Agilent高效液相校验方案二Word文档下载推荐.docx

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利用试样中组分在色谱柱中固定相和流动相间分派或吸附特性的不同，由流动相将试样带入色谱柱中进行分离，经检测器检测，依据组分的保留时刻和响应值（峰面积或峰高）进行定性、定量分析。

本公司高效液相色谱仪的类型及相关参数

类别

泵与自动进样器类型及参数

检测器类型及参数

柱温箱类型及参数

色谱工作站

第Ⅰ类

Agilent1100Series

型号：

G1322A-G1311A-G1313A

流量范围：

耐压限度：

400bar

压力波动：

1ml/min时，≤%

进样体积范围：

l-100l

AgilentVWD检测器

G1314A

波长范围：

190nm～600nm

灵敏度：

～4000ATT

检测池体积：

14μl

70bar

类型：

Agilent1100Series

G1316A

精度：

℃

控温范围：

-10～80℃

Agilent1100化学工作站

第Ⅱ类

Agilent1200Series

G1322A-G1311A-G1329A

G1314B

Agilent1200Series

Agilent1200化学工作站

3.校验结果处置及校验周期

校验结果处置

按本报告校验合格的仪器方可利用；

假设校验不合格那么禁止利用，申请维修后再按本报告校验。

校验周期

校验周期为一年。

日常校验

在日常利用进程中，还须用样品测定的系统适用性来衡量仪器的当前状况；

具体校验方式及合格标准以当天所检样品的标准操作进程中的系统适用性实验为准。

4.校验依据及参考资料

USP附录：

﹤621﹥色谱及仪器利用说明书；

中华人民共和国国家计量检定规程：

JJG705-2002《液相色谱仪》；

中华人民共和国药典2005年版二部附录VD液相色谱法。

5.仪器大体信息

仪器名称

仪器投入使用日期

仪器型号

仪器编号/使用地点

仪器制造商

上次校验有效期

6.校验项目及技术指标

校验项目

技术指标

外观

符合规定

输液系统

泵耐压检定

泵流量设定误差

min

＜±

流量稳定性误差

＜3%

＜2%

梯度准确度误差

柱温箱

设定值误差

≤±

2℃

控温稳定性误差

≤1℃

检测器

基线噪音

≤5×

10-4AU

基线漂移

10-3AU/h

最小检测浓度

≤4×

10-8g/ml

线性相关系数

r≥

波长准确度

示值误差应≤±

2nm，重复性误差应≤1nm

定性、定量

测量重复性

定性测量重复性误差（6次）

RSD≤%

定量测量重复性误差（6次）

7.校验条件、利用试剂及设备

校验条件

安装仪器的房间应清洁无尘，无易燃和侵蚀性气体，室内排风良好。

仪器应平稳地放在工作台上，便于操作，周围无强烈的机械振动和电磁干扰，仪器接地良好。

室温在15℃～30℃，检定进程中温度转变不超过3℃，室内湿度在RH20%～85％范围内。

电源电压：

220±

22V；

电源频率：

50±

。

利用试剂

名称

级别

批号

来源

有效期

水

纯化水

——

本厂自制

甲醇

HPLC

丙酮

萘-甲醇溶液

10-4g/ml

10-7g/ml

咖啡因

紫外分光光度计

标准溶液

国家标准物质

校验用设备

名称

规格

编号

校验有效期

温度计

分度值为1℃

电子分析天平

分度值为

无纸记录仪/铂电阻温度计

-100℃～300℃

8.校验内容及结果

外观校验项目及结果

检查结果

旋钮、开关是否正常

电源线、信号线连接是否紧密

液路接头是否紧密、牢固

状态指示灯是否灵敏

仪器完整性

结论：

校验人/日期：

复核人/日期：

输液系统的校验

泵耐压校验（此项目属仪器第一次校验时必检项目）

①校验方式：

a.将仪器各部份连接好（不接色谱柱），以甲醇为流动相，流速为1ml/min，启动仪器，压力平稳后维持10min,用滤纸检查各管路接口处应无湿迹；

b.堵住泵出口端（压力传感器以下），使压力达到最大许诺值的90%，当即停流速，在5min内观看各接口处应无泄漏。

②校验结果：

泵流量设定值误差和流量稳固性误差的校验

①校验方式：

将仪器连接好，以水为流动相，按下表设定流量，待流速稳固后，在流动相排出口用清洁、干燥、并已称重过的容量瓶搜集流动相，按下表设按时刻搜集，称重，通过以下公式计算。

