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二、论文写作的具体任务
1.选题综述：
银杏树又名白果树，是我国的瑰宝，珍稀可贵，被誉为地球的“长寿树”、“活化石”。
银杏叶中含有天然活性黄酮及萜类内酯等与人体健康有益的多种成份，具有溶解胆固醇，扩张血管的作用，对改善脑功能障碍、动脉硬化、高血压、眩晕、耳鸣、头痛、老年痴呆、记忆力减退等有明显效果。
其防病、治病、健身的价值在明代《本草纲目》中早有记载。
经国家卫生部门检测证明：
饮用银杏茶可明显降低血清胆固醇、甘油三脂和低密度血脂蛋白，减少体内贮存脂肪的作用。
对于高血脂的调节、高血压和冠心病等心脑血管系统疾病患者辅助性防治以及肥胖型人群的减肥等有良好的功效，是预防治疗老年痴呆的理想饮品。
是目前世界公认的治、防心脑血管疾病最理想的药物成份，德国Schwade制药公司1991年专利审查了银杏叶标准提取物Egd761（ExtractsofGingkgoBiloba）,其质量指标为总黄酮醇苷含量≥24%，萜类内酯≥6.0%，银杏酸≤10ppm，此标准为许多国家所公用[1]，《中国药典》2015版一部收录银杏叶提取物的质量标准也参照此标准执行，研究表明：
黄酮类化合物是银杏叶提取物中的主要活性成分，其中95%以上为槲皮素、山柰酚、异鼠李素的糖苷，在治疗冠心病、心绞痛、糖尿病和脑血管疾患等方面有良好疗效[2]。
目前，提取银杏叶主要以提高银杏叶总黄酮醇苷提取率为目标，提取方法、纯化工艺等均有所不同。
2.选题的研究内容和任务要求：
（1）资料来源：
参考文献
（2）研究目的：
本实验采用乙醇回流提取得银杏叶提取液，大孔树脂吸附作为纯化工艺，通过对不同的乙醇浓度进行提取，不同型号的大孔树脂进行纯化，筛选合适的乙醇浓度提取、大孔树脂，得出最佳的工艺参数，研究结果对提高银杏叶提取物中的总黄酮醇苷提取率，进一步提高银杏叶提取物的质量有重要意义。
（3）研究方法及路线：
①采用50%、60%、70%、80%、90%五个乙醇浓度对银杏叶进行提取，考察银杏叶中总黄酮醇苷的提取率，选取最佳的提取乙醇浓度。
②采用提取液直接上大孔树脂吸附柱、提取液通过纯化水沉淀后上大孔树脂吸附柱两种不同工艺，考察银杏叶总黄酮醇苷收率，选取最佳的纯化前处理工艺。
2、采用D101、HPD417、HPD722三种不同型号的大孔树脂吸附银杏叶提取液，考察大孔树脂对银杏总黄酮醇苷的吸附、解吸性能，筛选合适的大孔树脂。
3.研究结果：
通过实验，选取合适浓度的乙醇进行银杏叶的提取，选用合适型号的大孔树脂进行纯化工艺，得出最佳提取纯化工艺，得到最佳的银杏叶总黄酮醇苷提取率。
4.结果分析：
通过实验得出的研究结果对提高银杏叶提取物中的总黄酮醇苷提取率，进一步提高银杏叶提取物的质量有重要意义。
三、论文写作规范性方面的要求
1.论文任务量适中，文本格式按照《中南大学网络教育本科毕业论文（设计）撰写规范》要求执行。
2.论文写作中要求条理清楚，逻辑严密，数据准确，分析透彻，结论正确，理论能够联系实际，有一定的个人见解。
2．主要参考资料：
期刊文献书写规范：
作者，论文篇名，刊物名，出版年，卷（期），论文在刊物中的页码。
图书文献书写规范：
作者，书名，出版地，出版社，出版日期。
【1】邵继平、王伯初、陈欣、段传人等，银杏叶提取物药用价值的研究进展．重庆大学学报,2003年1月第26卷第1期
【2】吴海霞，吴彩娥，李婷婷等大孔树脂纯化银杏叶黄酮的研究，现代食品科技，2013，vol.29，No.12
【3】田呈瑞、李均，银杏叶黄酮的乙醇提取方法研究，西北植物学报，2001,21（3）：
556-561
【4】国家药典委员会.中华人民共和国药典（2015版一部）[M].中国医药科技出版社：
416页【银杏叶提取物】
【5】徐芳、李杰、毛宇等，银杏叶提取物的研究进展，食品研究与开发，2013年8月第34卷第16期
