液质联用仪 液质AB4500操作规程Word文件下载.docx

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BB、关机

1.停止输液：

关停针泵或液相泵，或断开输液管线（一般质谱主机Standby后液相系统也自动待机，输液泵自动关停，但建议操作人员再次确认，必须保证没有任何液体再泵入质谱）

2.使仪器待机，并灭活配置

2.关闭质谱仪主机电源开关（5500系列只需按下电源开关旁的VENT按键排放真空）

3.机械泵继续工作至少30min

4.关闭机械泵上的电源开关（5500系列会自动关停机械泵，待机械泵停止后即可关闭5500系列主机上的电源开关）

5.关闭气体发生器或气瓶

二.仪器校准与调谐

本节包括如何在Analyst软件中进行手动质量校准，一般仪器在开关机后才需要做调谐或每个季度例行调谐。

11、打开analyst软件，双击HardwareConfigure，在硬件配置HardwareConfigure菜单下单击massSpecOnly（只连质谱机），单击Activeprofile激活仪器。

硬件配置表中massSpecOnly出现绿勾后，表示质谱仪主机与计算机通讯正常，关闭HardwareConfigurationEditor。

3、双击左边工具菜单NavigationBar中的ManualTuning，打开一个空白质谱参数设置及运行窗口，进入手动调谐模式：

4、在project工具条中选择installation--开头的项目文件夹

5、点击Fileopen

6、选择AcquisitionMethod打开四极杆校准方法文件列表（如：

Q1PosPPG.dam，Q1NegPPG.dam，Q3PosPPG.dam，Q3NegPPG.dam方法文件，文件名有可能不同）。

根据要校准的目标（Q1正离子、Q1负离子、Q3正离子、Q3负离子）选择相应的方法打开。

7、该方法会出现在质谱参数设置及运行窗口：

8、用针泵进质量校准溶液，调离子源喷雾针位置到5mm处。

对于不同仪器、测定极性，要用不同的PPG校准溶液，针泵流速10ul/min

9、采集PPG标准品质谱数据：

在质谱参数设置及运行窗口中点击Start，数据采集时在窗口下部出现两个实时数据图：

左边TIC（总离子流图），右边质谱图。

待采集完成后，点击resolution，再点击advanced，弹出分辨率窗口，再在右边质谱图中按鼠标右键出现一菜单，选菜单中Openfile：

10、单击其中任一个PPG质谱峰的图（此图边框变蓝），然后在在工具条下点击Calibratefromspectrum按钮（）

11、在出现的MassCalibrationOptions窗口中，从Standard下拉菜单选择合适的标准品类型：

PPGsPos（正离子）或PPGsNeg（负离子）；

然后点击

12、仪器校准

结果图中有三栏:

上栏显示此次校准与理论值的质量偏差（massshift），中栏显示所

有PPG校准峰的半峰宽（分辨率），下栏显示此次校准与上次校准所有PPG校准点峰强度变化的百分比。

AA、手动调整分辨率

目标是让每个数据点都应该落在两条虚线之间，如果某些PPG峰宽超出分辨率范围，应进行手动调整。

调整Offset值会影响分辨率，以中心实线为基准，半峰宽偏大的调大offset值（考虑正负），半峰宽偏小的调小offset值（考虑正负），对Offset值调整幅度为每次0.003，改变offset值以后按Apply钮。

关闭当前其他窗口回到采集窗口，重新点击start采集数据（在开始采数据时按Yes确认要保存这些修改），重复9-12步直到所有点的分辨率合乎分辨率范围。

B、质量校正

当offset值设定合适，所有PPG离子的分辨率在俩虚线范围内后，进行最后的质量

校准。

再采集一次PPG数据（重复9到11步）；

在MassCalibrationReport按Updatemasscalibration按钮进行更新，软件系统会提示是否用新的校准曲线替换已存在的校准曲线，当出现提示时，回答“YES”

三.化合物参数优化

本节描述如何用针泵连续进样（10ul/min），在ManualTuning窗口下优化化合物参数。

11、找母离子：

Q1MS全扫描

A、选择你的project；

双击NavigationBar下的Manual--Tuning；

从Scan

Type下拉菜单中选择：

Q1Scan（Q1）；

选择极性：

Positive（正离子）、Negative

（负离子）；

勾选Center/with选项；

设置采集时间Duration:

5min；

在表格中Center（Da）栏填入待优化化合物的分子量，With（Da）栏填6，Time（sec）填1；

左侧Source/Gas项用以下推荐值：

CUR10，IS:

5500（正离子）或-4500（负离子），TEMGS115，GS20，iheon；

Compound项用以下推荐值：

DP60，EP10或默认值；

B、运行针泵（10ul/min）,点击start采集数据，待左侧窗口TIC序号稳定后再继续采集1min，点击stop，在TIC图上按住鼠标左键托选最后1min谱图，再双击选中的谱图，在下方弹出窗口记录目标化合物峰的中心对应的横坐标分子量作为该化合物的准确分子量。

2、找子离子：

ProductIonScan（MS2）

A、在当前方法文件的ScanType下选择ProductIonScan（MS2）；

去除Center/with选项；

在Productof栏填入上一步找到的母离子的准确分子量；

在表格中start（Da）栏填50，stop（Da）栏填入质量大于母离子分子量即可，Time（sec）填1；

检查Source/Gas项是否与Q1扫描时相同（CAD默认值即可）；

Compound项设定DP60，EP10或默认值，CE5，CXP15或默认值；

B、点击start采集数据，手动调节CE值（每次增加5），直到右侧质谱图中母离子的信号约只有最强碎片离子信号三分之一左右，再保持继续采集1min，点击stop，在左侧TIC图上按住鼠标左键托选最后1min谱图，再双击选中的谱图，在下方平均谱图中记录两个最强的碎片离子分子量。

3、优化离子对参数：

MRM

A、在当前方法文件的ScanType下选择MRM；

在表格中Q1栏填母离子分子量，Q3（Da）栏子离子分子量，Time（msec）填50，ID栏填化合物名称（信号强的离子对名称后空格加1，信号弱的为2），每个离子对填一行；

检查Source/Gas项是否与Q1扫描时相同（CAD默认值即可）；

B、点击EditRamp钮，出现以下窗口，在parameter下拉菜单里选择DP,用默认值，点击OK.

C、点击start开始优化，在右侧质谱图上记录峰轮廓最高的位置对应的横坐标的DP值，填入Compound的DP项。

D、点击EditRamp钮，在parameter下拉菜单里选择CE,用默认值，点击OK，点击start开始优化，采集结束后在右侧质谱图上按鼠标右键并选择相应的离子对，记录其峰轮廓最高的位置对应的横坐标的CE值，再在上方表格内点击鼠标右键选择CE单击，表格中则会显示不同离子对的CE值一栏，填入刚才记录的各离子对的最优CE,最后点击菜单Filesave即可保持该化合物参数，填入方法名称即可.

四、建立LC--MS方法（以岛津液相为例）

1、开HPLC电源，将HPLC系统接上柱子，将出口管线与离子源连好。

调离子源喷雾针位置到2mm处，双击HardwareConfigure，在硬件配置菜单下单击4000+LC（液相与质谱联用），单击Activeprofile激活仪器。

2、选择你的Project；

双击Buildacquisitionmethod，弹出方法模板。

在模板左侧点击acquisitionmethod，模板右边显示对应的参数，确认synchronizationmode选择LCSync。

3、点击方法模板左侧的MRM,在模板右侧ScanType下选择MRM；

在polarity下选择化合物极性：

Positive（正离子）、Negative（负离子）；

Duration处填写与液相分离相同的时间；

在表格中Q1栏填母离子分子量，Q3（Da）栏子离子分子量，Time（msec）填50，ID栏填化合物名称（信号强的离子对名称后空格加1，信号弱的为2），在表格中右键分别点击DP、EP、CE、CXP，填入之前优化好的DP、CE；

最后点击Editparameter设置离子源参数：

Source/Gas项用以下推荐值：

CUR25，IS:

5500（正离子）或-4500（负离子），TEM550，GS155，GS255，iheon；

4、点击模板左边的shimadzuLCsystem，在右边的pumps栏下，设置pumpingmode为binaryflow，total流速0.2-0.5，泵系统最大压力；

在timeprogram栏下设置液相梯度。

最后点击保存按钮保存此方法并关闭方法窗口。

五、建立采样列表

1、双击Buildacquisitionbatch，在右边窗口sample项内点击addset，再点击addsample，在弹出的窗口内的number（进样样品数）处填入需要进样的样品个数，点

ok。

2、在加入的样品列表内依次设置samplename（样品名称）、rackcode（样品架类型）、viaposition（样品瓶的位置）、acquisition下拉菜单内选择之前建立的LC-MS方法、inj.volunme（进样体积）。

3、在quantitation项下，在每个样品后的下拉菜单内选择样品类型，标准曲线选standard，待测样品选unknown。

4、在submit项下点击submit按钮以提交样品序列。

5、点击工具条上的viewqueue按钮即可查看已提交的样品，首次进样先点击工具条上的equilibrate按钮以平衡仪器，在弹出的平衡窗口中选择即将做样的采集方法平衡系统10min，点击ok后右下角图标会变黄，待平衡结束后此处图标会变成绿色，此时即可点击startsample按钮采集样品信息，仪器会自动对已提交的全部样品进行采集。

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