特殊染色结缔组织染色Word下载.docx
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（3）5%磷钨酸5-10min。
（4）0.2%醋酸水溶液浸洗2次。
（5）亮绿染色液5min，0.2%醋酸水洗2次。
（6）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈桔红色。
（1）Masson复合染色液，经磷钨酸分化时须用显微镜控制肌纤维清晰为止。
（2）亮绿染料可用苯胺蓝替换，可用来作为对比观察染色的效果。
三、显示胶原纤维、网状纤维和弹力纤维的三联染色法（1993年）
（1）高锰酸钾硫酸液0.5%高锰酸钾水溶液中加入5ml的硫酸。
（2）维多利亚蓝染色液维多利亚蓝2g，糊精0.5g，间苯二酚4g，蒸馏水200ml。
将上述物质混合后加热煮沸，边煮边搅拌，约5min。
然后用另一容器取30%三氯化铁水溶液25ml，另行加热煮沸后慢慢倒入上述混合液中继续煮沸3min，不断搅拌溶液呈胶体状。
去火冷却过滤，将滤纸上的残渣连同滤纸放在60℃恒温箱中烤干。
残渣呈深蓝色细颗粒状粉末，再溶于400ml的70%乙醇液中。
然后加浓盐酸4ml和苯酚5g放置至成熟后使用。
（3）丽春红染色S染色液0.5%丽春红S水溶液15ml，苦味酸饱和水溶液85ml。
（4）Gomori氨性银改良液取5%硝酸银水溶液5ml，滴加浓氨水由棕黑色变清为止，再加入3%氢氧化钠水溶液5ml，此时该液突变紫黑色，这时再加入氨水使之变清晰为止。
最后用蒸馏水补足至50ml，盛棕色试剂瓶中，置于冰箱中备用较长时间。
（2）高锰酸钾硫酸液氧化3min后，自来水浸洗后，用2%草酸漂白2min。
（3）5%硫酸铁铵1min。
（4）Gomori氨性银改良液染1min。
（5）蒸馏水洗2次，用15%甲醛液还原1min。
（6）蒸馏水洗2次，0.2%氯化金30s，蒸馏水洗1次。
（7）70%乙醇浸一次，再浸入维多利亚蓝液中染30min-1h。
（8）95%乙醇分化1min左右。
（9）浸入蒸馏水中1min后，用丽春红S染色液染色2min。
（10）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
胶原纤维呈红色，网状纤维呈黑色，弹力纤维呈绿色，肌肉和红细胞呈淡黄色。
氨性银液滴染时，要用干净吸管，防止银液污染而发生沉淀。
氨性银液作用后的切片不能倾倒，应将蒸馏水冲洗切片上的银液，这样就不会使银液表面挥发的银颗粒而沉积在组织上。
第二节胶原纤维
一、胶原纤维的分布和组成成分
胶原纤维是结缔组织中的三种纤维之一，分布最为广泛，含量最多。
主要分布于真皮、键、韧带、骨、透明软骨、动脉、肠壁、子宫和基底膜等，胶麻纤维具有韧性大，抗拉力强的特点。
在弱酸或沸水中可慢慢溶化成胶水，称白明胶。
胶原纤维和网状纤维的基本构造相似，都以胶原单位（蛋白质为主的大分子）为基本单位。
胶原单位接连和融合形成网状纤维;
它是粗约1μm左右的分支状纤维，形成全身组织的支架，在HE染色中看不清楚。
但其外面裹着的一层类蛋白，凭借镀银法可以清楚地显示出来，故又称为嗜银纤维。
胶原纤维单位主要由纤维母细胞合成。
其他如平滑肌细胞等也能产生。
胶原单位的形成开始于细胞的粗面内质网，合成比构成胶原单位的α肽链更长的前α肽链，经高尔基体分泌出细胞，在细胞外液的内切肽酶作用下，切去前α肽链的附加肽段而形成胶原单位；
