Bt乳剂产气试验报告文档格式.docx

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（一）显微镜涂片检查：

在处理的一系列样品中，每组任抽一瓶样品作涂片检查（附表Ⅲ结果表明：

‘3、6、8、11’中含有不同程度的异染物质，从而初步确定产气的机理是由于厌氧微生物的活动引起。

（二）生化分析

微生物赖以生存的环境主要靠营养。

因此，将

（一）中的5瓶样品进行糖、氮生化分析（附表Ⅲ）结果表明：

（1）从糖类消耗情况来看：

14<

11<

8<

6<

3

（2）从NH2－N的利用情况来看：

由此确定从3、6、8、11、14微生物活动的顺序依次减弱的。

（三）气体成分分析：

通过生化分析得知营养成分消耗中有厌氧微生物的活动，究竟活动的程度如何，还需进行气体成分的分析才能知道营养物质代谢的可能途径。

具体试验方案如下：

（1）利用醋酸铅试纸及红色石蕊试纸测定H2S及NH3的产生从图4中可以看出，“1～12”中均有不同程度的使醋酸铅试纸变黑色，及红色石蕊试纸变兰色，从而确定系列样品中产生了H2S及NH3。

反应式如下：

pb（Ac）2＋H2S＝PbS↓（黑色）＋2HAc

（2）CO2气体的检验：

在方案

（1）中确定了H2S的存在，再按下列方案检验CO2的存在用一带针头的乳胶管将气体从产生的瓶中导出，按下列程序进行试验：

证明无SO2

|

不退色

①|品红溶液

气体

②|清石灰水

白色浑浊

可能有CO2、H2S等气体

|继续通入气体

白色浑浊溶解，又转清

|

可能有CO2、H2S

反应式：

CO2＋Ca（OH）2＝CaCO3↓（白色）＋H2O

由系列试验得知，气体成分中含有H2S、NH3，可能还含有CO2，以及H2、CH4、C2H2、C2H4等气体，但鉴于我厂目前实验设备的局限性，不可能进一步的化学鉴定。

