高血压病中医分型的代谢组学研究 3.docx

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高血压病中医分型的代谢组学研究3

目的：

中国传统医学（中医）在中国已经实行了几千年年，提供了一个独特的理论和实际应用—可以治疗疾病。

在中医理论中，该概念的“整体”和使用“系统”比隔离是重要的概念，它也适合系统生物学理论。

在本研究中，我们试图气相色谱/质谱的代谢组学方法发现有助于区分高血压中医证型

方法：

中医将原发性高血压的三种证型：

肝阳上亢，痰湿壅盛，阴虚阳亢型。

血清代谢物组剖面健康人和高血压患者获得使用气相色谱/质谱分析。

主成分分析（主成分分析

张力患者获得使用气相色谱/质谱全球分析—

姐姐。

主成分分析（常设仲裁法院），偏最小二乘

判别分析（偏多巴胺），andmahlanobis

距离（博士）是适用于促进代谢

数据分化和prediction.results：

使用

主成分分析和偏多巴胺，它能够区分也不—

正常血压血清样品从这些中医

综合征类型，而没有歧视的三

高血压病中医证型各。

furthermd分析不仅有助于鳍分化，更明确的进展展览，

这三个综合征types.conclusion：

本试验

研究表明，代谢组学方法可能是一个

强大的工具，探索科学的本质

tcmtheory。

关键词代谢综合征类型；超—

张力；气相色谱/质谱法

与现代生命科学发展的，

systembiology涉及新兴领域的应用

基因组学，蛋白质组学，代谢组学，生物信息学

等来研究生物有机体在各级，

从分子，通过细胞的行为—

铝。

其目的是了解生物过程的整体

系统而不是孤立的部分[1]。

中国传统

医学（中医）的一个重要部分是生命科学，和

一个大型复杂系统。

在中医理论，概念

使用的the'whole'andof'system'ratherthan孤立

是重要的概念，它符合系统生物学

理论。

因此，有理由相信中医

理论在本质上是系统生物学与股权结构的关系，

中医现代化是依赖于发展

和系统生物学的应用。

代谢组学，作为系统生物学的一个重要组成部分，将有用的建模工具类分类和预测生理和病理

从代谢概况体液如

尿[2,3]和[4]，从剖面的完整的组织

和组织提取物[5]。

事实上，代谢组学的现在广泛应用于研究疾病的诊断，基因的功能，药物发现，毒理学等。

被

了解之间的内在关系中医理论

和系统生物学，一些研究者开始讨论未来的应用代谢组学方法中医理论的科学验证。

然而，没有

单一的报告有关的代谢组学方法，中医

研究已发现在目前的文献。

公关—

介绍研究因此，旨在确定是否

代谢组学的战略是有益的和强大的差异—

中药的辨证分型，采用高压作为一个

模型。

根据中医理论，高血压可

一般分为四种类型，namelyhy—

peractivity肝yangtype

（一）（上火

活），谭石勇shengtype（乙）（湿痰站—

姐姐），阴徐扬kangtype（丙）（阴虚车—

过量阳），andyinyangliangxutype（四）（匮—

细胞bothyinandyang）。

这四个综合征类型

代表不同发展阶段的高血压

在早期阶段，提出了主要的上升

肝火与hyperacitivity的liveryang，在中间

withyindeficiency阶段的肝脏和肾脏的陪同下

与阳，在后期阶段的不足

混合的bothyinandyangand痰湿

血瘀[6]。

然而，从tcmsyndrometypes'theory

概括和总结的临床经验

和regularityfor长期是有益的，为临床诊断—

治疗高血压和治疗。

不过。

其科学内涵仍有待发现

经现代科学手段。

近年来，研究人员竭力试验

探索中医证候的科学内涵

类型的高血压病，从不同的角度

意见包括基因多态性，已知的生物化学

指标等[7]。

然而，这些研究

