生物资源 试验讲义后修改Word文档格式.docx

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（1）水浸提-醇沉淀法

茯苓粉20g

乙酸乙酯400ml

索氏提取器回流6h

药渣+400ml水

回流提取6h

水层药渣

水溶性多糖碱溶性多糖

浓缩体积至30ml加100ml4%NaOH

Severge除蛋白搅拌，4℃静置4h

加3倍体积95%乙醇沉淀多糖离心

冷藏12h

离心，收藏沉淀上清夜

低温干燥加HCL调pH至6

加3倍体积95%乙醇

水溶性茯苓粗多糖冷藏3h

依次用无水乙醇、离心，收藏沉淀

丙酮、乙醚洗涤

低温干燥碱溶性茯苓粗多糖

依次用无水乙醇、

水溶性茯苓多糖纯品丙酮、乙醚洗涤

低温干燥

碱溶性茯苓多糖纯品

Severge法除蛋白：

加入溶液五分之一体积的氯仿，随之加入氯仿五分之一体积的正丁醇，剧烈震荡20min,离心，重复3次，直至蛋白质除尽，用Molisch反应检验是否为多糖成品。

在索氏提取器下端用毛玻璃板接取一滴提取液，如无油斑则表明提取完毕。

2.1.2酶解法

称取20g茯苓粉，按200μg/g的用酶量加入适量的木瓜蛋白酶，加入10倍量的水提取。

先60～70℃保持40min，后在沸水中提取1h，离心，分出上清夜，再用10倍量水提取一次，合并两次提取液，减压浓缩至30ml，用severge法除蛋白，用3倍量乙醇沉淀多糖，于冰箱中静置过夜，离心，收集沉淀物，用Molisch反应检验是否为多糖成品。

2.1.3超声提取工艺流程

茯苓粉碎（04目）—按比例加水混合（1：

:

5）—超声处理（800W，30min）—真空抽滤—滤液减压浓缩到原体积1/4一一95%乙醇沉淀（醇最终浓度75%）—离心—沉淀用无水乙醇，丙酮洗涤—真空干燥得粗多糖（TPS）

2.1.4微波提取多糖

准确称取1.0g茯苓样品干粉，放入圆底烧瓶，加入适量蒸馏水,按一定条件（540W、提取3min、液固比30）在微波炉内浸提茯苓多糖,离心、去沉淀，上清液浓缩、酒精沉淀,得样品粗多糖，测多糖得率。

五、各茯苓多糖提取方法的比较

方法

水浸提-醇沉淀法

酶法

超声辅助提取

微波辅助提取

提取率

提取时间长短

成本

操作繁简

六实验说明及注意事项

1.用水煎煮时，加入的水量要适中，过多过少的水都会影响实验结果

2.静置时间不能过少，时间过短会影响多糖的提取率

3.本实验易燃易爆，必须加强防火意识

4茯苓粗多糖、黄芪多糖干燥后，必须记录其含量，统计茯苓多糖提取的收率。

5.比较两种方法提取的多糖含量、提取率、质量等方面的差别。

实验三人参总皂苷的提取

1.掌握总皂苷的提取方法

2.熟悉皂苷类的性质

3.了解皂苷类的分离方法

人参中含总皂苷约4%，须根含量较主根更高。

人参皂苷分为3型，A型为人参萜二醇型，如人参皂苷Rb1、Rb2、Rc等；

B型为人参萜三醇型，如人参皂苷Re、Rf、Rg1等；

C型为齐墩果酸型，如人参皂苷Ro。

人参总皂苷易溶于饱和正丁醇，因而本实验采用溶剂萃取法。

由于从总皂苷中分离出单一成分过程较长，设备昂贵，耗时多，故本实验不作分离操作。

红人参须根正丁醇甲醇石油醚丙酮

分液漏斗铁架台铁环酒精灯200目筛子

烧杯500ml、1000ml蒸发皿（瓷）容量瓶500ml

玻璃棒天平通风橱

回流装置

1.饱和正丁醇的制备

取正丁醇250mL加入到500mL的分液漏斗中去，从上口倒入约100mL水，反复振摇，充分溶解后，将分液漏斗放在铁架台上，静置，待数分种后，缓缓将下层的水放弃在烧杯中，然后收集饱和正丁醇液倒入500mL容量瓶中备用。

