.1.3薯类、豆制品:

称取20.00g捣碎混匀的试样（薯类须预先洗净晾干），置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及30mL硝酸,5ml硫酸，转动锥形瓶防止局部炭化。

装上冷凝管后，以下按16.1.1.1自“小火加热.....”起依法操作。

16.1.1.4肉、蛋类:

称取10.00g捣碎混匀的试样，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及30mL硝酸、5mL硫酸，转动锥形瓶防止局部炭化。

装上冷凝管后，以下按16.1,1.1自“小火加热....”起依法操作

16.1.1.5牛乳及乳制品:

称取20.00g牛乳或酸牛乳，或相当于20.00g牛乳的乳制品（2.4g全脂乳粉、8g甜炼乳，5g淡炼乳），置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及30mL硝酸，牛乳或酸牛乳加10mL硫酸，乳制品加5mL硫酸，转动锥形瓶防止局部炭化。

装上冷凝管后，以下按16.1.1工自“小火加热....”起依法操作。

16.1.2五舰化二钒消化法

本法适用于水产品、蔬菜、水果。

16.L2.1取可食部分，洗净，晾干，切碎，混匀。

取2.50g水产品或10.00g蔬菜、水果，置于50mL～100m1.锥形瓶中，加50mg五氧化二钒粉末，再加8mL硝酸，振摇，放置4h，加5mL硫酸，混匀，然后移至140℃砂浴上加热，开始作用较猛烈，以后渐渐缓慢，待瓶口基本上无棕色气体逸出时，用少量水冲洗瓶口，再加热5min，放冷，加5mL高锰酸钾溶液（50g/L），放置4h（或过夜），滴加盐酸经胺溶液（200g/L）使紫色褪去，振摇，放置数分钟，移人容量瓶中，并稀释至刻度。

蔬菜、水果为25mL，水产品为100mL。

16.1.2.2按同一方法进行试剂空白试验。

16.2测定

16.2.1用回流消化法制备的试样消化液

16.2.1.1吸取10.0mL试样消化液，置于汞蒸气发生器内，连接抽气装置，沿壁迅速加人3mL氯化亚锡溶液（300g/L），立即通过流速为1.0I丫min的氮气或经活性炭处理的空气，使汞燕气经过氯化钙干燥管进人测汞仪中，读取测汞仪上最大读数，同时做试剂空白试验。

16.2.1.2吸取0,0.10,0.20,0.30,0.40,0.50mL汞标准使用液（相当0,0.01,0.02,0.03,0.04,。

05pg汞），置于试管中，各加10mL混合酸（1+1+8），以下按16.2.1.1自“置于汞蒸气发生器内......”起依法操作，绘制标准曲线。

16.2.2用五叔化二钒消化法制备的试样消化液

16.2.2.1吸取10.0mL试样消化液，以下按16.2.1.1的方法操作。

16.2.2.2吸取0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL汞标准使用液（相当。

0.1,0.2,0.3,0.4,0.5jig汞），置于6个50mL容量瓶中，各加1mL硫酸（1+1）,1mL高锰酸钾溶液（50g/L），加20mL水，混匀，滴加盐酸经胺溶液（200g/L）使紫色褪去，加水至刻度混匀，分别吸取10.0mL（相当。

0.02,0.04,0.06,0.08,0.10kg汞），以下按16.2.1.1自“置于汞蒸气发生器内.....”起依法操作，绘制标准曲线。

17结果计算

18精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。

第三法二硫膝比色法

19原理

试样经消化后，汞离子在酸性溶液中可与二硫膝生成橙红色络合物，溶于三氯甲烷，与标准系列比较定量。

20试剂

20.1硝酸。

20.2硫酸。

20.3氨水。

20.4三氯甲烷:

不应含有氧化物。

20.5硫酸（1+35）:

量取5mL硫酸，缓缓倒人150mL水中，冷后加水至180mL,

20.6硫酸（1+19）,量取5mL硫酸，缓缓倒人水中，冷后加水至100mL,

20.7盐酸轻胺溶液（200g/L）:

吹清洁空气，除去溶液中含有的微量汞。

20.8澳醉香草酚蓝一乙醇指示液（1g/L）。

20.9二硫腙一三氯甲烷溶液（0.5g/L），保存冰箱中，必要时用下述方法纯化。

称取0.5g研细的二硫踪，溶于50mL三氛甲烷中，如不全溶，可用滤纸过滤于250mL分液漏斗中，用氨水（1+99）提取三次，每次100mL，将提取液用棉花过滤至500mL分液漏斗中，用盐酸（1+1）调至酸性，将沉淀出的二硫踪用三抓甲烷提取2次一3次，每次20mL，合并三氯甲烷层，用等量水洗涤两次，弃去洗涤液，在50℃水浴上蒸去三氯甲烷。

