ABO血型鉴定操作规程.docx
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ABO血型鉴定操作规程
ABO血型定型编号:
□□□□/J04-2016
操作规程版号；2016—A版第0次修改
1.目的;为确保实验结果的准确，特别订本规程。
2.范围；适合进行ABO血型鉴定相关科室的全体工作人员.
3.职责；
3。
1科主任负责本规程的培训，考核及督促实施。
3.2科室工作人员按文件进行操作并建立相关记录,为实验结果的准确性负责。
3.3全科人员熟练掌握原理及操作。
4.原理
根据红细胞表面有无A抗原和B抗原，将血分为A型、B型、O型和AB型四种。
可利用红细胞凝集试验、通过正、反定型准确鉴定ABO血型.正定型是用已知抗A和B分型血清来测定红细胞表面有无相应的A抗原或B抗原；反定型是用已知的A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗A或抗B.反定型中使用O细胞是为了检测抗A、抗B以外的不规则抗体.
5，试剂
5。
1抗-A、抗B分型血清。
5.2～5％、B、O、试剂红细胞。
6试剂的质量控制；
6.1每个工作日在实验开始前，对试剂进行外观检查,包括；有效期、有无渗漏等，试剂红细胞无明显溶血.
6.2每个工作日在实验开始前，对所有的抗—A、抗—B、试剂红细胞按《血型试剂确认操作规程》进行特异性验证。
6.3将试剂的厂家、批号及检测结果记录到《血型试剂质量控制记录»中.
7.工作程序：
7。
1正定型：
取洁净小试管2支，分别标记“抗A”、“抗B",分别滴加抗A、抗B试剂1滴于试管底部,再分别加入受检者2％～5％红细胞1滴，混合。
7。
2反定型：
另取洁净小试管3支，分别标记“AC”、“BC”、“OC”,各加入受检者血清2滴于试管底部，再分别加入A、B和O型2%~5%试剂红细胞1滴，混合。
7。
3以3400转/15秒（或1000转/1分钟）离心将试管轻轻摇动，仔细观察细胞扣有无凝集或溶血现象。
观察结果时既要看有无凝集,也要注意凝集强度，这将有助于亚型等的发现。
8.结果判定：
凝集强度的判断依据《红细胞凝集强度判读标准》进行。
血型
正定型
反定型
抗A
抗B
AC
BC
OC
A
+
-
—
+
-
B
—
+
+
-
—
O
-
—
+
+
-
AB
+
+
-
—
—
9正反定型不一致的原因；有技术问题或红细胞和血清本身问题，常见者有以下情况；
分型血清效价太低，亲和力不强。
红细胞悬液浓度过高或过低,抗原抗体比例不适当（出现前带或后带现象），使反应不明显误判为阴性反应。
受检者红细胞表面抗原位过少或抗原性减弱等.
受检者血清蛋白紊乱,常引起红细胞呈缗钱状排列。
受检者血清中减弱或缺乏应有的抗A或抗B。
各种原因引起的红细胞溶血，误判为不凝集。
由细菌污染或遗传因素引起,多凝集和全凝集，往往是正反定型不符的原因。
血清中有ABO血型系统以外抗体,如Ｉ（冷抗体）等,常干扰定型。
观察细胞扣时手法不当,未发现弱凝集。
如发现ABO正反定型不一致，首先要重复做实验一次（必须用试管法）,严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察和解读实验结果，就可以解决问题，对一些疑难问题必须进一步鉴定。
10相关文件
10.1«中国输血技术操作规程»
10.2«临床输血技术更规范»
10.3«青海省医疗机构输血科（血库）标准化建设验收评审细则»
10。
4«血型试剂确认操作规程»
11记录
11.1血型试剂质量控制记录。
11.2血型检定及结果登记.
2016。
4。
5
Rh血型鉴定编号：
□□□□/J04—2016
操作规程版号；2016-A版第0次修改
1.目的;为确保实验结果的准确，特制订本规程。
2。
范围；适合进行Rh血型鉴定相关科室的全体工作人员.
3.职责
3。
1科主任负责本规程的培训、考核及督促实施。
3.2科室工作人员按文件进行操作并建立相关记录，为实施结果的准确性负责.