流量设定值（ml/min）

测定次数

收集时间（min）

允许误差

式中：

Fm─设定流量下的实测值（ml/min）W2─容量瓶加水的质量（g）

W1─容量瓶的质量（g）t─搜集水的时刻（min）

ρ─实验室温度下水的密度（g/ml，参见附表一）

流量设定值的误差

流量稳固性误差

Fmean─同一组测量值的算术平均值（ml/min）Fs─流量设定值（ml/min）

Fmax─同一组测量中流量最大值（ml/min）Fmin─同一组测量中流量最小值（ml/min）

②泵流量设定值误差与流量稳固性误差校验结果

室温

室内湿度

水温

泵型号

水密度

泵A

FS=min，t=10min

FS=min，t=5min

次数

t（分钟）

W2-W1

Fmean

泵B

泵C

泵D

梯度准确度的校验

通过梯度操纵装置设置阶梯式的溶剂梯度程序。

A（或C）溶剂为水，B（或D）溶剂为含%丙酮的水溶液，A（或C）从100%变到0。

开机后先以A（或C）溶剂走基线（不通过色谱柱），基线平稳后,利用工作站调零点跋文下读数。

然后执行梯度程序，画出梯度转变曲线，并读出各类溶剂配比时工作站记录的读数。

重复测量两次，求出平均值。

从B（或D）溶剂的含量及相对应的工作站记录的读数Lmi和

值计算梯度准确度Toi，To为两次测定第i段梯度准确度的平均值，取To中最大的作为仪器梯度准确度误差。

Toi＝

100%To=

Toi---------第i段梯度准确度（%）；

Lmi---------第i段梯度工作站记录的读数；

-------5段梯度工作站记录读数的平均值，即

＝

To---------第i段梯度准确度两次测定准确度的平均值（%）；

Toi

（1）---------第i段梯度准确度第1次测定值；

Toi

（2）---------第i段梯度准确度第2次测定值。

②梯度准确度校验结果（色谱图见图～图）

时间（min）

8～9

17～18

26～27

35～36

44～45

B（或D）溶剂（%）

0～20

20～40

40～60

60～80

80～100

泵A与B组成二元梯度

第一次

Lmi

Toi

第二次

第i段梯度准确度平均值

标准规定

泵C与D组成二元梯度

柱温箱温度设定值误差与控温稳固性误差的校验

校验方式：

别离选择25℃、40℃、55℃作为可控温度，把校验铂电阻温度计探头置于柱温箱中部，通电升温，待温度稳固后，每隔10分钟记录一次，共计7次，求出算术平均值；

算术平均值与设定值之差为柱温箱温度设定值误差ΔTS，其最大值与最小值之差TC为控温稳固性误差，ΔTS应≤±

2℃，TC应≤1℃。

柱温箱温度操纵系统校验记录（图表见图～图）

25℃

读数

T平均1

ΔTS1

TC1

40℃

T平均2

ΔTS2

TC2

55℃

T平均3

ΔTS3

TC3

检测器性能的校验

基线噪音与基线漂移的校验

将仪器连接好，接色谱柱，以甲醇为流动相，流速为min，波长选254nm，灵敏度设为最灵敏档，仪器稳固后，记录基线40分钟～60分钟，计算基线噪音与漂移。

②基线噪音与基线漂移的校验结果（色谱图见图）

色谱柱

流速

波长

基线噪音（AU）

基线漂移（AU/h）

最小检测浓度的校验

同“基线噪音与基线漂移”校验条件，仪器稳固后，注入×

10-7g/ml萘-甲醇溶液20l，平行进两针，取其平均值，样品峰高应大于或等于两倍噪音。

计算公式：

式中:

CI——最小检测浓度（g/ml）HN——噪音（AU）

C——样品浓度（g/ml）H——样品峰高（AU）

②最小检测浓度的校验结果（色谱图见图与图）

项目

噪音（AU）

样品峰高（AU）

最小检测浓度（g/ml）

平均值（g/ml）

第1次测定结果

第2次测定结果

检测器线性范围的校验

①供试液：

周密移取丙酮至100ml量瓶中，以水稀释至刻度，作为丙酮贮备液；

别离周密移取丙酮贮备液、、、、、、、、，至25ml量瓶中，以水稀释至刻度，取得浓度别离为%、%、%、%、%、%、%、%、%，%的十个不同供试液。

②校验进程：

将检测器连接好，预热稳固后，以甲醇为流动相，波长为254nm，空载（不接色谱柱）稳固后依次注入系列供试液，同时记录峰面积，重复测定3次，取算术平均值，作出峰面积与丙酮浓度线性图，求线性回归方程与相关系数r（r≥）。

③检测器线性校验结果（图表见图～图）

检测器型号

流速

波长

丙酮浓度

面积

平均值

线性回归方程