【6】徐艳芬、张丽娟、宋新波，银杏叶提取物的研究进展，DrugEvaluationResearchVol.33No.6December2010
3．毕业论文进度安排：
起止时间
阶段内容
2016年7月10日—2016年9月17日
收集有关论文（设计）资料，指导老师组织学生进行论文选题、指导学生选定任务书或审核学生自拟任务书并下达毕业论文（设计）任务书。
2016年9月18日—2016年10月24日
撰写论文、提交初稿，指导老师进行论文指导和评阅。
2016年10月25日—2016年11月15日
上传毕业论文（设计）终稿，指导老师进行指导和评阅。
2016年11月下旬-12月上旬
毕业论文（设计）答辩。
参考文献17
致谢18
摘要
以银杏叶为原料，通过单因素试验，研究不同的乙醇浓度对银杏叶中总黄酮醇苷的提取率的影响，选取最佳的提取乙醇浓度。
研究大孔树脂吸附提纯银杏叶总黄酮醇苷前的提取液直接上柱及提取液水沉后上柱的工艺路线，考察银杏叶总黄酮醇苷收率，选取最佳的纯化前处理工艺。
以提取物中银杏叶总黄酮醇苷含量高低为指标，考察D101、HPD417、HPD722三种不同型号的大孔树脂对银杏叶总黄酮醇苷的吸附解析性能，结果表明：
加入药材8倍量的70%乙醇，加热回流提取两次，每次两小时，银杏叶总黄酮醇苷提取率可达82.5%，大孔树脂吸附前，加入提取液1：
1的纯化水进行水沉，取上清液上HPD722大孔树脂进行吸附、洗脱，以1.2BV/h的流速上样，采用70%的乙醇，以2BV/h的流速进行洗脱，所得银杏叶总黄酮醇苷的收率为71.1%%，含量为25.4%，达到《中国药典》2015版一部规定的不少于24%的要求，进一步提高银杏叶提取物的质量有重要意义。
关键词:
银杏叶，提取，大孔树脂纯化，总黄酮醇苷
1引言
对于高血脂的调节、高血压和冠心病等心脑血管系统疾病患者辅助性防治以及肥胖型人群的减肥等有良好的功效，是预防治疗老年痴呆的理想饮品，是目前世界公认的治、防心脑血管疾病最理想的药物成份。
从银杏叶中提取药物成分始于20世纪，经历了4代。
第1代：
银杏叶制剂的有效成分的量低于16%，只能作为保健品，无药理作用，一般为银杏叶茶。
第二代：
银杏叶产品，其有效成分为16%银杏黄酮。
第三代：
银杏叶产品，可含24%银杏黄酮，其药理作用均为清除自由基，第四代：
银杏叶制剂要求：
[5]其质量指标为总黄酮醇苷含量≥24%，萜类内酯≥6.0%，银杏酸≤10ppm，最早到达这一标准的是创建于1866年德国Schwabe制药公司于1991年专利审查了银杏叶标准提取物Egd761（ExtractsofGingkgoBiloba）,此标准为许多国家所公用[1]
《中国药典》2015版一部收录银杏叶提取物的质量标准也参照此标准执行，研究表明：
2材料与方法
2.1原料、溶剂、试剂
原料、溶剂、试剂
生产厂家
银杏叶
重庆市国中医药有限公司
乙醇（药用级）
湖南尔康制药股份有限公司
甲醇（分析纯）
重庆西南化学试剂有限公司
盐酸（分析纯）
槲皮素对照品
D101、HPD417、HPD722大孔树脂
中国食品药品检定研究院
沧州宝恩化工有限公司
山柰素对照品
异鼠李素对照品
2.2主要实验仪器
仪器
厂家
多功能提取罐200L
上海远跃制药设备有限公司
xs205电子分析天平
瑞士梅特勒托利多
LC-20A高效液相色谱仪
日本岛津公司
玻璃层析柱（5cm*30cm）
万能粉碎机
真空干燥箱
天津玻璃器皿有限公司
丹东制药机械设备有限公司
上海一恒科学仪器有限公司
2.3实验方法：
2.3.1银杏叶中总黄酮醇苷含量的测定：
采用中华人民共和国药典（2015版一部）316页【银杏叶】项下总黄酮醇苷的方法进行测定[4]；
色谱条件与系统适用性实验：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