3.3全科人员熟练掌握原理及操作。
4。
原理
Rh血型系统主要有五种抗血清,即抗D，抗C，抗c,抗E，抗e.用五种抗Rh分型血清来检查红细胞抗原。
在临床输血中，一般只做D抗原的鉴定,凡被检红细胞和抗—D血清凝集着为Rh阳性，不凝集者为Rh阴性。
5试剂,抗—D血清。
6。
试剂的质量控制：
每个工作日在实验开始前，对试剂进行外观检查,包括：
有效期、有无渗漏等；对所有的抗-D血清按《血型试剂确认操作规程》进行特异性验证。
将试剂的厂家、批号及检测结果记录到《血型试剂质量控制记录»中.
7.工作程序：
7.1取洁净小试管1支标识“抗—D”,加抗-D试剂1滴于试管底部，再加受检者2％~5％红细胞悬液1滴,混合.
7。
2以3400转/15秒（或1000转/1分钟）离心，肉眼观察细胞扣，根据凝集情况判断结果.
8。
1结果判断：
凝集者为Rh（D）阳性,不凝集者再次检测，再次检测不凝集者为Rh（D）阴性。
8.2凝集强度的判断依据《血型试剂确认操作规程》
9.注意事项：
9.1红细胞悬液浓度不能过高或过低,抗原抗体比列不当会出现前或后带现象，出现假阴性结果。
9。
2试剂或被检血清和红细胞的比例要适当，否则会漏检阳性结果。
9.3观察细胞扣时手法要得当，防止用力混匀而漏检弱阳性。
10。
相关文件
10。
1«中国输血技术操作规程»
10.2«临床输血技术规范»
10。
3«青海省医疗机构输血科（血库）标准化建设验收评审细则»
11。
血型检定及结果登记。
不规则抗体筛选实验编号：
□□□□/J04—2016
操作规程版号;2016—A版第0次修改
1.目的：
为确保实验结果的准确，特制订本规程。
2.范围：
适合输血科（血库）全体工作人员.
3.职责
3.1科主任负责本规程的培训、考核及督促实施.
3。
2科室工作人员熟练掌握原理及操作。
4.原理
红细胞血型抗体除了抗A，抗B外，可能含有潜在的其他不规则抗体，而导致输血反应等问题。
血型抗体分子的物理特性与血清学的反应性之间有着直接的关系。
抗体主要分为IgM和IgG抗体，IgM抗体长度大于35.7nm，在盐水介质中能直接相连相应的红细胞，使之发生肉眼可见的凝集反应，IgG抗体长度大于24nm，在盐水介质中不凝集，而只能致敏相应抗原的红细胞，所以用3人份基本含盖常见抗原的O型红细胞，在不同的介质中检测，（盐水介质、凝聚胺介质或抗人球蛋白介质等）只要血清中存在常见的IgM和IgG不规则抗体，在不同的介质中就会和筛选细胞发生凝集。
5。
仪器、材料与试剂
5。
1凝聚胺试剂
5.2筛选细胞
6.试剂的质量控制：
每个工作日在实验开始前，对筛选细胞的外观质量进行检查，无明显溶血，在有效期内；同时记录试剂厂家和批号.
7.工作程序及结果判断：
7。
1取试管3支，分别标记“1”、“2”、“3”、各管加患者血清2滴,分别加入1、2、3号筛选细胞各1滴，混匀。
以3400转∕离心15秒或（1000转∕离心1分钟）。
7。
2观察结果，3号管中有1管以上阳性者，为抗体筛选实验阳性，说明被检血清中存在IgM类抗体，要送血站进行抗体鉴定.
7.33管均为阴性，表示在盐水介质中抗体筛选阴性，说明被检血清中不存在1gM类抗体。
再将3管继续做聚凝胺实验。
7。
4在聚凝按介质中，3管中有1管以上阳性者，为抗体筛选试验阳性,说明被检血清中存在1gG类抗体,要送血站进行抗体鉴定，
7。
53管均为阴性，表示在2种介质中抗体筛选均为阴性，说明被检血清中不存在不规则抗体。
8相关文件。
9。
1《中国输血技术操作规范》
9.2《临床输血技术规范》
9。
3《青海省医疗机构输血科（血库）标准化建设验收评审细则》记
9记录
10。
1交叉配血实验记录报告单起草人；
交叉配血实验编号：
□□□□/J04-2016
操作规程版号；2016—A版第0次修改
1。
目的；为确保实验结果的准确，保证安全输血，特制订本规程。
2。
范围：
适合输血科（血库）全体工作人员。
3.职责:
3.1科主任负责本规程的培训、考核及督促实施.