再经细胞外液的赖氨酰氧化酶作用使两条肽链通过醛醇或醛胺缩合构成共价交联。
这样胶原单位分子之间就形成了稳定的联系，形成胶原微纤维，然后再聚合而成胶原纤维。
二、胶原纤维染色的应用
胶原纤维染色在病理诊断上主要用于鉴定梭形、纤维形细胞肿瘤的组织来源：
常常要在纤维、平滑肌和神经三者之中作出选择。
还能使用于其他的情况下，如观察动脉硬化的心脏，在HE切片中，心肌内散在的小疤痕灶和心肌均被染作红色，而作胶原纤维染色可将胶原组织和心肌组织明显地区分开来。
早期肝硬化用胶原纤维染色，也可使小叶之间少量增生的胶原纤维突出地显示出来。
由干胶原纤维是由成纤维细胞产生的一种纤维蛋白成分，常常被酸性染料染色。
l.VanGieson苦味酸酸性复红法（1889年）
[试剂配制]
（l）VanGieson液l%酸性品红水溶液10ml，苦味酸饱和水溶液（约l.22%）90ml。
（2）Weigert铁苏木素溶液甲液：
苏木素lg,95%或无水乙醇100ml；
乙液：
29%三氯化铁水溶液4ml，蒸馏水95ml，盐酸lml。
临用时取甲液和乙液等量混合即可。
铁苏木素不能像明矾苏木素一样配制后放置，因铁与染色剂的色素可引起化合而形成不溶性沉淀。
所以，以铁作为媒染液时，必须与染液分别配制、分别应用或临时混合应用。
[染色方法]
（1）组织固定于10%甲醛液，常规脱水包埋。
（2）组织切片脱蜡至水。
（3）用Weigert苏木素液染5~l0min。
（4）自来水冲洗数分钟。
（5）根据染色的深浅可用0.5%盐酸乙醇分化。
自来水洗至变蓝；
用蒸馏水洗。
（7）用VanGieson液染1~5min。
倾去染液，直接用95%乙醇分化和脱水。
（9）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
[结果]胶原纤维呈红色，肌纤维、胞质及红细胞黄色，胞核呈黑色。
[注意事项]
（1）目前以苦味酸、复红的VanGieson染液直接染此一种溶液即可。
（2）Weigert铁苏木素分甲、乙两液，应于临用前将两液等量混合使用，而不宜预先混合，否则易氧化沉淀而逐渐失其染色能力。
（3）VanGieson染色液分别在临用时混合，防止放置时间长，则酸性品红不易着色。
2.Siriured染色法
这种方法可使胶原纤维长期保存，是不易褪色的一种好方法。
[试剂配制]
（l）Siriusred饱和苦味酸液0.5%Siriuredl0ml，苦味酸饱和液90ml。
（2）天青石蓝液天青石蓝B1•25g，铁明矾1.25g，蒸馏水250m1。
溶解煮沸，待冷过滤后，加入甘油30m1，然后再加入浓盐酸5ml。
（2）切片脱蜡至水。
（3）入天青石蓝液染5~10min，
（4）蒸馏水洗多次。
（5）Siriured饱和苦味酸液染15~30min。
无水乙醇直接分化与脱水。
（7）二甲苯透明，中性树胶封固。
[结果]胶原纤维呈鲜红色，细胞核绿色，其他为黄色。
3.Lillie改良VanGieson法（1965年）
A.用1%醋酸配成0.1%快绿FCF液，或为得到较蓝的绿色用3%毛绿S（WoolgreenS）。
B.且0.2%酸性复红，0.2%紫胺（Violamine）或用0.1%~0.5%丽春红S（ponceauS）溶于饱和的苦味酸水溶液。
（1）按常规将切片脱蜡至水。
（2）用Harris明矾苏木素液染3min。
（3）自来水洗，盐酸乙醇分化数秒钟。
（4）自来水洗至显蓝，蒸馏水洗。
（5）在A溶液中染4min。
