ImageLab中文操作手册Word格式文档下载.docx
《ImageLab中文操作手册Word格式文档下载.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《ImageLab中文操作手册Word格式文档下载.docx（18页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
2.显示工具列
放大
图像显示设定
缩小
全窗口大小
亮度明暗度转换
改变图像色彩
转换3D成模式像
图像信息
3.分析工具列
（1）图像工具（ImageTools）
（2）泳道及条带工具（LaneandBandTools）
（3）分子量工具（MWMolecularWeight）
（4）自动定量工具（QuantityTools）
（5）注释工具（AnnotationTools）
（6）手动定量工具（VolumeTools）
二、使用ImageLab软件进行化学发光图像获取流程
1.建立图像获取程序：
在凝胶成像（GelImaging）对话框中选择Chemi（化学发光）应用程序
（1）在成像区域（ImagingArea）对话框中的下拉式选单中选择合适的样品大小（非必需，可之后通过PositionGel选择）
（2）选择成像曝光（ImageExposure）方法，可以人为评估曝光时间并以手动设定（ManualExposure），或是使用信号累积模式（SignalAccumulationMode，SAM）来进行操作。
在建立一个化学发光的程序时最难的任务就是图像曝光的确定，因为您想获得一个充分利用了相机大的动态范围的图像。
过短的图像曝光时间可能使高于膜背景的微弱信号不能被识别；
过长的图像曝光时间能够使得某些条带饱和（也就是说，超出了相机准确报告信号的能力）。
如果这是您第一次用ChemiDocXRS+分析化学发光样品，您需要在使用手控或信号累积模式（SAM）之前决定一个合适的成像时间框架。
获得这个信息的最好的方式是取得一个相对短的手工曝光并利用ImageLab里的工具估计最适的曝光时间。
2.手动曝光
（1）选择手动设定曝光时间（Manuallysetexposuretime）并在读秒框中输入10秒。
（2）选择Highlightsaturatedpixels。
（3）把胶置于透射箱的中心位置。
（4）在程序窗口中点击
按钮。
（5）观察显示器中样品的实时图像，打开照胶系统的门并移动样品直到位于视野的中心区域。
（6）可利用照相机的变焦滑板
调节成像区域的大小。
（7）选择
按钮获得你的第一个图像。
若所需的图像出现在计算机的显示器上，确认图像中是否包含红色的饱和区域。
若有饱和区域存在，请重新以较短的曝光时间来获取图像。
若无饱和区域存在，则可移动鼠标置于最暗的条带之上，在较低的右下角ImageLab窗口中观察信号的强度数值。
如图中显示强度为1994，照相机能记录的最大值的32分之一（最大值为65,535）。
用你的最初的10秒曝光再乘以30就可在照相机的最大动态范围附近成像你的样品。
若你只需针对单一图像的成像时间进行评估，可直接在手动曝光区域中输入300。
3.信号累积模式（SignalAccumulationMode，SAM）
如果预估方法不足以精确满足您的目的，请选择SAM按钮，然后按Setup按钮。
一个新的对话框会跳出来，其包含有可输入细分的成像时间的领域。
在这个例子中，我们已经输入了小于和大于我们原始的300秒曝光估计时间，因为我们有理由相信准确的成像时间将会在这些时间之中。
我们总共想要5个成像，推测其中一个将会与最佳成像极为接近。
一个您的SAM设定的图像显示出现在对话框里。
而SAM设定的影像显示对话窗口，在您选择
按钮后再点选
按钮，窗口会显示相关进度图标来说明整体图像获取的时间。
在250秒获取第一个图像，同时一个小的缩略图会出现在窗口的下方，以此类推整个过程将持续到获取所有的图像。
就像前面做过的那样，通过移动鼠标在图像上，您能判定强度值。
您也可以通过使用位于程序窗口左边的图像转换窗口（ImageTransform）中的调节划片改变图像的表观。
在SAM程序中的任何地方您都能通过点击缩略图查看图像。
若确定调整到符合您要求的图像时，点击
按钮舍弃其它不适合的图像来完成获取图像的程序。
也可在SAM获取图像的过程中或之后来保存需要的所有图像，直接点选右键单点缩图窗口内的图像即可进行存盘保留下来。
在决定获取图像的数量时，记住增加SAM图像会导致背景信号的平均。
当较多的图像被获得时，在背景强度水平附近的弱的信号将会变得难以识别。
如果辨别最弱的信号很重要，我们推荐在合适的时间下获得单一的成像。
三、建立全自动图像获取及分析程序（CreatingProtocols）
1.启动分析精灵窗口--STEP1.GELIMAGING
（1）按照应用（NucleicAcid/Protein/Blots）选择相关的程序（Chooseanapplication）
（2）选择成像区域（ChoosetheImagingArea）
（3）选择成像曝光时间（ChooseImageExposureTime）
（4）选择显示设定（ChooseDisplayOptions,HighlightsaturatedpixelsandImageColor）
2.图像自动分析（AnalyzeImage）--STEP2.DETECTLANESANDBANDS