精制的二硫粽置硫酸干燥器中，干燥备用，或将沉淀出的二硫腙用200,200,100mL三氯甲烷提取三次，合并三抓甲烷层为二硫膝溶液。

20.10二硫脖使用液:

吸取1.0mL二硫脍溶液，加三氯甲烷至10mL,混匀。

用1cm比色杯，以三氯甲烷调节零点，于波长510nm处测吸光度（A），用式（4）算出配制100mL二硫踪使用液（70%透光率）所需二硫踪溶液的毫升数（V）

20.11汞标准溶液:

准确称取0.1354g经干燥器干燥过的二氯化汞，加硫酸（1+35）使其溶解后，移人100mL容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于1.0mg汞。

20.12汞标准使用液:

吸取1.0mL汞标准溶液，置于100mL容量瓶中，加硫酸（1+35）稀释至刻度，此溶液每毫升相当于10.0Fag汞。

再吸取此液5.0mL于50mL容量瓶中，加硫酸（1+35）稀释至刻度，此溶液每毫升相当于1.0}Ag汞。

21仪器

21.1消化装置。

21.2可见分光光度计。

22分析步骤

22.1试样消化

22.1.1粮食或水分少的食品:

称取20.00g试样，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及80mL硝酸、15mL硫酸，转动锥形瓶，防止局部炭化。

装上冷凝管后，小火加热，待开始发泡即停止加热，发泡停止后加热回流2h。

如加热过程中溶液变棕色，再加5mL硝酸，继续回流2h，放冷，用适量水洗涤冷凝管，洗液并人消化液中，取下锥形瓶，加水至总体积为150mL。

按同一方法做试剂空白试验。

22.1.2植物油及动物油脂:

称取10.00g试样，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及15mL硫酸，小心混匀至溶液变棕色，然后加人45mL硝酸，装上冷凝管后，以下按22.工.I自“小火加热.....’，起依法操作。

22.1.3蔬菜、水果、薯类、豆制品:

称取50.00g捣碎、混匀的试样（豆制品直接取样，其他试样取可食部分洗净、晾干），置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及45mL硝酸、15mL硫酸，转动锥形瓶，防止局部炭化。

装上冷凝管后，以下按22.1.1自“小火加热.....”起依法操作。

22.1.4肉、蛋、水产品:

称取20.00g捣碎混匀试样，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及45mL硝酸、15mL硫酸，装上冷凝管后，以下按21.1.1自“小火加热......”起依法操作。

22.1,5牛乳及乳制品:

称取50.00g牛乳、酸牛乳，或相当于50.00g牛乳的乳制品（6g全脂乳粉，20g甜炼乳，12.5g淡炼乳），置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及45mL硝酸，牛乳、酸牛乳加15mL硫酸，乳制品加10mL硫酸，装上冷凝管，以下按22.1.1自“小火加热......”起依法操作。

22.2测定

22.2.1取21.1.1-21.1.5消化液（全量），加20mL水，在电炉上煮沸10

min,除去二氧化氮等，放冷。

22.2.2于试样消化液及试剂空白液中各加高锰酸钾溶液（50g/L）至溶液呈紫色，然后再加盐酸轻胺溶液（200g/L）使紫色褪去，加2滴察香草酚蓝指示液，用氨水调节pH，使橙红色变为橙黄色（pHl-2）。

定量转移至125mL分液漏斗中。

22.2.3吸取0,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0kL汞标准使用液（相当于0,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0kg汞），分别置于125mI一分液漏斗中，加10mL硫酸（1+19），再加水至40mL,混匀。

再各加1mL盐酸羚胺溶液（200g/L），放置20min，并时时振摇。

22.2.4于试样消化液、试剂空白液及标准液振摇放冷后的分液漏斗中加5.0mL二硫踪使用液，剧烈振摇2min，静置分层后，经脱脂棉将三氯甲烷层滤人1cm比色杯中，以三氯甲烷调节零点，在波长490nm处测吸光度，标准管吸光度减去零管吸光度，绘制标准曲线。

23结果计算

24精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

25编制依据：

GB5009.17-2003食品中总汞及有机汞的测定。