在1%醋酸中洗2次。
（7）在B溶液中染l0~l5min。
在1%醋酸中洗2min。
[结果]结缔组织红色，肌肉、胞质灰绿色，红细胞绿色，核蓝黑色。
4.Clark改良VanGieson台盼蓝法（1971年）
用于胶原纤维、包括非常细的纤维，以及肌肉角化上皮的染色。
[固定]甲醛固定液。
（l）A液0.3g萘酚黄S（naphtholyellowS）溶窜犯100mI蒸馏水。
（2）B液0.2g酸性复红溶于100ml蒸馏水中。
（3）C液0.2g台盼蓝溶于100ml蒸馏水中。
染色液由40份A溶液，2.5份B溶液和2份C溶液组成。
每40分A溶液加入，0.4ml浓盐酸。
（1）石蜡切片，脱蜡至水
（2）在Weigert铁苏木素中5ml。
（3）自来水洗。
（4）在染色液中染l0min。
（5）在水中迅速洗一下即经过50%、70%与95%乙醇，无水乙醇两次。
二甲苯透明，中性树胶封固。
[结果]核-蓝黑色；
胞质-黄色，胶原纤维-粗纤维红色，细纤维蓝色。
[说明]本法中的Weigert铁苏素液染色，可改用棓花青-铬矾溶液中染16h。
5.Biebric猩红染色法Lillie，1965年
[显示目的]胶原纤维、网状纤维、肌肉、胞质。
[固定]甲醛液，Orth液。
（l）A液Weigert铁苏木精，见苦味酸酸性复红法。
（2）B液0.2gBiebrich猩红溶于100ml1%醋酸。
（3）C液0.1g苯胺蓝溶示100ml饱和苦味酸水溶液。
（1）常规脱蜡至水。
（2）在A溶液中染5min。
（3）自来水冲洗。
（4）在B染液中染4min。
（5）自来水洗。
在C染液中染5min。
（7）直接移入1%醋酸中3min。
无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
[结果]结缔组织蓝色，肾小球基质蓝色，网状纤维蓝色，红细胞橙红至猩红色，肌肉粉红色，胞质粉红色至灰色，核黑蓝色，粘液浅蓝色。
6.苦味酸氨基黑染色法Li1lie，1965年
[显示目的]胶原纤维、网状纤维、基膜、肾小球基质。
[固定]任何固定剂均可。
（l）A液煌紫素R（BrilliantpurpurinR）0.6g；
偶氮复红G（azo-fuchsinG）0.4g；
冰醋酸1ml，蒸馏水加至100m1，上述两种染料先各自用1%醋酸配成1%溶液，以6﹕4比例混合后再用。
（2）B液氨基黑10B，5~100mg；
苦味酸饱和水溶液100m1。
同样浓度的苯胺蓝或甲基蓝均可用来代替氨基黑（又称蔡酚蓝黑），粘液可得到较好的显示。
[染色方法]
（1）切片常规脱蜡至水。
（2）在Weigert铁苏素中染6min。
（4）在A染液中染5min。
（5）流水中洗。
在B染液中染1~5min。
（7）在1%醋酸中分色2min。
[结果]胶原纤维、网状纤维和基膜深绿色；
粘液深绿色，上皮细胞胞质棕色，肌肉浅绿色，红细胞红色。
7.Petersen酸性茜蓝改良法
[显示目的]胶原与网状组织、骨铬肌、心肌横纹、心肌间板。
[固定]Zenker液，Helly液、Bouin液或甲醛液。
（1）A液即缓冲的酸性茜蓝溶液。
酸性茜蓝2B，0.25g；
硫酸铝5g；
蒸馏水50m1。
煮沸5min。
冷却，过滤，再补足到原来的体积。
然后加20ml的Sorensen柠檬酸盐溶液（柠檬酸晶体21g，lNNaOH，200m1。
加蒸馏水至1000ml）和30ml0.lN盐酸缓冲到pH为2.25。
（2）B液即苯胺蓝橘黄G溶液。
