药用大黄茎叶中有效成分的分析与测定毕业论文Word文件下载.docx

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药用大黄茎叶中有效成分的分析与测定毕业论文Word文件下载.docx

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毕业论文

论文题目药用大黄茎叶中有效成分的分析与测定

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所呈交的毕业设计（论文），是我个人在指导教师的指导下进行的研究工作及取得的成果。

尽我所知，除文中特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或组织已经发表或公布过的研究成果，也不包含我为获得及其它教育机构的学位或学历而使用过的材料。

对本研究提供过帮助和做出过贡献的个人或集体，均已在文中作了明确的说明并表示了谢意。

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1.设计（论文）的内容包括：

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3）中文摘要（300字左右）、关键词

4）外文摘要、关键词

5）目次页（附件不统一编入）

6）论文主体部分：

引言（或绪论）、正文、结论

7）参考文献

8）致谢

9）附录（对论文支持必要时）

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3.附件包括：

任务书、开题报告、外文译文、译文原文（复印件）。

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图表整洁，布局合理，文字注释必须使用工程字书写，不准用徒手画

3）毕业论文须用A4单面打印，论文50页以上的双面打印

4）图表应绘制于无格子的页面上

5）软件工程类课题应有程序清单，并提供电子文档

5.装订顺序

1）设计（论文）

2）附件：

按照任务书、开题报告、外文译文、译文原文（复印件）次序装订

[摘要]……………………………………………………………………………

Abstract…………………………………………………………………………

1文献综述……………………………………………………………………1

1.1大黄简介…………………………………………………………………1

1.2大黄有效成分………………………………………………………………1

1.2.1大黄酸…………………………………………………………………1

1.2.2大黄素…………………………………………………………………2

1.2.3芦荟大黄素……………………………………………………………3

1.2.4大黄酚…………………………………………………………………4

1.2.5大黄素甲醚……………………………………………………………4

1.3大黄药理作用……………………………………………………………4

1.4大黄有效成分的分析与测定………………………………………………5

1.4.1大黄中有效成分的提取方法……………………………………………5

1.4.1大黄有效成分的分离及含量测定方法……………………………………6

2实验材料与方法……………………………………………………………7

2.1实验仪器与试剂…………………………………………………………7

2.1.1实验仪器………………………………………………………………7

2.1.2试剂…………………………………………………………………7

2.1.3色谱条件………………………………………………………………8

2.2实验方法……………………………………………………………………8

2.2.1标准溶液的配制………………………………………………………8

2.2.2样品的配制……………………………………………………………8

2.3实验数据分析讨论…………………………………………………………8

2.3.1线性关系考查…………………………………………………………9

2.3.2精密度实验……………………………………………………………9

2.3.3样品含量的测定………………………………………………………9

2.3.4正交实验……………………………………………………………10

3结论…………………………………………………………………………10

4参考文献……………………………………………………………………11

5致谢…………………………………………………………………………12

6外文原文……………………………………………………………………13

7外文翻译…………………………………………………………………

药用大黄茎叶中有效成分的分析与测定

王兴伟

（陕理工化工学院化工专业1101班，陕西汉中723001）

指导老师：

季晓晖

[摘要]大黄主要成分为多种蒽醌类化合物。

目前，大黄蒽醌的测定方法主要有电化学法、光度法和色谱法，而高效液相色谱是最快捷最有效的测定方法。

本文采用了高效液相色谱法来测定大黄中大黄素、大黄酸这两种大黄蒽醌，相比传统液相色谱分析，该方法能准确简便的测定出大黄中的蒽醌类衍生物，大大节省了分析时间，为我国大黄科学研究提供一定的科学依据。

[关键字]高效液相色谱法；

大黄；

大黄素；

大黄酸

Analysisanddeterminationoftheactivecomponentsofmedicinalrhubarbstemandleaf

（Grade11,Class1,ChemicalEngineeringShaanxiUniversityofTechnology,

Hanzhong723001,Shaanxi）

Tutor:

JiXiaohui

Abstract:

Themainingredientsofrhubarbwereavarietyofcompoundsofthekindofcompound.Atpresent,thedeter-minationmethodofrhubarbismainlyelectrochemical,spectrophotometryandchromatography,whileHPLCisthemoste-efficientandeffectivemethodfordetermination,Thehighperformanceliquidchromatography（HPLC）methodtodetermine-emodinandrheinbothrhubarbanthraquinone,comparedtothetraditionalliquidchromatographyanalysis.Themethodcana-ccuratesimpledeterminationofrhubarbanthraquinonederivatives,savingalotoftimeanalysis,canprovidesomescientificbasisforRhubarbscienceresearchinourcountry.

Keyword:

HPLCRhubarbemodinrhubarbacid

1文献综述

1.1大黄简介

大黄是多种蓼科（Polygonaceae）大黄属（Rheum）的多年生植物的合称，也是中药材的名称。

在中国地区的文献里，“大黄”指的往往是马蹄大黄，大黄栽培种主要为掌叶大黄（R.palmatum），次为唐古特大黄（R.palmatumvar.tanguticum）和药用大黄（R.officinale）。

本实验样品为药用大黄，又名南大黄，这种大黄是蓼科植物药用大黄，被我国药典[1]规定为中药大黄的原植物之一，主要产于陕西、四川、湖北、贵州、云南、河南等地，生于海拔1200-4000米山沟或林下，多有栽培，根状茎及根供药用。

1.2大黄有效成分

大黄主要有效成分为蒽醌衍生物[2]，这些蒽醌衍生物以部分游离、大部分与葡萄糖结合成苷[3]的形式存在。

游离型的苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚和大黄酚等。

结合状态的蒽苷是泻下的有效成分，主要包括蒽醌苷和双蒽酮苷，双蒽酮苷中有番泻苷A、B、C、D、E、F，是改泻的主要成分，此外，还有食用大黄苷，鞣质类物质没食子酰葡萄糖苷、没食子酸、d-儿茶素，以及有机酸和雌激素样物质。