2.人参总皂苷的提取

药材粉碎过筛（50g）1：

8的甲醇回流提取合并提取液，减压浓缩（注意回收甲醇）1：

8加水溶解加1：

1/2～1：

1/3的石油醚（或乙醚）脱脂萃取弃上层石油醚层取下面水层加1：

1的饱和正丁醇提取减压浓缩浓缩液（用泡沫试验验证）加大量丙酮，有沉淀析出，得皂苷粗品水洗在水溶液中用大量甲醇重结晶。

五实验说明及注意事项

1.分液漏斗萃取法操作必须正确，防止单手拿分液漏斗下端的玻璃管，以免折断。

2.分流下层液体时，应把分液漏斗放在铁架上，切不可用手持分液漏斗进行分离操作

3.分液漏斗放气时，漏斗口朝上向无人处慢慢开启活塞，操作时不可太急太快，以防事故

4.正丁醇沸点118℃，与水共沸点92.4℃，不易燃烧，但蒸汽微毒，不可过多吸入，因而某些操作必须在通风橱中进行。

5.计算各步骤得率，统计最终提取率。

实验四麻黄生物碱的提取分离与精制

1．掌握水溶性生物碱类溶剂提取和分离方法。

2．了解麻黄碱的性质和检识方法。

麻黄是一种常用中药，为我国特产的药材之一。

为麻黄科植物草麻黄（Epheclrasinicastapf）、木贼麻黄（E.equssetinaBunge）和中草麻黄（E.intermediaSchrenkexMeyer）的干燥草质茎。

具有发汗、解表、镇咳、平喘等作用。

它的主要成份是生物碱，在草麻黄中的含量为1.3%以上，木贼麻黄中则达1.75%，这些生物碱已知的有六种以上，主要为：

（-）麻黄碱（L-ephedrine）一般占总碱60%以上，其次为（+）伪麻黄碱（d-pseudophedrine）和少量甲基麻黄碱、去甲基麻黄碱、甲基伪麻黄碱、去甲基伪麻黄碱等。

它们以盐酸盐的形式存在于植物体中。

麻黄中已知主要成份的理化性质

1．麻黄碱：

为无色蜡状固体或晶形固体，也可能是颗粒。

无臭，常含半分子

结晶水，熔点40℃。

易溶于水（1∶20）或乙醇，可溶于氯仿、乙醚、苯或甲苯。

有挥发性，可随水蒸气蒸馏而不分解。

其水溶液呈强碱性（pkb4.42），能与无机酸或酸性较强的有机酸结合成盐，这些盐大多易溶于水（草酸盐难溶于冷水），要溶于乙醇，但几不溶于氯仿、乙醚、苯等有机溶剂。

2．伪麻黄碱：

由乙醚结晶出来的为长斜方形晶体，易溶于乙醇、乙醚、苯或

甲苯等有机溶剂，而难溶于水。

碱性较（-）麻黄碱略强（pkb4.26），可应用离

子交换层析法将两者分离。

（+）伪麻黄碱的盐类均易溶手水，但其盐酸盐能溶

于丙酮或氯仿，草酸盐易溶于冷水，而与盐酸（-）麻黄碱不同。

麻黄NaOH甲苯草酸氯仿

分液漏斗铁架台酒精灯pH试纸

烧杯500ml、1000ml容量瓶500ml

玻璃棒天平通风橱回流装置玻美计离心机

麻黄草（切碎或粉碎后干燥，50g），加8倍量的水在水浴90℃下浸提2小时，离心去除草渣取上清提取液。

在浸提液中加入25%NaOH调其pH值为12.0，分别加入1/2、1/4、1/6的甲苯溶液进行萃取，取甲苯萃取液。

（也可用氯仿、二甲苯萃取）

在甲苯萃取液中，加入约50mL的2%的草酸溶液，同时于65-75C水浴加热。

草酸萃取液pH升至6.5-7.0时，补加2%草酸液。

生物碱由甲苯溶液中萃取到草酸溶液中。

草酸萃取液用NaOH调pH值为6-7，减压浓缩至12-14波美度（l.09-1.11g/cm3），冷却结晶.，离心，得麻黄碱结晶粗品。

回收草酸浓缩离心后的母液。

母液加蒸馏水稀释至6波美度（1.04gg/cm3），水浴加热，用Na（）H调溶液pH值至13.0，冷却析晶，离心洗涤等沉淀，得棕色结晶伪麻黄碱粗品。

注意：

每一步萃取、离心前后都需用碘化铋钾试剂检测溶液中是否有生物碱成分存在。

1．麻黄中麻黄碱的含量，往往与产地和采收季节有密切联系，通常以山西麻黄含生物碱较高（2%）左右，可用作实验材料。

而其它麻黄或市售加工的饮片麻黄，含生物碱量多数较低（1%以下），不可供实验用，尤其贮存一年以上的麻黄，多数难以提出麻黄碱。

2．麻黄碱为非氮环类生物碱，分子量较小，游离体可随水蒸汽挥发，而且麻黄

碱不与一般生物碱沉淀剂发生沉淀反应。

3．用酸水冷浸法提取液常含有较多的钙盐。

实验五大蒜挥发油的提取、精制、分离

1.掌握挥发油的水蒸汽蒸馏提取法

2.熟悉挥发油的双向层析分离

3.熟悉挥发油的溶剂提取法

大蒜含有挥发油成分约2%，其中有大蒜辣素、蒜氨酸、大蒜新素、多种烯丙基及丙基和甲基组成的硫醚化合物，等。

利用大蒜挥发油的挥发性质，采用水蒸气蒸馏法提取，另一方面挥发油又易溶于有机溶剂，因而采用溶剂浸渍法提取。

挥发油的各种成分极性各不相同，一般不含氧的烃和萜烯类极性较小，在薄层层析时可被石油醚较好的展开；

而含氧的烃和萜烯类极性教大，不易被石油醚展开，但可被石油醚乙酸乙酯混合溶剂较好地展开，为使挥发油各组分能在一块薄层层板上完全分离展开，本实验采用双向层析，以获得较好的层析效果。