苯胺蓝0.5g;
橘黄G，2g；
蒸馏水100ml，冰醋酸8ml，煮沸，冷却，过滤。
（1）常规石蜡切片，脱蜡至水。
（2）在A液中染3min。
（3）在蒸馏水中快速洗2次。
（4）在5%磷钨酸液中分色并媒染2~3min。
（5）蒸馏水洗。
在未经稀释的B液中染2~3min。
如染色结果太深，可用1、2或3倍体积的蒸馏水稀释。
（7）蒸馏水中略洗。
先用95%乙醇后用无水乙醇脱水。
（9）二甲苯透明，中性树胶封固。
[结果]胶原与网状结缔组织蓝色，染色质砖红色，肌组织根据所用不同品种的固定剂染色从深品红色至亮橙色，红细胞橙红色，粘液淡蓝色，神经节细胞淡品红色，腺细饱根据其组成从浅蓝色至品红色。
8.显示胶原纤维、细胞和肌肉的新染法
[固定]中性甲醛液，石蜡切片。
（1）Ponceau'
s染色液0.5%Pohceau'
s（丽春红S，上海试剂三厂）水溶液l0~15ml，苦味酸饱和水溶液85~90ml。
（2）Victoriablue'
B染色液Victoriablue'
B（维多利亚蓝，B，上海试剂三厂）0.5g，70%乙醇100m1。
（1）组织切片脱蜡至水。
（2）70%乙醇稍洗后，入Victoriablue'
B染色液中l5min。
（3）95%乙醇中分化数秒钟。
（4）用蒸馏水洗2次。
（5）用Ponceau'
s染色液滴染2min。
直接用无水乙醇分化与脱水。
[结果]胶原纤维呈鲜红色，细胞核和血细胞呈绿色，肌肉呈黄色。
。
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appo发布日期:
2005-12-12
第三节网状纤维
网状纤维是网状结缔组织内的一种纤维。
它由网状细胞所产生。
网状细胞是一种星状多突的细胞，核大，着色较浅，核仁明显，胞质较丰富，胞突彼此连接形成细胞网架。
网状纤维纤细而有分支，穿行于细胞体和突之间，共同构成网状支架。
这种纤维用HE染色一般不易辨识。
若用银氨溶液浸染能使纤维变成黑色，如又称为嗜银纤维。
网状纤维纤细，直径约0.2-1um，没有弹性，而有韧性，能抵抗胃液的消化和弱酸的腐蚀。
一、网状纤维染色的应用
1.用于显示和鉴别肿瘤的性质和来源
（1）显示和区分癌和肉瘤
（2）显示和区分血管内皮瘤与血管外皮瘤
（3）用以鉴别淋巴细胞肉瘤与网状细胞肉瘤
（4）区分骨尤文氏肉瘤与骨网状细胞肉瘤
（5）显示与鉴别骨异质增生与骨化性纤维瘤
（6）区分软骨粘液纤维瘤与粘液肉瘤
（7）鉴别脑膜瘤与星形细胞瘤
2.用于某些肿瘤的诊断
（1）平滑肌肉瘤
（2）纤维肉瘤
（3）滑膜肉瘤
（4）恶性神经鞘瘤
3.用于观察和研究癌组织的发生、发展及其恶性程度。
4.显示与观察基底膜的变化。
5.用于识别坏死组织的结构及类型
（1）凝固性坏死
（2）肺结核干酪样坏死
6.用于显示和研究肝组织病变。
二、网状纤维染色的原理
1.氧化
2.感应
3.浸银
4.还原
三、网状纤维染色方法
1.Wider染色法
（1）固定甲醛液或其他固定液
（2）试剂配制氧化银溶液：
40%氢氧化钠1滴半
10%硝酸银2.5ml
取40%氢氧化钠滴入10%硝酸银溶液中立即产生棕褐色沉淀，逐次滴入28%氨水恰好溶化沉淀（一般3滴为宜），用蒸馏水补足20ml。
（3）染色次序
1）组织切片脱蜡至水。
2）10%磷钼酸，2-5min。
3）蒸馏水冲洗，5min。
4）1%硝酸铀，5s。
5）蒸馏水冲洗，10s。
6）氧化银溶液，5-10min。