1.2.1大黄酸

大黄酸化学名为1,8-二羟基-3-羧基蒽醌，为咖啡色针晶，升华后为黄色针晶。

熔点为321~322℃。

不溶于水，能溶于吡啶、碳酸氢钠水溶液，微溶于乙醇、苯、氨仿、乙醚和石油醚。

药理药效：

（1）抗肿瘤[4]活性

大黄酸对小鼠黑色素瘤、艾氏腹水癌、肝癌、乳腺癌、P388白血病细胞都有一定的抑制作用。

腹腔注射大黄酸50μg/kg、21天，对小鼠黑色素瘤抑制率为76%。

对艾氏腹水癌抑制作用的IC50值为40μg/kg，大黄酸对体肝癌和小鼠腹水肝癌抑制作用的机制之一是影响其线立体和微丝结构。

（2）抗菌活性

在1.5~25mg/mL深度，大黄酸对葡萄球菌、链球菌、白喉杆菌、枯草杆菌、副伤寒杆菌、痢疾杆菌等均有抑制作用。

其作用之一是抑制线粒体呼吸链电子传递。

大黄酸对金黄色葡萄球菌的核酸和蛋白质合成有较强的抑制作用，对无细胞系统DNA的生物合成也有抑制作用。

（3）免疫抑制作用

大黄酸能抑制生物体抗体产生，抑制碳粒廓清能力，减轻免疫器官的重量，降低白细胞数。

（4）利尿作用

大黄酸能使尿中钠、钾离子浓度升高，促进输尿管蠕动，增加尿量。

（5）泻下作用

大黄酸本身无泻下作用，其肠内菌转化产物大黄酸蒽酮有泻下活性，能够降低结肠对钠和氯离子的吸收，增加钾离子分泌。

前列腺素在大黄酸蒽酮泻下活性上起到了重要作用。

（6）抗炎作用

大黄酸的1,8—二乙酰化物已用于治疗骨关节炎。

在肠道内，1,8—二乙酰大黄酸的乙酰基可完全被水解掉，有效物质形式应为大黄酸。

（7）治疗糖尿病肾病

研究表明，大黄酸具有改善糖代谢异常，逆转胰岛素抵抗，有效防止糖尿病肾病的独到疗效及新的药效特点，是目前已知治疗糖尿病肾病药物所不具备的，并且安全性较好。

研究人员对大黄酸进行了系统的体外和体内活性研究，发现大黄酸能够通过抑制细胞葡萄糖转运蛋白的功能，抑制细胞糖代谢己糖胺通路的活性，抑制内皮细胞PAI-1的表达，保护内皮细胞的功能，逆转胰岛素抵抗等发挥其治疗糖尿病肾病的作用，这些都是糖尿病肾病治疗中新的作用机制。

其药效已在一系列动物模型，如1型糖尿病肾病（STZ大鼠模型，NOD小鼠模型）和2型糖尿病肾病（高糖高脂饮食模型，db/db小鼠模型[5]）模型中给予了验证。

目前，国际上尚无类似的疗效如此独特的治疗糖尿病肾病的新药。

大黄酸抗癌作用分子机制：

大黄酸能有效抑制肺癌细胞A549的生长，通过四甲基偶氮唑盐比色法（MTT[6]法）发现大黄酸抑制A549细胞的生长。

凋亡实验[7]显示大黄酸处理的细胞明显呈现出染色质边缘化，出现凋亡小体，核固缩等凋亡形态，说明大黄酸能引起癌细胞的凋亡。

通过配体竞争性实验，结果发现大黄酸可以竞争9-cis-RA和RXR结合。

在更详细的分子机理研究中发现，9-cis-RA能减轻大黄酸对肺癌细胞的生长抑制。

糜蛋白酶的酶切实验发现大黄酸与RXR结合能诱导RXR的构型变化。

在转录水平上,报告基因实验得出大黄酸与RXR结合能分别抑制RXR同源二聚体、RXR/TR3和RXR/RAR异源二聚体的转录活性。

研究结果表明,大黄酸的作用靶点是RXR，它对癌细胞的生长抑制作用和促进细胞凋亡的作用是通过抑制RXR的转录激活来实现的。

大黄酸属于蒽醌类化合物，由于蒽醌类物质广泛存在于中草药，推测中草药中有一部分是通过影响RXR来行使作用的。

目前国内已有单体大黄酸作为一类新药已被国家科技部列为“十五”国家重大科技专项，旨在确证临床疗效、体内和体外活性实验结果的基础上，按照国家药品监督管理局有关中药一类新药的要求，完成临床前研制工作，并在获得临床研究批文的基础上，完成临床研究和取得新药证书。

在国外，大黄酸被用作合成关节炎良药双醋瑞因的原料。

大黄酸是配制保健品的最佳原料，可降脂减肥、通便排毒，清洁内环境，预防胃癌，延缓衰老。

1.2.2大黄素

大黄素又名朱砂莲甲素、泻素，化学名为1,3,8-三羟基-6-甲基蒽醌，为橙黄色长针状结晶（丙酮中结晶为橙色,甲醇中结晶为黄色），熔点256℃～257℃。

具有蒽醌的特殊反应。

几乎不溶于水，溶于乙醇及碱溶液。

（1）抗肿瘤活性的作用

大黄素对小鼠实体肉瘤S-180，小鼠肝癌、乳腺癌、艾氏腹水癌、淋巴肉瘤、黑色素瘤和大鼠瓦克瘤及肺癌A-549均有抑制作用[8]，其抑制率在30%以上。

在50mg/kg每日剂量下对小鼠黑色素瘤生长的抑制率为73%；

在75mg/kg每日剂量下对小鼠乳腺癌的抑制率为45%。

大黄素可延长P388白血病小鼠的存活期，延长率在40%以上，其作用机制之一是抑制癌细胞的DNA、RNA和蛋白质的生物合成，抑制癌细胞的氧化脱氢。

（2）抗微生物生长作用

大黄素对金黄色葡萄球菌209P、链球菌、白喉杆菌、枯草杆菌、副伤寒杆菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、流感杆菌、肺炎球菌、卡他球菌等均有抑制作用；