以甲醇-0.4%磷酸溶液（50：
50）为流动相；
检测波长为360nm。
理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备：
取槲皮素对照品、山柰素对照品、异鼠李素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含槲皮素30ug，山柰素30ug，异鼠李素20ug的混合溶液，即得。
供试品溶液的制备：
将银杏叶，粉碎成中粉，取约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷回流提取2小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干，加甲醇回流提取4小时，提取液蒸干，残渣加甲醇-25%盐酸溶液（4：
1）混合溶液25ml，加热回流30分钟，放冷，转移至50ml量瓶中，并加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法：
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山奈素和异鼠李素的含量，按下列公式换算成总黄酮醇苷的总量。
总黄酮醇苷含量=（槲皮素含量+山柰素含量+异鼠李素含量）*2.51
2.3.2银杏叶提取液中总黄酮醇苷含量的测定：
采用中华人民共和国药典（2015版一部）416页【银杏叶提取物】高效液相色谱法进行测定[4]；
取槲皮素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含槲皮素30ug的溶液，即得。
取提取液1ml，精密量取,加甲醇-25%盐酸溶液（4：
1）混合溶液25ml，置水浴中加热回流30分钟，放冷至室温，转移至50ml量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，以槲皮素对照品的峰面积为对照，分别按下表相对应的校正因子计算槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量，用待测成分色谱峰与槲皮素色谱峰的相对保留时间确定槲皮素、山柰素和异鼠李素的峰位，其相对保留时间应在规定值的±
5%范围之内（若相对保留时间偏离超过5%，则应以相应的被替代对照品确证为准），即得。
相对保留时间及校正因子（F）见下表
待测成分（峰）
相对保留时间
校正因子（F）
槲皮素
1.00
1.0000
山柰素
1.77
1.0020
异鼠李素
2.00
1.0890
2.3.3银杏叶干燥粉末中总黄酮醇苷含量检测方法：
取本品约35mg，精密称定,加甲醇-25%盐酸溶液（4：
2.3.4不同乙醇浓度对银杏叶总黄酮醇苷的提取率的影响的提取液的实验：
2.3.4.1将银杏叶粉碎，过50目筛，按照将银杏叶中总黄酮醇苷含量的测定方法进行含量测定。
2.3.4.2每次称取15kg银杏叶粉末，分别取50%、60%、70%、80%、90%五个不同浓度的乙醇加热回流提取，提取两次，每次两小时，加入乙醇量固定为银杏叶的8倍量即120kg,分别收集提取液。
2.3.4.3银杏叶总黄酮醇苷提取率计算方法：
银杏叶总黄酮醇苷提取率（%）=（提取液中总黄酮醇苷含量*提取液总重量）/（提取所用银杏叶总黄酮醇苷含量*提取所用银杏叶总重）*100%
2.3.5提取液直接上柱和提取液水沉后上柱工艺路线实验：
2.3.5.1将经过单因素实验得出最佳乙醇浓度提取的提取液，采用直接将提取液上柱吸附和将提取液加入纯化水进行水沉（5个不同的比例）后上柱两种不同的工艺分别上大孔树脂吸附柱吸附、解析，固定大孔树脂型号、上柱速度、洗脱速度，分别将洗脱液进行真空干燥，得粉末分别进行测定总黄酮醇苷含量（测定方法采用中华人民共和国药典（2015版一部）416页【银杏叶提取物】高效液相色谱法进行测定[4]；