7）95%酒精速洗，1-2s。
8）还原液还原，1-2s。
9）蒸馏水冲洗，2min。
10）0.2%氯化金调色，2-20s。
11）蒸馏水冲洗，5min。
12）5%次亚硫酸钠，2min。
13）蒸馏水冲洗，2min。
14）核固红染细胞核，5-10min。
15）水稍洗。
16）常规无水乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。
（4）染色结果
网状纤维呈黑色、细胞核呈红色。
第四节弹力纤维
一、弹力纤维的形态特点和组成成分
弹力纤维由糖蛋白构成，富含亲水性的极性氨基酸。
弹性蛋白提供弹力纤维的弹性，它是一种不溶性蛋白质，当用弱碱处理纤维结缔组织时，其仍然存在。
三分之一为甘氨酸，11%为脯氨酸。
与胶原纤维不同处为其氨基酸组成中约95%属于非极性疏水氨基酸，锁链赖氨酸（Desmosine）和异锁链赖氨素（lsodesmosine）是弹性蛋白所特有，它们起着共价交联的作用。
近年来，电镜下看到组织培养的平滑肌细胞可以合成弹力纤维的两种成分。
在没有平滑肌细胞存在时，可能由纤维母细胞形成。
弹力纤维广泛分布于身体各处，特别是在皮肤、血管、壁、韧带、气管、支气管、肺泡、耳廓和腺体的导管处等最为丰富。
弹力纤维由两种成分组成，即集合束的弹力微纤维（由糖蛋白形成）和均质状的弹力蛋白。
弹力纤维在常规染色中难以区别于其他纤维，只有用特殊染色方法，才能清晰地显示出来。
近来学者研究认为，弹力纤维系统是由弹力纤维、前弹力纤维和耐酸纤维等三种纤维构成，这三种纤维的分布、走行和组织化学均不相同。
耐酸纤维用一般的弹力纤维染色法其着色很淡，前弹力纤维着色也不够深，但如经强氧化后醛品红或间苯二酚品红法则可把弹力纤维系统中的三种纤维同时显示出来。
二、弹力纤维染色的应用
（一）显示皮肤组织中弹刀纤维的变化在皮肤组织病变中，特别是真皮内的弹力纤维，时常发生改变，出现增生、卷曲、变性、崩解等，做弹力纤维形成聚集成堆的束状、团块状及不规则状。
见于以下病变①弹力纤维病；
②弹力纤维增多症；
③弹力过度性皮肤；
④皮肤疏松；
⑤皮肤环状肉芽肿；
⑥肢端角化的弹力纤维变性；
⑦硬皮病。
（二）显示与判定心血管疾病弹力纤维是心脏和血管的主要成公之一。
（1）显示及鉴别心内膜弹力纤维增生症与心内膜心肌纤维化。
这两种病变时心内膜中的弹力纤维和胶原纤维会出现异常增多，在HE-染色中两者的病理变化甚为相似。
因此，需要特殊染色加以显示与鉴别。
（2）显示动脉粥样硬化时硬化斑块底部的内弹力板崩解，断裂乃至消失情况。
（3）显示与观察梅毒性主动脉炎时动脉中层弹力纤维发生灶性破坏的程度。
（4）显示高血压时小动脉弹力纤维显著增生以及形成多层的病变特点。
（5）用于无脉症，显示在大动脉血管申层弹力纤维密集排列，弹力层增厚。
显示老年人动脉变性：
动脉的弹力板变性、增厚、断裂、崩解等现象。
（三）视察某些病变中的弹刀纤维是否增生与破坏如慢性支气管炎、肺气肿、原发性或继发性肾固缩等，均可导致弹力纤维纵行。
散乱、断裂、破坏和增生，形成碎片或颗粒。
（四）显示与鉴别肿瘤组织
（1）弹力纤维瘤在弹力纤维瘤体的纤维组织中，有许多球状或颗粒状变化的弹力纤维。
在HE染色中容易忽略，但用弹力纤维染色，能清晰见到瘤体内丰富的弹力纤维球。
（2）乳腺癌见于导管和血管壁周围，这种现象多合并在硬癌和浸润性小叶癌上。
如弹力纤维染色法证明在导管癌上，伴随出现弹力纤维增生，可证明是早期浸润癌。
三、各种染色方法