对临床常见厌氧性细菌有较强的抑制作用；

其MIC略高于甲硝唑，在8μg/mL浓度能使76%~91%的厌氧菌生长受抑。

大黄素抗菌作用机制与抑制线粒体呼吸链电子传递、抑制呼吸与氨基酸、糖和蛋白质代谢中间产物的氧化和脱氢等有关，抑制核酸和蛋白质合成的最终结果，使细菌生长受抑。

按70mg/kg剂量给大鼠腹腔注射大黄素，能够抑制大鼠抗体产生、抑制碳粒廓清能力、减轻免疫器官的重、降低白细胞数、降低腹腔巨噬细胞的吞噬功能。

体外在10mg/mL浓度对[3H]-TdR和[3H]-Urd参入淋巴细胞有明显的抑制作用。

（4）解痉、止咳作用

大黄素对乙酰胆碱所致离体大鼠肠管的痉挛有很强的抑制作用，约为罂栗碱的4倍。

大黄素还有明显的止咳作用。

（5）对心血管系统的作用

大黄素在小剂量对离体蟾蜍心脏有兴奋作用，而大剂量则有抑制作用。

大黄素还有降压作用。

（6）利尿作用

大黄素可使尿中钠和钾含量增加，促进输尿管蠕动，增加尿量。

（7）泻下作用

大黄素可抑制钠和钾离子从肠腔转运至细胞，使水分滞留在肠腔内，刺激大肠，促进其蠕动，从而起到泻下作用，但作用较弱。

大黄素有泻下活性，由于在体内易被氧化，实际泻下作用很弱，如与糖结合成苷类，则可发挥泻下作用。

大黄素除游离存在外，尚以还原状态（如蒽酚、蒽酮的衍生物）或与糖结合成苷类存在。

例如，在新鲜植物中发现的大黄素蒽酚或大黄素蒽酮（熔点250～258℃），都是大黄素的还原产物，如经长时间贮存，往往被氧化成蒽醌类。

大黄素-1-O-β-D-葡萄糖苷的熔点为189～190℃；

大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的熔点为239～241℃，二者都是大黄素与葡萄糖结合的苷，同时存在于大黄中。

前者也是虎杖中有抑菌作用的活性成分之一。

目前大黄素还应用于饲料（鱼、虾），主要作为诱食剂使用，提高鱼、虾吃食率，以促进生长。

临床应用口服大黄素在肠内易于吸收，2～3小时后血中即达最高浓度，以后慢慢下降，尿及胆汁在服药后4～8小时即达高峰，由尿排出可持续2天，在体内的分布以肝肾为最多。

亦有人把它制成注射剂，用于肌肉和静脉注射。

大黄素被吸收后，由肾排出大黄酚，它能使酸性尿变成棕黄色，使碱性尿变成紫红色。

在临床上，用大黄素纯品治疗肿癌，主要用于白血病、胃癌等肿瘤，而最常用的则用于抑菌。

它对很多细菌如各种葡萄球菌、溶血性链球菌、白喉杆菌、霍乱孤菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、皮肤真菌、枯草杆菌、草分枝杆菌、淋球菌、炭宜杆菌、草状菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌等均有抑制作用，其中对葡萄球菌、淋球菌、链球菌更为有效。

本品对真菌、病毒、原虫也有效。

同时，还具有利尿、利胆、解痉、降低血压抑制免疫功能等作用。

近代临床几乎各科都用，如治疗乙型脑炎与腮腺炎、伤寒、痢疾、尿路感染、淋病、肺炎、蜂窝组织炎、化脓性皮肤病、中耳炎、脉管炎等，和其他药物配伍治疗急性及亚急性阑尾炎、烧伤、小儿麻痹、湿疹及若干真菌引起的皮肤感染，另外可治疗肝炎、蛲虫、口腔炎、口唇溃疡、消化不良、高血压和动脉硬化等，因此，大黄素在临床上应用极广。