血库标准化操作程序Word文档下载推荐.docx

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上海血液生物医药有限责任公司

6.6试剂Ⅱ组成：

A1、B及O型试剂红细胞盐水悬液。

7仪器

7.1离心机：

80-2上海手术器械厂

7.2电热恒温水箱：

上海医疗器械厂

7.3显微镜：

OLYMPUS（日本）

8操作步骤及结果判断：

8.1试管法

8.1.1取洁净小试管（内径10mm*60mm）3支，分别标明抗-A、抗-B和抗-A+B，用滴管分别加抗-A、抗-B和抗-A+B。

分型血清各1滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混合。

8.1.2另取洁净小试管（内径10mm*60mm）3支，分别标明A、B和O细胞。

用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5%试剂红细胞悬液1滴，混合。

8.1.3立即以1000r/min离心1min。

8.1.4将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。

如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

8.1.5观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。

8.1.6凝集强度判断标准

4+=红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。

3+=红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。

2+=红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。

1+=肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。

+/-=镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。

MF=混合凝集外观（mixedfield）是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍成分散分布。

—表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。

8.1.7按表1-6-1报告受检者红细胞ABO血型

8.2玻片法

8.2.1取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A+B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A+B分型血清2滴于标明的方格内，再各加受检者2%红细胞悬液1滴，混合。

8.2.2另取洁净玻片一张（或白瓷板1块），用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清2滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。

8.2.3将玻片不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min，以肉眼观察有无凝集（或溶血）反应。

如以玻片作试验时，也可用低倍镜观察结果。

表1-6-1ABO血型正反定型结果

分型血清+受检者红细胞受检者血型受检者血清+试剂红细胞

抗-A抗-B抗-A+BA细胞B细胞O细胞

+–+A–+–

–++B+––

–––O++–

+++AB–––

注：

+=凝集；

—=不凝集

9操作性能：

快速简便，特异性强，重复性好。

10超出范围结果处理：

10.1细胞自凝：

在冬天气温较低时，某些病人血清中含有冷凝集素而导致假阳性；

若有此怀疑，建议在最后滴入悬浮液时将试管立即置入37℃水浴中，轻轻转动试管混匀，并在30秒内观察结果。

10.2红细胞悬液为5%为宜，过浓或过淡可使抗原抗体比例不适当，反应不明显易误判。

10.3各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集，部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。

10.4正反定型结果不一致的原因

10.4.1有技术性问题或红细胞和血清本身的问题，常见者有以下几种：

分型血清效价太低、亲和力不强。

如抗-A血清效价不高，可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。

10.4.2红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。

10.4.3受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于白血病或恶性肿瘤）以及类B或cisAB等。

10.4.4受检者血清中蛋白紊乱（高球蛋白血症），或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。

10.4.5受检者血清中缺乏应有的抗-A及/或抗-B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。

10.4.6各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。

部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。

10.4.7由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。

10.4.8血清中有意外抗体，如自身抗-I，常引起干扰。

10.4.9老年人血清中抗体水平大幅度下降。

10.5正反定型结果不一致的解决办法

如发现ABO正反定型结果不一致，首先要重复试验1次。

严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察和解释试验结果，就可解决明显的问题，对一些疑难问题必须进一步研究。

初步的检查步骤包括：

10.5.1另从受检者采取1份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不符合。

10.5.2将红细胞洗涤数次，配成5%盐水细胞悬液，用抗-A、抗-B、抗-A1，抗-A+B及抗-H做试验可以得到其它有用的信息。

10.5.3对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细胞已被抗体致敏。

10.5.4用A1、A2、B、O红细胞及自身红细胞检查受检血清。

如果怀疑时抗-I，用O型（或ABO相合的）脐血红细胞检查。

10.5.5如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和4oC放置30min，用显微镜检查核实。

10.5.6如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗-A或抗-B血清作吸收及放射试验以及受检者唾液作A、B、H血型物质测定。

后者只对80%HAB分泌型的人有用。

10.5.7如试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水1滴，混合，往往可使缗钱现象消失。

应注意不应先加盐水1滴于受检者血清中而后和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释。

10.5.8如受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用下列方法进行鉴别：

（1）观察细胞与抗-A及抗-B的凝集强度，与抗-A的反应要比与抗-B的反应强。

这种区别用玻片法作试验更为明显。

（2）用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗-B不凝集自身红细胞上的类B抗原。

（3）检查唾液中是否有A、B物质，如果时分泌型，可检出A物质而无B物质。

（4）核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。

10.5.9如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的Cad抗原活性；

被细菌酶激活的T或TK受体；

或产生机制不太明了的Tn受体所引起。

多凝集红细胞具有以下特点：

⑴能被人和许多家兔的血清凝集。

⑵能与大多数成年人的血清凝集，不管有无相应的同种抗体。

⑶不被脐带血清凝集。

⑷通常不与自身的血清凝集。

⑸如有条件可用外源凝集素加以鉴别。

11注意事项

11.1分型血清质量性能符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。

11.2试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。

11.3试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混合，用生理盐水洗涤1次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原。