l、Verhoeff铁苏木素染色法媒染剂三氯化铁和碘配成的苏木素染色液，即Verhoeff铁碘苏木素对弹力纤维有染色力，但没有选择性，它既可染弹力纤维，也可染细胞核和胶原纤维等。
通过“染料的分散度和组织的结构密度”以达到分辨不同组织的目的。
如弹力纤维和细胞核的结构密度都是比较致密的，铁苏木素染液的粒子比较容易地分散到狭孔的弹力纤维或细胞核的间隙中，苏木素粒子在狭孔的弹力纤维中比较密集，所以染色也比较深；
而分散到宽孔的胶原纤维间隙中较稀疏，所似染色也比较浅。
[固定]105甲醛溶液或其他固定液。
[试剂配制]铁碘苏木素液：
先将苏本素1g，无水乙醇20ml，进行加温溶解后加入10%三氯化铁水溶液8m1，最后再加入Lugol碘液8ml即可（Lugol液：
碘化钾2g，碘结晶lg，蒸馏水100ml）。
（1）石蜡切片，脱蜡至水。
（2）铁碘苏木素液染15~30min，至颜色呈深黑色。
自来水洗。
（3）2%三氯化铁水溶液分化10~20s，至弹力纤维清晰为止。
如果分化过度，可再返回第2步重染铁碘苏木素液。
（4）充分水洗。
（5）用95%乙醇去碘2~Smin，使黑色纤维更为清晰。
水洗，VG复染5min。
（7）95%乙醇急速分化。
无水乙醇脱水，二甲苯透明，申性树胶封固。
[结果]弹力纤维黑色或黑蓝色，胞核黑色，校原纤维呈红色。
2、Weigert间苯二酚复红染色法三苯甲烷系碱性染料与雷锁辛和三氯化铁组成一种带有弱正电荷的染料，与结构致密的、富于内表面的弹性纤维通过非极性吸着而完成染色。
非极性吸着，是染料不具有强电荷时和组织成分间的结合。
就是说雷锁辛复红液对弹力纤维的染色。
间苯二酚复红液实际上是由碱性品红的铁间苯二酚色淀（Lake）形成的一种复合物，这种复合物与弹力纤维结合，并使弹力纤维着色。
其结合的原理不清楚，可能是弹力纤维某些部分与间苯二酚的基团形成氢键。
[固定]10%甲醛液及其他固定液。
[试剂配制]间苯二酚复红液：
碱佳品红1g，间苯二酚2g，蒸馏水200m1，30%三氯化铁1.25ml，浓盐酸2ml。
取一个300ml烧杯，放入碱性品红、间苯二酚和蒸馏水，用玻璃棒搅拌，加热煮沸。
再慢慢加入30%三氯化铁液，在搅拌下继续煮沸3~5min。
冷却后过滤，倾去滤液。
将滤纸和沉淀物一同放入烧杯内，置于干燥箱内烘干。
取出后加入95%乙醇100ml，在水锅内加热，并不断搅拌至沉淀物完全溶解，取出滤纸，冷却后过滤。
补足因蒸发失去的乙醇至100ml。
最后加浓盐酸2ml，混合后即可使用。
（2）在95%乙醇液中浸2min。
（3）间苯二酚复红液染1~2h。
（4）用95%乙醇液洗去多余染液。
如果染色较深可用0.2%盐酸乙醇分化。
（5）自来水冲洗2min。
用VanGieson液复染lmin。
[结果]弹力纤维深蓝黑色，胶原纤维红色，背景黄色。
3、Hart改良间苯二酚复红染色法此法由Weigert法经过改良后发展而来。
特点是将Weigert染液用1%盐酸乙醇溶液配制成稀释溶液，进行过夜染色，可显示出较细的弹力纤维。
[固定]甲醛固定液和其他固定液。
（1）酸性高锰酸钾水溶液0.5%高锰钾水溶液50m1，3%硫酸水溶液2.5m1。
此液分别配制，临用时按比例混合使用。
（2）Weigert稀释液Weigert原液l0ml，1%盐酸乙醇溶液90ml。
此液可保留一定时间。
（1
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