[S]+Km≈Km，此时呈一级反应，反应初速度v=k[S]。
如果能准确测定反应的初速度（v），采用标准浓度对照法即可求得待测物的浓度。
二酶测定技术
（一）、定时法测定酶活性
定时法是根据固定时间内底物消耗量或产物的生成量计算酶活性，这是早期测定酶活性浓度的方法。
用定时法准确测定酶活性浓度，必须了解不同酶促反应速率和时间的关系，应先做预试验找出酶促反应速率恒定的时期，确定线性时间，然后在这段时间进行测定，避开延滞期和一级反应。
（二）连续监测法测定酶活性
连续测定酶反应过程中某一反应产物或底物的浓度随时间变化的多点数据，求出酶反应初速度，间接计算酶活性浓度的方法称为连续监测法。
1.直接法在不终止酶促反应条件下，直接通过测定反应体系中底物或产物理化特性的变化如吸光度、荧光、旋光性、pH、电导率、粘度等计算出酶活性浓度。
只有底物与产物之间，在理化性质等方面有显著差异时，才能使用直接法。
2.间接法采用酶偶联反应是间接法测定酶活性的主要技术特点。
反应。
（三）干扰因素
1.其他酶和物质的干扰
2.酶的污染
3.非酶反应
4.分析容器的污染
5.沉淀形成
（四）血清酶活性浓度测定的条件的优化
测定酶活性浓度方法所选择的测定条件应是酶促反应的“最适条件”，即指在所选择温度下能使酶促反应的催化活性达到最大。
主要与下述一些因素有关：
①如底物、辅因子、活化剂、缓冲液和变构剂种类和浓度；②指示酶和辅助酶的种类和浓度；
③反应混合液的pH和离子强度；
④其他可变因素，如已知抑制剂的去除。
1.方法选择尽可能采用连续监测法；尽量减少操作步骤。
2.仪器和设备明确规定仪器和设备的各种性能规范。
3.试剂化学试剂必须具有一定纯度；试验用水最好是纯水或双蒸水。
4.自动生化分析仪参数的设置
（1）方法类型终点法或连续监测法。
反应方向分正向/向上/+（吸光度增加）或负向/向下/-（吸光度减低）。
（2）波长选择酶促反应体系吸光度最大的波长
（3）样品量与试剂量应考虑测定的灵敏度和测定上限选用合适的样品与试剂体积比。
一般推荐样品与试剂体积比为1:
10。
（4）稀释水量
（5）反应时间线性反应时间范围愈宽者，愈适于临床应用。
（6）孵育时间
（7）延迟时间
（8）监测时间酶活性测定的连续监测法至少90~120s或至少4点（3个），少于3个不能称为连续监测法，因为不能计算线性度（不知是否为线性反应）。
（9）试剂吸光度上、下限
（10）底物耗尽限额
（11）线性度
（12）试剂空白速率
（13）线性范围按试剂质量而设置，超过范围应增加样品量或稀释后重测。
（14）计算因子F值（或系数K）
（五）部分分析前因素对酶活性测定的干扰
1.溶血部分酶在红细胞膜或红细胞内的浓度远高于细胞外（如乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、己糖激酶等），少量血细胞的破坏就可能引起血清中酶明显升高。
2.抗凝剂
草酸盐、柠檬酸盐和EDTA等抗凝剂为金属螯合剂，可抑制需Ca2+的AMY，也可抑制需Mg2+的CK和5’-NT；
草酸盐既可与丙酮酸或乳酸发生竞争性抑制，又能与LD及
NADH或NAD+形成复合物，从而抑制催化的还原或氧化反应。
柠檬酸盐、草酸盐对CP、ChE均有抑制作用。
3.标本储存温度大部分酶在低温中可稳定较长时间，标本如在离体后不能及时测定，应及时分离血清或血浆并置冰箱冷藏。
（六）酶活性浓度的单位
1.酶活性单位
（1）惯用单位
（2）国际单位
（3）Katal单位1979年国际生化协会为了使酶活性单位与国际单位制（SI）的反应速率相一致，推荐用Katal单位（也称催量，可简写为Kat）。
即在规定条件下，每s时间内催化转化1摩尔底物的酶量，1katal=1mol·s-1。
我国法定计量单位制中的酶催化活性单位为katal，其对血清中酶量而言显然过大，故常用单位为μkatal或nkatal。
1katal=60×106U，1U=1μmol·min-1=16.67nmol·s-1=16.67nkatal。