双向层析，第一次展层与第二次展层方向互为90°

角，第一次展开后，挥去溶剂，再将薄层板转换至另一边（刚好与第一次展开边成90°

角），用第2种展开剂再展开一次，极性不同的成分在二次展开后能更好地分离，达到在同一块薄层板上实现极性大小不同的成分都得到较好分离的目的。

大蒜乙醇（95%）石油醚乙酸乙酯

精制食盐浓硫酸香草醛

蒸馏设备薄层层析缸烧杯喷壶下口瓶

1.挥发油的提取

（1）溶剂浸渍法

取250g大蒜碎泥，放置在适量的95%乙醇中浸渍24h后，收集醇液（蒸馏，冷凝？

），回收乙醇后取挥发油（残留液体？

）备用。

（2）水蒸气蒸馏法

将上述的大蒜碎泥收集投入蒸馏瓶中，加入适量水，安装蒸馏装置，加热，进行水蒸气蒸馏，收集蒸馏液，至无挥发油芳香味时，停止蒸馏，将收集的蒸馏液集中于下口瓶中，加入精制食盐，使含盐量约达2-3%，使溶液混合均匀，密盖瓶塞静置过夜（12h），待挥发油全部聚集于液面时，放出水层，收取挥发油，干燥即得（分为两天，第一天蒸馏，静置过夜；

第二天，取挥发油，制薄层层析板）。

2.薄层层析分离

取10*10cm硅胶-CMC板一块，沿着起始线的右侧1.5cm处点样【可用

（1）法取得的挥发油】,先在石油醚中作第一次展开，当展开至终端时取出薄层板，挥尽溶剂，再将薄层板调转90°

角，置于石油醚：

乙酸乙酯（85：

15）展开剂中作第二方向展开至终端，取出薄层板，挥去溶剂，用香草醛-浓硫酸显色剂显色，仔细观察各个斑点的位置，计算Rf值【　Rf＝（斑点中心与原始样点之间的距离）/（溶剂前沿与原始样点之间的距离）】，推测各组成成分（查给组分的Rf值，推测成分）。

1.硅胶-CMC薄层板的制法：

取0.5-1g羧基基纤维素钠【CMCNa】，加热溶于100ml蒸馏水中，待CMCNa全部溶解后，再加入层析硅胶55g，调研至糊状，铺成薄层，室温干燥后，置烘箱内110℃活化30min至干燥器内备用。

2.香草醛-浓硫酸试剂的配置：

取0.5g香草醛溶于100ml硫酸：

乙醇（4：

1）混合溶液中，（即80ml的浓硫酸，20ml的95%乙醇）。

3.供试品，采用大蒜挥发油10倍液（95%乙醇稀释）。

4.点样时用微量注射器，用量20μL；

点样时均匀，距离层析原始液面2cm处开始点样；

要求点样在同一线上。

5.喷洒显色剂时，应置于通风橱内进行。

6.Rf值的大小与样品的结构、性质、溶剂系统等有关，薄层层析时Rf值要在0.2～0.8之间（分离最好是0.3）主演是考虑的经济性，在效果比较好的情况下保持展开剂的用量少。

7.本实验采用盐析法的目的是使油水分离。

若盐析后效果不显著，可再用极性低的溶剂自水中萃取出挥发油。

实验六银杏叶中黄酮类成分的提取

1.掌握挥黄酮苷类化合物的提取原理和方法

2.熟悉黄酮类成分的主要性质

银杏叶中含有多种化学成分，如黄酮苷类、萜类，烃基酚类，多烯醇类等。

其中黄酮苷类成分，包括黄酮、双黄酮（银杏素、异银杏素、白果素）、香豆山奈黄素等。

本实验根据银杏黄酮苷类成分易溶于稀乙醇的性质，以60%乙醇水溶液加热提取。

银杏叶乙醇（95%）

索式提取器电炉烧杯500ml容量瓶500ml、1000ml

取银杏叶100g粗粉，加入150-200ml60%乙醇水溶液中，于80℃水域中加热回流三次（30min、25min、25min）收集三次提取液，回收乙醇（蒸馏、冷凝？

），收集提取物，浓缩干燥，称重。

1.本实验在水域中加热进行，目的是避免提取温度过高，而使得黄酮氧化变色，影响提取质量。

2.本实验采用稀醇提取，水溶性的杂质较少，黄酮类提取率可提高，比常规水提法效果更好。

参考文献

1.生物资源中活性物质的开发与利用，刘建文、贾伟主编，化学工业出版社，2005年8月

2.制药工程专业实验，宋航主编，化学工业出版社，2005年2月

3..制药工程专业实验指导，天津大学主编，化学工业出版社,2005年8月