（四）酸碱度变化

在未经酸碱处理的样品中，用精密试纸测定样品PH值，并变化情况如下：

开始略有下降的趋势，然后再慢慢稍有回升及至平稳，图示如下：

PH

8

6

4

2

时间（天）

02461012

PH值变化示意图

说明厌氧微生物开始利用糖类产生一些酸类物质，使PH值下降，然后酸类物质在微生物本身的酶系催化作用下又转变成其他物质，这种物质可能为中性物质。

使PH值慢慢回升。

（五）综合分析

从上述分析结果综合来看，厌氧微生物利用残余的培养基进行发酵产生一些气体，据我们分析可能是产气气体杆菌活动所致，使主要代谢途径可能有：

（1）糖代谢：

产气杆菌具有δ－乙酰乳酸合酶系，能利用葡萄糖产生3－羟丁酮（乙酰甲基甲醇），从而进一步产生2、3－丁二醇，产气气杆菌具有作用于丙酮酸的第三个酶系；

δ－乙酰乳酸合成酶系而进行丁二醇发酵。

δ－乙酰乳酸合成酶系带有硫胺素焦磷酸（TPP），它催化丙酮酸生成乙酰乳酸的反应？

？

，在第一步反应中，从丙酮酸生成羟乙酰一硫胺素焦磷一酶复合体和CO2，然后又将活化了的乙醛基转移到第二个丙酮酸分子上，生成乙酰乳酸：

CH3COCOOH＋（H）TPP－E→CH3－CH－TPP－E＋CO2

OH

羟乙酰－TPP－酶

CH3－C0

CH3－CH－TPP－E＋CH3COCOOH→CH3－C－COOH＋（H）TPP－E

||

OHOH

乙酰乳酸

接着乙酰乳酸羧酶和2、3－丁二醇脱氧酶的催化下生成2、3－丁二醇，由于进行了二醇发酵的产气气杆菌也具丙酮酸－甲酸裂解酶，甲酸－氢裂酶和乳酸脱氢酶等。

因此它们除生成大量的丁二醇外，还同时产生甲酸、乳酸、乙醇、CO2和H2等最终产物，如图：

（见下页）

2、氮炎代谢：

氮类代谢大多转变为氨基酸的代谢，而氨基酸的代谢途径在产气气杆菌中，又主要是通过脱硫基脱氨基反应而进行的。

例如：

（详见第8页）

此外还有其他一些营养物质代谢途径因时间关系未进行。

葡萄糖 

（H）

ADP

1

2

乳酸

ATP

丙酮酸

5

乙醛

乙酰COA

甲酸

7

6

4

乙醇

CO2

δ－乙酰乳酸

8

3－羟基丁酮

9

2、3－羟基丁酮

丁二醇发酵途径

1、EMP途径中的各种酶；

2、乳酸脱氢酶；

3、丙酮酸甲酸裂角酶；

4、甲酸一氢裂解酶；

5、乙醛脱氢酶；

6、醇脱氢酶；

7、δ－乙酰乳酸合成酶；

8、δ－乙酰乳酸胶羧酶；

9、2、3－丁二醇脱氢酶。

半胱氨酸

脱硫氨基酶

SHCH2

分子重排

|||

H2S

CH2 

C－NH2

||

CHNH2COOH

COOH

L－半胱氨酸δ－氨基丙稀酸

CH3 

CH3

自来水解

C＝NHC＝O＋NH3

COOH 

六、问题与探讨

（一）Bt乳剂通过一系列的试验，解决了胀、裂瓶现象，但经过处理后对产品本身的性能——毒力问题是否带来一定的影响，为此，利用菜青虫的2～3龄幼虫作了生测试验（见附表Ⅳ、图五）从表中可以看出，不产气的样品（13～15）其毒力并无什么影响，相反较之其他处理稍有略高，究其原因等进一步探讨。

（二）从产气试验附表Ⅰ来看，原来产气的处理组随着试验时间的延长，在一定的恒温下，由以前的膨胀状态逐渐开始变缓，甚至有向处理前（空瓶样）状态倾向，至于造成这种现象的原因，现在还有待进一步去探索。

Bt乳剂的产气试验，是在时间不太长，条件有限的情况下进行的，可能或多或少存在不同程度的问题，试验结果和分析是否成立，仅仅是我一人之见，敬请专家和老师们提出宝贵的意见和不同看法。

附表Ⅰ：

BT乳剂产气试验过程及结果

编号

处理

10

11

12

13

14

15

√

氧化钠

苯甲酸钠

处理温度

（℃）

38～40

38～42

外

观

检

查

11月15日

16·

04

05

00

15·

85

01

20

90

25

11月17日

50

40

60

30

11月19日

80

11月22日

11月30日

12月6日

12月10日

说明：

1、外观检查：

指试验塑料瓶瓶身周长（厘米）2、11月15日为初始塑料瓶身周长

附表Ⅱ：

PNH及H2S的显色反应

－

　－

　　－

＋＋

　＋＋

＋

　＋

＋＋＋

“”斜线上方为pb（Ac）试纸的显色反应，右下方为石蕊试纸的显色反应。

符合“+++、++、++”分别表示显色不同程度。

“-”为不显色。

附表Ⅲ：

Bt乳剂菌液分析

编

显

微

镜

分

析

处

理

前

芽孢

晶体

后

芽孢，少量晶体，大量染成红色的细杆菌，短杆菌。

芽孢，部分晶体，少部分染成红色的细杆菌，短杆菌。

芽孢，晶体，少量染颗粒

生

化

总

糖

（%）

0·

53

70

79

84

氨

基

氮

（mg/ml）

21

26

35

37

显微镜分析系采用“孔雀绿染色涂片”。

附表Ⅳ

Bt乳剂致病率测定记录表

处理日期：

93-12-9

昆虫类别

组别

菌液情况

感染方法

试验

虫数

（条）

死亡检查数

备注

来源

浓度

24小时

死亡率

Ⅰ

清水

500×

喂毒

3（－2）

Ⅱ

1～3

15（－2）

80·

Ⅲ

4～6

16（－2）

81·

Ⅳ

7～9

14（－2）

71·

Ⅴ

10～12

16

76·

Ⅵ

13～15

17（－１）

87·

（一）为试验幼虫化蛹数。