StepOnePlus型PCR仪操作规程和PCR仪简易设置指南Word格式文档下载.docx

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启动电脑，打开定量PCR仪电源开关：

双击桌面“StepOneSoftware”图标，出现Login登录界面，点击“OK”，打开软件。

起始界面如图所示，点击红色椭圆的三角图标，展开软件功能按钮。

点击左侧“SetUp”功能选项中的“AdvancedSetup”高级设置向导。

在打开的设置界面，左侧为导航树，选择不同的功能选项，右侧显现为不同的设置功能。

默认条件下，显示为“ExperimentProperties”实验属性。

右侧界面，带有红色*号位置需要输入或者通过鼠标进行选择。

不带*号位置为选填，可以保持空白。

在途中位置输入实验名称，该名称根据需要进行填写。

选择仪器类型、实验类型、荧光标记方法以及反应速度。

左侧导航树，选择“PlateSetup”设置选项。

右侧“DefineTargets”选项下“TargetName”处设置检测基因的名称，如FluA，Reporter下拉菜单选择“FAM”，Quencher下拉菜单选择“None”

点击“AddNewTarget”，并按照第7步所述进行设置。

根据需要添加所需基因，如SWH1、SWFluA1和RNP。

在“DefineSamples”填写检测样本的名称，如果需要多个样本，通过“AddNewSample”添加多个样本。

鼠标点击“AssignTargetsandSamples”切换设置界面。

鼠标滑倒图中椭圆所处位置，变化为双向箭头，通过拖动鼠标，可以改变左右两侧窗口大小。

鼠标选择样品放置的位置，如B4，鼠标勾选样品名称及所要检测的基因。

根据样品孔的数量，依次进行设置。

鼠标拖动椭圆位置，向下拖动。

在“Selectthedyetouseasthepassivereference”的下拉菜单处选择“None”

点击“RunMethod”设置反应条件：

在“ReactionVolumePerWell”处输入反应体积，如20ul或者25ul。

点击温度或者时间，通过输入数值可以更改温度的大小及时间的长短。

在“NumberofCycles”可以输入循环数。

根据试剂盒的说明书，改变反应条件。

在软件上，Stage指温度阶段，有HoldingStage和CyclingStage两种类型。

HoldingStage只有一个Step（温度步骤），CyclingStage可以有几个Step（温度步骤），并且多次循环该温度参数。

点击“AddStage”可以选择添加Stage及类型。

在CyclingStage可以添加Step（温度步骤）

选中某个温度步骤，如黄色区域所指的60℃位置。

点击“AddStep”，选择Before（之前）或者After（之后），即可添加温度步骤，根据需要更改温度或者时间。

选择采集荧光的温度步骤。

选择采集温度的步骤：

点击“DataCollection”图标，使其处于激活状态，如72℃。

同时，点击55℃下“DataCollection”图标采集图标，使其处于未激活状态。

点击“Save”保存实验，再点击“STARTRUN”开始运行实验。