然而，有限的考虑而不是孤立的—

thology。

在本研究中，我们使用气相色谱/质谱为基础

代谢物组学方法确定生化

概况differenttcmsyndrome类型的高血压，

和fortestingwhetherthe代谢组学方法是战俘—

后的分化oftcmsyndrome类型。

1材料和方法

1.1-双（三甲硅基）三氟化学品—

三甲基氯硅烷，乙酰胺，硬脂酸甲酯[2H3]-肉豆蔻酸（是），和甲氧胺盐酸盐—

骑都购买fromsigma/奥德里奇公司购买—

青衣的所有化学品都是超过98%。

1.2参与者和血液样本收集的渴望

20名健康志愿者和33例高血压—

血压（高血压）被纳入本研究。

所有的

临床诊断和血液样本集合进行欺诈—

管道在心血管系江苏临—

vincial中医医院（南京

中国），和所有的实验被批准了

当地的伦理委员会。

高血压病患者—

sionwere诊断根据他/ishguideline

为管理ofhypertension[11]，和concurrentl

经历了tcmsyndrome类型分化的车—

periencedtcmdoctors。

病人，谁收到任何药物

在最近的3天，被排除

这项研究。

三毫升的血液样本，收集

每个主题，离心，获得serumwhichwa

立即保存在-80℃之前的分析。

1.3个样品制备气相色谱/质谱分析，10

我血清从每个样品加入到一个eppendo

是预装了400μ升甲醇含有—

2.5μ克[2H3]-肉豆蔻酸为内标，佛—

由于搅拌10分钟，然后放在冰浴中

1小时后，混合液离心一

22500×gfor10分钟和200μ乐福的supernatantwa

转移到气相色谱小瓶蒸发至干下

n2at室温。

当时我的残留—

thoxymated30μ升15毫克/毫升甲氧胺盐酸盐—

骑在吡啶的16小时，加入30μ衍生蛋白

methyl-n-（三甲硅基）三氟乙酰胺（tmsfa

含1%三甲基氯硅烷为trimethylsilylatio

1小时。

衍生样本进行重组的我

40μln-hexadecane与硬脂酸甲酯在15μ克/mlfo

系统检查。

1.4气相色谱/质谱法分析微量的衍生物

一微升的衍生

样品注入splitlessly到一个Finigan气相色谱法结合质谱（TRACEDSQ）（美国Thermofinigan，）。

GC是配备了一个10

米×0.25mm内径，熔融石英毛细管柱，这

化学键0.25DB1-MS固定

阶段（J＆Wscientific，福尔松，加利福尼亚，美国）。

进样口温度为270℃，隔垫吹扫流量

20毫升/分钟，在60秒后打开和清除。

通过色谱柱的气体流量为1毫升/分钟。

“

列的初始温度保持在70℃2分钟。

然后从70到320℃，在温度升高

速率20℃/分钟，2分钟举行。

传输线温度270℃，离子源温度为250

℃。

电离达到70eV的电子束

2.0mA电流。

从50到650m/zwere群众

加速电压时获得的议会模式

打开后的170小号的溶剂延迟

1.5气相色谱/质谱数据处理数据处理

通过xcalibur软件（thermofinigan，美国）。

峰

信噪比（信噪比）的比例低于10被排除。

稀土—

张力时间调整内部标准，迷你—

单相运行错误。

保留指数为每个峰

化合物的保留时间的计算比较

对那些烷烃系列（c8-c40，相应的

保留指数值从800到4000）。

获得交流—

牧师的峰面积的和具体峰/组件—

磅，每一个quantmassescomponentwere

指定的数据进行再加工。

面积

每个峰正常化的内部标准，

[2H3]-肉豆蔻酸，在多元统计分析—

姐姐。

所有compoundswere通过比较确定的

质谱和保留indexwith现有李—

braries，即美国图书馆2（2001年1月31日），

威利图书馆，内部质谱库数据库

建立了中心的发展与研究

药物代谢和药代动力学，中国医药—