）
2.3.5.2大孔树脂型号：
HPD722，以1.2BV/h的流速上样，采用70%的乙醇，以2BV/h的流速进行洗脱。
2.3.5.3总黄酮醇苷收率=（粉末重量*总黄酮醇苷含量）/（提取液重量*提取液含量）
2.3.6.不同大孔树脂对纯化银杏叶提取液的影响：
2.3.6.1固定提取液上柱速度、洗脱乙醇浓度、洗脱流速：
以1.2BV/h的流速上样，采用70%的乙醇，以2BV/h的流速进行洗脱。
2.3.6.2将最佳乙醇浓度提取的提取液，用确定的纯化前处理工艺处理后，分别上装填有D101、HPD417、HPD722三种不同树脂的大孔树脂吸附柱，吸附、洗脱后分别将洗脱液进行真空干燥，得粉末分别进行测定总黄酮醇苷含量（测定方法采用中华人民共和国药典（2015版一部）416页【银杏叶提取物】高效液相色谱法进行测定[4]；
2.3.6.3总黄酮醇苷收率=（粉末重量*粉末中总黄酮醇苷含量）/（提取所用银杏叶总黄酮醇苷含量*提取所用银杏叶总重）*100%
3结果与分析
3.1不同乙醇浓度对银杏叶总黄酮醇苷的提取率的影响的提取液的实验：
3.1.1每次称取15kg银杏叶粉末，分别取50%、60%、70%、80%、90%五个不同浓度的乙醇加热回流提取，提取两次，每次两小时，每次加入乙醇量固定为银杏叶的8倍量即120kg,分别收集提取液。
3.1.2将A1-A5提取液，按照2.3.2银杏叶提取液中总黄酮醇苷含量的测定方法进行测定含量，根据2.3.3银杏叶总黄酮醇苷提取率计算方法进行计算有效提取率。
3.1.3表一：
实验组
乙醇浓度
（乙醇：
纯化水）
有效提取率
备注：
两次提取率
A1
50%
68.3%
68.1%
68.5%
A2
60%
72.8%
72.2%
73.4%
A3
70%
82.5%
82.1%
82.9%
A4
80%
80.4%
79.9%
80.9%
A5
90%
79.7%
79.2%
80.2%
3.1.4表二：
乙醇浓度对银杏叶总黄酮醇苷提取率的影响：
3.1.5由表二知，随着乙醇浓度的增加，银杏叶中总黄酮醇苷的提取率呈上升趋势，乙醇浓度在70%时，提取率最高，浓度较低时，蛋白质、糖类等水溶性物质大量溶出，导致提取液粘度大，过滤、浓缩、分离等困难[3]，乙醇浓度进一步提高时，提取率略有下降，故选用70%的乙醇提取作为银杏叶的提取溶剂为宜。
3.2提取液直接上柱和提取液水沉后上柱工艺路线实验：
3.2.1选用70%乙醇提取银杏叶的提取液作为原液进行实验。
3.2.2.树脂预处理及装柱[2]：
称取一定量的HPD722大孔树脂，用纯化水溶胀后，浮选，去除上层漂浮杂质和破碎树脂后，用5%盐酸溶液浸泡24h并充分搅拌，用纯化水水洗至中性，然后用2%的氢氧化钠溶液浸泡24h，用纯化水水洗至中性，再用95%乙醇浸泡24h，用纯化水洗至无醇味并无白色浑浊现象为止，在室温下干燥备用。
将预处理过的大孔树脂用乙醇浸泡24h后，进行湿法装柱，装柱前向柱内加入一定量的乙醇，同时将大孔树脂匀速加入层析柱内，开启柱底活塞，使树脂自然沉降而不留气泡，装柱过程中，始终保持液面高出树脂层面20cm以上，防止液体留干。
3.2.3取70%乙醇提取的银杏叶提取原液，分别采用直接上柱工艺和提取液加入纯化水水沉（原液比纯化水比例分别选取5个不同比例：
1：
0.6、1：
0.8、1：
1、1：
1.2、1：
1.4）后再上柱两种不同的工艺方法，固定以1.2BV/h的流速上样，采用70%的乙醇，以2BV/h的流速进行洗脱，分别收集洗脱液，将洗脱液在60℃真空干燥，收集干燥粉末。
3.2.4分别将粉末进行测定总黄酮醇苷含量（测定方法采用中华人民共和国药典（2015版一部）416页【银杏叶提取物】高效液相色谱法进行测定[4]；
3.2.5总黄酮醇苷收率=（粉末重量*粉末中总黄酮醇苷含量）/（提取液重量*提取液含量）