3.2科室工作人员按文件进行操作并建立相关记录，为实验结果的准确性负责。
3.3科室工作人员熟练掌握原理及操作。
4原理
4。
1交叉配血实验分“主侧”即病人血清与献血者红细胞相容性实验；“次侧”即献血者血清与病人红细胞的相容性实验。
分别用盐水介质法检测IgM类不规则血型抗体引起的交叉配血实验不合,用凝聚胺介质法检测IgG类不规则血型抗体引起的交叉配血实验不合。
4。
2凝聚胺介质法中低离子介质可以促进红细胞和相应抗体的反应,在加入凝聚胺后，带正电荷的凝聚胺可以中和红细胞表面的负电荷，促进红细胞之间互相接近，引起的红细胞产生非特异性的凝集反应.如果是由特异性抗原抗体反应引起的凝集，则会在加入再悬液时散开.
5.材料与试剂
聚凝按试剂盒。
5.2抗A.抗B分型血清。
5。
32—5％A。
B.O试剂红细胞。
5。
4抗—D血清.
6。
试剂的质量控制；
聚凝胺实验过程中，加入重悬液之前如无凝集时,将阳性对照血清代替待检血清按7.3操作进行质量实验，结果出现凝集，证实实试剂有效。
7工作程序；
7。
1查看输血申请单，核对申请单与血样管上姓名。
科室，床号，住院号,血型等内容无误，方可进行配血。
7.2依据《ABO血型定型操作规程》，《Rh血型定型操作规程》进行献血者的受血者的ABO血型（正反定型）和Rh血型的复查。
7.3盐水介质配血
7.3。
1取试管2支，分别标记“主侧”、“次侧”,“主测"管加患者血清2滴，献血者2—5％红细胞悬液1滴；“次侧”管加献血者血清2滴，患者2—5％红细胞悬液1滴,以3400转/离心15秒或（1500转/离心1分钟），以肉眼观察细胞扣,有无凝集或溶血现象。
7.3.2主次管凝集或溶血的要查找原因。
7。
3。
3主侧和次侧均无凝集及溶血现象，为盐水介质配血结果阴性，再将原主次管继续进行凝聚胺介质法配血。
7.4凝聚胺介质配血
7。
41各管加LIM液0。
7ml（14滴）,混匀，加凝聚胺试剂2滴，混匀后3400rpm离心15秒,弃取上清液,不要沥干，轻摇观察由凝聚胺引起的红细胞凝集。
7.42有凝集时各加入2滴垂悬液轻摇看结果：
由凝聚胺引起的非特异性红细胞凝集应在1分钟内完全散开，若是由免疫性抗体引起的凝集,反应则不会完全散开。
7.4。
3凝聚胺介质配血阳性者，疑似由IgG抗体造成，需进一步抗体鉴定。
8注意事项
8。
1若红细胞中含有较多血清或血浆则需用盐水洗涤细胞一次.
8。
2若加凝聚按试剂后未见红细胞凝集需重做,可能是患者使用肝素类药物中和聚凝胺所致，需多加1滴poiybrene（凝聚胺）试剂以中和肝素。
8。
3观察盐水介质配血结果后，在阴性情况下再进行凝聚胺介质配血，如盐水介质配血结果为阳性，则勿需进行凝聚胺配血。
8.4患者血清中纤维蛋白没完全析出时，要放置到37水浴箱中15分钟，然后再离心。
以防未完全析出的纤维蛋白影响判断结果。
9结果判断：
凝集强度的判断依据«血型试剂确认操作规程»
10.相关文件
10.1«中国输血技术操作规程»
10.2«临床输血技术范围»
10。
3«青海省医疗机构输血科（血库）标准化建设验收评审细则»
10.4«台湾贝索公司凝聚胺介质试剂盒说明书
11记录
11。
1交叉配血实验记录报告单
血液入库、管理编号：
□□□□/J04—2016
操作规程版号；2016-A版第0次修改
一、血液领取、接收、入库、核对、账目登记
（一）医院临床用血均须由所在行政区域卫生行政部门指定的血站提供，不得自行采集异体血液.
（二）到血站取血时，医务人员须持单位盖章的取血介绍信（须注明
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