ceutical大学。

1。

6个多变量统计分析多元

统计分析（mvsa）进行了使用西姆卡—

11软件（umetrics，于默奥，瑞典）。

逸

矩阵构造的观察/样品在山口—

umns和峰作为变量行。

它可以代表—

提出了在k维空间（如钾是平等的

多变量），并预测和减少

一些主要组成部分，描述了最大

变化的不同群体或样品。

主成分—

热分析（主成分分析）是用来计算的基本模型

和overviewof数据。

偏最小二乘问题—

在latentstructures与判别分析（偏多巴胺）

用于计算模型的区分群体或

类，在此，分离之间的健康控制

高血压病患者，其中threetcmsyndrome类型。

駅—

tistically不同peakswere计算bypls-damodel

有0.99的置信区间和意义水平

0.01。

交叉验证与七个交叉验证

组是使用数的确定

组件mahlanobis距离（博士）的方法是美联社—

使用的计算模型的分类三中医

综合征类型根据shortestmd[12]。

2结果与讨论

2.1气相色谱/质谱分析血清样本吗爸爸—

病人和健康对照的基础上，以前的—

发达的方法[13]，气相色谱/质谱参数进行优化—

后为芬妮根气相色谱/质谱系统在本

书房。

该系统可以检测一个大数字—

误码率峰值从气相色谱/质谱chromatogramwithin16分钟

分析周期。

典型的气相色谱/mstic色谱

血清样品进行了图1所示为ehpatient。

六十

峰高强度呈现在ehand健康

控制样品进行鉴定和峰面积

集成furthermvsa。

2.2个代谢物谱的高血压患者和控制数据矩阵的峰面积从

两个高血压和控制受到主成分分析。

主成分分析是一种

常规统计方法在代谢组学的应用—

与之间的关系的样本/意见。

方便的可视化的数据结构，主成分分析

可以减少大量的变量到一个较小的

一些无关变量，即所谓的原则—

帕尔组件。

第一主成分解释

最大的变化数据，二主

组件是独立的（正交）第一

其次，部分解释了变异的

数据很快。

有2种阴谋的主成分分析。

1

“几十块”的意见，或样品。

其他的

is'loadingplots'for变量，或光谱峰。

每个点上的代谢组学分数表示法

所有变量的数据中获得一个频谱，这里60

变量。

因此，所有的样本点群

在一起有更多类似的光谱（因而更西米—

拉尔生化化妆）比那些分开站立。

然而，地块应仔细审查，包括或丢弃

特别的，从大多数自

离群通常有负面影响的建模。

三严重的异常被发现在主成分分析综述

评分阴谋这一数据，因此从毛皮—

在建模。

根据交叉验证，一个five-com—

组件模型计算。

这个模型解释

68.1%（R2）和预测46.9%

（2）的数据，

与firstthree成分贡献53.4%车—

平和38.2%的预测，分别。

由于多样性的性别，年龄和生活习惯，

如食品，活动，采集的样本来自人类—

有可能greatvariationonmetabolome，常规的—

地很难计算好pcamodel到

单独的variousgroups因此找到了内在的差异—

推断群体之间。

偏多巴胺模型应用

数据加强这一分离的和健康的

控制。

目的是研制一种偏多巴胺

可分类别的观测—

在基础oftheirvariables（×）。

theymatrix恩—

代码由一套of'dummy'variables类成员，

在此一柱一和零每班。

然后plsmodel之间装有xvariables和人工—

社会的。

这样，一个判别平面中发现

该意见是根据分离

他们的阶级的成员。

一个非常好的部分

模型计算（图2），这可以解释97.8

和预测94.8%的数据，与第一组件

解释86.1%和83%的预测。

虽然这

是一个有效的模型显示内在差异性

和控制，分数阴谋提供小机械

深入的分子基础，并说明什