11.4操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。

11.5按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4oC为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍再室温（20~24oC）内进行试验，37oC可使反应减弱。

11.6离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。

11.7观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。

11.8判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。

Rh（D）血型鉴定（盐水法）

1原理：

：

一般临床上根据红细胞表面D抗原的有无，将Rh血型分为RH阴性和阳性。

如果红细胞表面有D抗原，与细胞株BS226细胞产生的单克隆抗体发生特异性反应，使红细胞发生凝集，为RH阳性，如不发生凝集，表明红细胞表明没有D抗原，为RH阴性。

6.1试剂名称：

RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）

6.2试剂生产厂家：

德国Biotest.AG

6.3试剂保存;

2-8℃避光保存，有效期为1年，在效期内用。

8操作步骤及结果判断

8.1玻片法

8.1.1在玻片方格中加1滴抗D试剂。

8.1.2再加2滴2%-5%红细胞生理盐水悬液于抗D混合试剂中。

8.1.3用干净玻棒完全搅拌上述红细胞与抗D试剂。

8.1.4前后左右倾斜玻片且同时观察凝集现象。

8.1.5判断标准

8.1.5报告;

受检者红细胞Rh（D）血型：

阳性或阴性。

出现阴性、弱阳性或结果不清楚时，进行试管法试验。

8.2试管法

8.2.1在试管中加1滴抗D试剂。

8.2.2再加1滴滴2%-5%红细胞生理盐水悬液于上述试管中，混匀。

8.2.3以3200-3400r/min离心15-30秒。

8.2.4轻轻振摇试管使红细胞重悬，肉眼或显微镜观察有无凝集现象。

8.2.5结果：

凝集这为阳性反应，反之为阴性反应。

报告方式同玻片法。

9操作性能快速简便，特异性强，重复性好。

11.1Rh血型系统的抗体多由免疫产生，血清中有很多天然抗体存在，故不需作反定型试验。

11.2Rh血型鉴定要严格控制温度与时间，因Rh抗原抗体凝集反应的凝集块比较脆弱，观察反应结果，应轻轻弹动试管，不可用力摇动。

11.3试剂质量性能符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。

11.4试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。

11.5操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。

11.6按理IgM抗-D与相应红细胞的反应温度以4oC为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍再室温（20~24oC）内进行试验，37oC可使反应减弱。

11.7离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。

11.8观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。

11.9判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。

抗血清效价测定

1.目的

抗体效价测定是一种半定量检测抗体浓度的方法。

把效价视为抗体的含量，在临床输血检验中用于鉴定标准血清效价的测定，以检测抗血清试剂的质量。

2.检测试剂：

2.1试剂Ⅰ

2.1.1试剂Ⅰ名称：

2.1.2试剂Ⅰ生产厂家：

2.1.3试剂Ⅰ组成

2.2试剂Ⅱ

2.2.1试剂Ⅱ名称：

2.2.2试剂Ⅱ生产厂家：

2.2.3试剂Ⅱ组成：

3.原理

将被检抗血清用生理盐水作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝聚强度。

以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现肉眼明显可见凝聚的最高血清稀释倍数来表示抗体的效价。

4.操作步骤

4.1取10支小试管，用加样器每管中加生理盐水0.2ml，在第一管中加入0.2ml被检血清抗-A或抗-B血清，混匀后吸取0.2ml加入第二管，以此类推，至第10管，最后弃去0.2ml。

1-10管的稀释度分别为1：

1，1：

2，1：

4，1：

8，1：

16，1：

32，1：

64，1：

128，1：

256，1：

512。

同样操作，再配制以上浓度10支小试管，已作对照操作。

4.2将标准红细胞A或B及O细胞用生理盐水稀释为2%浓度。

4.3于每管中加入2%A或2%B型红细胞生理盐水悬液0.1ml，混匀。

4.4对照试验：

于另外10支试管中每管加入2%O红细胞悬液0.1ml。

4.5室温孵育15分钟。

4.6以3000r/min离心1分钟，以出现（+）凝集强度试管的血清稀释倍数的倒数为该抗血清的效价。

5结果判断

5.1一般盐水凝集试验可立即观察，或置室温1小时观察结果。

5.2若出现低稀释凝集强度比高稀释凝集强度要强，说明有前带现象发生。

5.3对1份血清重复测定，结果可能不一样，如果只有一个稀释度的差别，是正常误差范围。

5.5抗-A血清效价应该>

128,抗-B血清效价应>

64。

6注意事项

6.1稀释操作时要准确，避免稀释不匀出现“跳管”现象。

6.2稀释液的容量越小，可能产生的误差越大。

如果可能，可以增大稀释稀释容量。

室内质量控制

1目的

制度本制度，为了选择适当的实验方法和步骤，连续评价本实验室检测工作的可靠性程度，监测和控制本实验室检测工作的精密度，提高常规工作中批内、批间样本检测的一致性，以确定测定结果是否可靠，以保证输血的安全可靠性。