设定DETECTLANESANDBANDS的参数（LowBandDetectionSensitivity（Lowsensitivity=25）、HighBandDetectionSensitivity（Highsensitivity=75）或自行设定灵敏度。
3.分子量分析（AnalyzeMolecularWeight）--STEP3.ANALYZEMOLECULARWEIGHT
设定AnalyzeMolecularWeightSettings的分子量标准品（MolecularWeightStandard）类型，所有Bio-Rad的各类标准品（包括核酸、蛋白）均已预存。
当然，您也可以根据您的实验设置您自定义的分子量标准品。
并同时设定分子量标准品的泳道及回归方式。
4.报告输出设定（ReportSettings）--STEP4.SPECIFYCONTENTOFREPORTS
5.结果（ResultsOverview）及报告（Report）
（1）数据显示信息（DisplayingData）
（2）分析表格设定（AnalysisTableOptions）
（3）Lane信息（LaneProfile）
（4）标准曲线（StandardCurve）
四、建立图像分析程序（CreatingImagesAnalyzingProtocols）
1.图像分析（AnalyzingImages）
（1）分析工具AnalysisToolBox
（A）自动分析（AutoAnalysis）
点选
进入DetectionSettings窗口
设定Detectlanesandbands的参数（LowBandDetectionSensitivity（Lowsensitivity=25）、HighBandDetectionSensitivity（Highsensitivity=75）或自行设定灵敏度），接着再设定MolecularWeightAnalysisSettings的MolecularWeightStandard、StandardLanes及RegressionMethod参数。
2.图像工具（ImageTools）
可进行水平或垂直翻转、左右旋转90℃或自由旋转（Rotate）、裁剪（Crop）、反转（InvertData）及迭合（Merge）。
3.Lanes及Bands工具（LaneandBandTools）
（1）LaneTab
使用自动（Automatic）或手动（Manual）搜寻Lane功能
（A）针对所有的Lanes（AllLanes）进行大小调整（Resize）、（Adjust）及删除（Delete）等参数调整。
（B）针对单一Lane（SingleLane）进行增加（Add）、弯曲（Bend）、移动（Move）、宽度（Width）及删除（Delete）等参数调整。
（C）利用LaneBackgroundSubtraction进行背景值的扣抵，并可点选（ApplytoselectedLane）针对单一Lane进行调整。
-可以藉由RollingDisk参数设定（1-99mm）来去除背景值。
（2）BandsTab
通过DetectBands进行自动搜寻Bands功能或手动进行增加（Add）、删除（Delete）及（Adjust）等参数调整。
4.分子量分析工具（MolecularWeightAnalysisTools）
此工具可由已知的标准品测算相对的分子量或碱基对（basepairs）。
5.定量工具（QuantityTools）
（1）相对定量（RelativeQuantityTab）
从图像中选择已知的标准品（referenceband）及其标准品浓度（以绿色R表示），其分析结果可从Analysistable观察。
（2）绝对定量（AbsoluteQuantityTab）
通过选择已知标准品浓度的bands（至少两个以上,以R表示），并设定合适的回归参数计算所得之标准曲线来推算目标bands的绝对浓度（回归参数设定如Linear（较常用）、Point-to-Point或Cubicspline）。
RegressionMethod
Minimumnumberofstandardbands
MinimumnumberwithForceThroughOption
Linear
2
1
Point-to-Point
CubicSpline
5
4
6.注释工具（AnnotationTools）
可以通过AddAnnotations工具增加文字批注及箭头批注，并可调整批注相对位置（Alignment）、文字属性、颜色及旋转方向等参数
7.定量工具（VolumeTools）
按下
选择较适合的Band型态,选取想要定量分析的Band位置,并在Band上点击左键两下可将样品定义为标准品、未知样品或背景空白,并分别定义其定量依据（如kb，ppm，mg/ml…）建议用RectTool方形，先框出适当的方形，并用复制方式将分析的Band框出（Ctrl+C+左键/即可复制，或Ctrl+C复制/Ctrl+V粘贴）。
在Band上点击左键两下可将样品定义为标准品、未知样品或背景空白。
（1）VolumeBackgroundSubtraction
-Local（Localbackgroundsubtraction）通过我们所圈选的unknownvolume和standardvolume的pixels密度总和来进行背景值的扣抵。
-Global（Globalbackgroundsubtraction）通过整张胶（或膜）的背景平均的密度来进行背景值的扣抵。
有任何疑问与意见，欢迎随时来电询问
800-820-5567
升级会员 