2.酶活性浓度单位临床上测定的不是酶的绝对量而是浓度。
酶活性浓度以每单位体积所含的酶活性单位数表示。
（1）表示方法目前在临床化学中，各国学者几乎都习惯用U/L来表示体液中酶催化浓度。
1U/L=16.67nkatal/L。
篇二：
临床医学检验三、诊断酶学章节练习（201X-6-11）
多用于胰腺炎诊断的血清酶是（）
A．骨肿瘤
B．甲状腺功能低下
C．变形性骨炎
D．梗阻性黄疸
E．恶性贫血
多用于前列腺癌诊断的血清酶是（）
A．405nm
B．450nm
C．280nm
D．340nm
E．630nm
篇三：
第三章酶学模拟试题
第三章酶
一、写出下列符号的中文名称（每个1分，共10分）
1.ATCase2.LDH3.FH44.U5.Kcat
6.TPP7.FMN8.FAD9.NAD10.NADP
二、名词解释（每个1分，共10分）
1．寡聚酶；2．单纯酶；3．结合酶（全酶）；4．辅酶5．辅基；6.酶的活性中心；7.单体酶；8.多酶复合体9.别构酶；10.核酶
三．选择题（将正确答案的序号填入相应的括号内）（每个1分，共10分）
1．酶促反应中决定酶催化专一性的部分是（）
A．酶蛋白B．底物C．辅酶或辅基D．催化基团
2．酶反应速度对底物浓度作图，当底物浓度达一定程度时，得到的是零级反应，对此最恰当的解释是：
（）
A．形变底物与酶产生不可逆结合B．酶与未形变底物形成复合物
C．酶的活性部位为底物所饱和D．过多底物与酶发生不利于催化反应的结合
3．2．米氏常数Km是一个用来度量（）
A．酶和底物亲和力大小的常数B．酶促反应速度大小的常数
C．酶被底物饱和程度的常数D．酶的稳定性的常数
4．已知某酶的Km值为0．05mol．L-1，?
要使此酶所催化的反应速度达到最大反应速度的80％时底物的浓度应为（）
A．0．2mol．L-1B．0．4mol．L-1C．0．1mol．L-1D．0．05mol．L-1
5．下列关于酶活性中心的叙述正确的是（）
A．所有酶的活性中心都含有辅酶B．所有酶都有活性中心
C．酶的活性中心都含有金属离子D．所有抑制剂都作用于酶活性中心。
6．某酶今有4种底物（S），其Km值如下，该酶的最适底物为（）
A．S1：
Km＝5×10-5mol．L-1B．S2：
Km＝1×10-5mol．L-1
C．S3：
Km＝10×10-5mol．L-1D．S4：
Km＝0．1×10-5mol．L-1
7．下列关于酶特性的叙述哪个是错误的？
（）
A．催化效率高B．专一性强
C．作用条件温和D．都有辅因子参与催化反应
8．酶具有高度催化能力的原因是（）
A．酶能降低反应的活化能B．酶能催化热力学上不能进行的反应
C．酶能改变化学反应的平衡点D．酶能提高反应物分子的活化能
9．酶的非竞争性抑制剂对酶促反应的影响是：
（）
A．Vmax不变，Km增大B．Vmax不变，Km减小
C．Vmax增大，Km不变D．Vmax减小，Km不变
10．丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用，按抑制类型应属于（）
A．反馈抑制B．非竞争性抑制C．竞争性抑制D．底物抑制
四．是非题（在题后括号内打√或×）（每个1分，共10分）
1．米氏常数（Km）是与反应系统的酶浓度无关的一个常数。
（）
2．同工酶就是一种酶同时具有几种功能。
（）
3．必须基团是指酶的活性中心以外，对维持酶的空间构象必需的基团。
（）
4．一个酶作用于多种底物时，其最适底物的Km值应该是最小。
（）
5．一般来说酶是具有催化作用的蛋白质，相应地蛋白质都是酶。
（）
6．酶反应的专一性和高效性取决于酶蛋白本身。
（）
7．酶活性中心是酶分子的一小部分。
（）
8．酶的最适pH值和最适温度都是酶的一个特征性常数。
（）
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