2范围

适用于本院输血科工作人员室内质量控制。

3职责

输血科工作人员需按本制度常规进行室内质控操作。

4具体程序

4.1试剂质控

4.1.1ABO血型试剂质控

4.1.1.1检测项目：

抗A抗B血清试剂要进行抗体效价、特异性、亲和力的测定，ABO红细胞悬液要进行特异性检测。

以及外观，有效期的检查。

4.1.1.2检测频次：

每新一批次，同批次新开瓶，每日开始试验时采用相互验证的方法检测ABO细胞和抗A、B血清的凝集强度，特异性。

4.1.1.3操作：

详见“抗血清效价测定SOP”。

4.1.1.4结果分析：

特异性：

抗A只能和A细胞发生凝集，抗B只能凝集B细胞，凝集强度4+;

O细胞无凝集。

效价：

抗A血清效价≥256,抗B血清效价>

≥128.亲和力：

凝集开始时间<

15s,3min凝集块>

1mm2,外观合格，并在有效期内才合格，否则失控。

4.1.2抗D血清质控

4.1.2.1检测项目：

效价，阴性质控，阳性质控，有效期，外观

4.1.2.2质控品：

来源：

本实验室检测出的O型Rh阳性红细胞和O型Rh阴性红细胞：

制备：

洗涤两种红细胞并制备成40%的红细胞悬液；

保存：

2-8℃储存。

4.1.2.3检测频次：

每新一批次，同批次新开瓶时检测效价；

每日开始试验时按常规操作检测阴阳质控。

4.1.2.4结果分析：

抗D血清效价≥64，阳性质控出现红细胞凝集4+，阴性质控红细胞不出现凝集，在有效期内，外观合格，否则视为失控。

4.1.3凝聚胺试剂质控

4.1.3.1检测项目：

有效期，外观，IgG类抗体阴性、阳性质控，IgM类抗体质控。

4.1.3.2质控品：

IgG类抗体阳性质控品：

标化后的IgG抗D与O型RhD阳性红细胞；

IgG类抗体阴性质控品：

AB型血清（经确认无不规则抗体）与O型RhD阳性红细胞。

IgM类抗体质控品:

3个ABO血型互不相同的EDTA抗凝血全血标本，其中一个作为受者，另外2个作为供者。

4.1.3.3检测频次：

每新一批次，同批次新开瓶，每日开始试验时。

4.1.3.4：

IgG类抗体阳性质控：

标化后的IgG抗D与O型RhD阳性红细胞进行合血；

IgG类抗体阴性质控：

AB型血清（经确认无不规则抗体）与O型RhD阳性红细胞进行合血。

IgM类抗体质控:

3个ABO血型互不相同的EDTA抗凝血全血标本，其中一个作为受者，另外2个作为供者，进行交叉配血试验。

详细操作见凝聚胺法交叉配血SOP。

4.1.3.5结果分析：

IgG类抗体阳性质控出现相应的凝集强度，IgG类抗体阴性质控不出现凝集，IgM类抗体质控反应结果与预期一致。

在有效期内，外观合格。

符合以上视为在空，否则为失控。

4.2过程质控

4.2.1ABO、RhD血型鉴定质控

4.2.1.1质控品来源：

本实验室内检测出的A型Rh阴性EDTA抗凝血全血标本及B型Rh阳性EDTA抗凝血全血标本。

（质控品采用微柱凝胶法和玻片法两种方法进行定标。

阳性结果均为4+）。

4.2.1.2操作：

每日开始试验前，按ABO、RH血型鉴定SOP常规操作。

4.2.1.3结果分析：

每次检测出血型结果必须是一致并与质控品原来血型一致，凝集强度正鉴定无误差，否则为失控。

4.2.2交叉配血试验质控（微柱凝胶法）

4.2.2.1质控品来源：

IgM组：

成都市血液中心的三个献血员的红细胞悬液合血辫子，其中三个标本的ABO血型互不相同并其中一个作为受者另外两个作为供者。

IgG组阳性质控品：

卫生部室间质评活动中选择1个含有不规则抗体（IgG）的质控标本作为受者，一个含有与该受者不规则抗体反应的抗原并且与该手指ABO同型的质控标本作为供者；

IgG组阴性质控品：

卫生部室间质评活动中选择1个含有不规则抗体（IgG）的质控标本作为受者，一个不含有与该受者不规则抗体反应的抗原并且与该手者ABO同型的质控标本作为供者。

4.2.2.2操作：

每次开始试验前，按微柱凝胶法交叉配血SOP常规操作。

4.2.2.3结果分析：

IgM类抗体质控反应结果与预期一致，IgG组阳性质控主侧凝集，次侧不凝。

主侧次侧均不出现凝集。

否则为失控。

4.2.4不规则抗体筛查（微柱凝胶法）

4.2.4.1质控品:

卫生部室间质评活动中选择1个含有已知类型不规则抗体的血清标本及一个不含有不规则抗体的血清标本。

4.2.4.2按不规则抗体筛查SOP常规操作

4.2.4.3结果分析：

阳性质控出现相应的强度的凝集，阴性质控不出现凝集，否则为失控。

4.3质控结果失控后的处理

4.3.1重复检测，排除人为误差

4.3.2更换质控品，以查明质控品是否过期或变质；

4.3.3更换质控品以后仍不在控，可以进行仪器维护后再测失控项目，可排除仪器问题引起的失控。

4.3.4经上述处理以后仍然失控，应停止相关失控检测项目（可使用替代检测方法），立即与试剂或仪器厂家沟通，寻求技术上的支持。

血型鉴定（微柱凝胶法DiMed）

1.目的：

为了进一步提高ABO和RH血型鉴定的检测水平，以最大程度保障临床输血的安全性。

2.适用范围：

适用于目前输血科所有血型检测标本。

3.职责：

输血科主任负责对该标准化操作规程监督执行。

4原理

ABO血型系统的红细胞遗传表型是根据每个人红细胞上是否存在A和/或B抗原以及血清中相应的抗体来决定的，将人分为四种血型：

A型、B型、AB型和O型。

红细胞上有A抗原的A型血清中有抗B，红细胞上有B抗原的B型血清中有抗A，红细胞上有A和B抗原的AB型血清中无抗A和抗B，红细胞上无A和B抗原的O型血清中有抗A和抗B。

Rh血型系统有5种抗血清，即抗C、抗C、抗D、抗E、抗e，可以检出18种不同的型别，但由于临床实验室很难得到这5种抗血清，况且在Rh抗原中，抗原性最强，出现频率最高，临床上影响最大的是D抗原，所以临床上一般只作D抗原的鉴定，受检者红细胞能与抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集者为阴性。

微柱凝胶检测法是凝胶分子筛技术和免疫学抗原抗体反应相结合的产物，通过调节凝胶（葡聚糖）的浓度，控制凝胶间隙大小，只允许游离红细胞通过，从而达到分离游离红细胞和凝集红细胞的目的。

如果红细胞沉积在凝胶管底部，表明红细胞未发生凝集，即凝集实验阴性；

如果红细胞聚集在凝胶上部或中部，表明红细胞发生凝集，即凝集实验阳性。

5标本

5.1标本种类：

新抽取的抗凝血

5.2标本要求：

5.2.1抗凝剂：

EDTA（浓度15g/L）或枸橼酸钠（浓度32g/L）抗凝

5.2.2采血量：

至少不低于5ml的静脉血（加入试管后注意与抗凝剂混匀）

5.2.3离心要求：

转速必须大于3500转/分，时间必须大于15分钟

5.3标本采集要求

5.3.1采血时，一定要认真核对病室、床号和病人姓名，无误后再抽血。

5.3.2血标本容器要清洁干燥并事先贴好标签，加血标本前要认真核对、无误后再将血液注入。

5.3.3血标本标签填写必须与申请单上的病人姓名、科别、床号、编号完全一致。

5.3.4采血者要在申请单和标本标签上签名，写清采血时间，及时送检。

5.3.5采血时要防止溶血及多量组织液混入（多发生在静脉穿刺不顺利勉强抽血时）在病人输液时采集标本，必须从未输液的一侧肢体抽取，绝不允许在输液管接头处采集。

5.4.标本储存待测标本在2-8℃下的保存时间为72小时，已检测标本2-8℃冰箱保存7天。

5.5.标本运输室温保存

5.6.标本拒收标准

5.6.1严重溶血、受污染，或者含有凝块的样品。

5.6.2标本床号姓名等与检验单不符。

5.6.3标本上未注明采血者姓名

6试剂

6.1试剂名称：

DiaMed凝胶卡、A1.B标准反定细胞（0.8%）、达亚美2号稀释液（Dil2）

6.2试剂生产厂家：

DiaMed（瑞士达亚美）

6.3试剂说明：

每张DiaMed凝胶卡由6个微孔管组成

（A-B-D-Ctrl-A-B）

7.仪器DiaMed-IDMicroTypingS