3.2.6表三：
原液与纯化水
水沉比例
总黄酮醇苷
取率
B1
1.4
72.1%
B2
1.2
76.4%
B3
1.0
86.2%
B4
0.8
84.2%
B5
0.6
82.3%
B6
3.2.7提取液上柱的浓度直接影响纯化效率及吸附、洗脱程度，提取液上柱的浓度过低，纯化的时间长，吸附洗脱率低，收率低下，上样浓度过高，也容易引起吸附洗脱不充分，造成总黄酮醇苷的浪费，由表三得知，浓度较小时，吸附洗脱收率较低，随着浓度的增加，收率不断的增大，当提取液与纯化水的比例达到1：
1时，此时的吸附、洗脱收率最高，主要的原因在于提取液中的总黄酮醇苷的浓度越高，单位表面积内与大孔树脂接触量越大，吸附量就越大，总黄酮醇苷的收率也就越高，但浓度过高时，又容易造成吸附洗脱不充分，从而导致总黄酮醇苷的收率降低，通过实验证明：
提取液与纯化水的比例在1：
1时，总黄酮醇苷收率最高，吸附洗脱最充分，同时能有效的去除树脂、银杏叶中的叶绿素等杂质，能延长树脂的使用时间，减少树脂再生的频次，延长树脂的使用寿命。
3.3不同大孔树脂对纯化银杏叶提取液的影响：
3.3.1树脂预处理及装柱[2]：
分别称取一定量的D101、HPD417、HPD722三种大孔树脂，用纯化水溶胀后，浮选，去除上层漂浮杂质和破碎树脂后，用5%盐酸溶液浸泡24h并充分搅拌，用纯化水水洗至中性，然后用2%的氢氧化钠溶液浸泡24h，用纯化水水洗至中性，再用95%乙醇浸泡24h，用纯化水洗至无醇味并无白色浑浊现象为止，在室温下干燥备用。
3.3.2选用70%乙醇提取的银杏叶提取液，与纯化水1：
1比例水沉后，取上清液作为上柱原液。
3.3.3固定提取液上柱速度、洗脱乙醇浓度、洗脱流速：
3.3.4分别将装填有D101、HPD417、HPD722三种不同树脂的大孔树脂吸附柱，吸附、洗脱后的洗脱液进行真空干燥，得粉末分别进行测定总黄酮醇苷含量（测定方法采用中华人民共和国药典（2015版一部）416页【银杏叶提取物】高效液相色谱法进行测定[4]；
3.3.5总黄酮醇苷收率=（粉末重量*粉末中总黄酮醇苷含量）/（提取所用银杏叶总黄酮醇苷含量*提取所用银杏叶总重）*100%
3.3.6每组实验平行实验三次。
3.3.7表四：
大孔树脂种类
总黄酮醇苷收率
平均取率
C1
D101
65.6%
66.3%
C2
66.2%
C3
67.1%
C4
HPD417
63.5%
63.77%
C5
64.1%
C6
63.7%
C7
HPD722
71.5%
71.1%
C8
70.8%
C9
71.0%
3.3.8由表四得出，以上三种树脂中，以HPD722大孔树脂上柱纯化提取液，吸附、洗脱收率最高，故选择HPD722大孔树脂作为银杏叶提取液的纯化。
4讨论
不同浓度的乙醇的极性不同，通过对不同浓度的乙醇作为提取银杏叶溶剂的实验，得出70%浓度的乙醇同银杏叶总黄酮醇苷的极性最接近，依据“相似相容”的原理，此条件下银杏叶总黄酮醇苷的溶解度最大，提取率最高；
根据采用提取液直接上柱和与不同比例的纯化水水沉后上柱的对比实验，结果表明提取液在与纯化水比例为1：
通过D101、HPD417、HPD722三种不同树脂对银杏叶提取液进行纯化，以总黄酮醇苷的收率作为指标，结果表明HPD722型大孔树脂对银杏叶总黄酮醇苷的吸附洗脱性能最好，收率最高，同时结合不同乙醇浓度提取实验、提取液直接上柱和纯化水水沉后上柱对比实验，得出提取银杏叶中总黄酮醇苷的最佳工艺：
1的纯化水进行水沉，取上清液上HPD722大孔树脂进行吸附、洗脱，以1.2BV/h的流速上样，采用70%的乙醇，以2BV/h的流速进行洗脱，所得银杏叶总黄酮醇苷的收率为71.1%，含量为25.4%，达到《中国药典》2015版一部规定的不少于24%的要求。
5探究意义
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