水质的细菌学检查Word文件下载.docx
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原水样和10-1水样，用无菌移液管分别吸取l毫升原水样和10-1水样，分别注入二个无菌培养皿中。
每皿各加13--15毫升已融化并冷却到45--50℃的牛肉膏蛋白胨培养基，轻轻旋转，使培养基与水样充分混匀，待凝固后，将平板倒置于37℃恒温箱内，培养24小时进行菌落计数。
制作培养基方法、消毒灭菌、接种、计数皆参照参微生物学实验指导，具体如下：
培养基制作：
实验五、培养基的制备
培养基配方：
附录二、常用培养基之一
培养基灭菌：
实验六、灭菌与消毒
水样接种：
实验七、土壤微生物的分离与测数
细菌总数测定：
2、池水、湖水或河水等。
稀释水样：
稀释倍数视水样污浊程度而定，使水样培养后每个平板中的菌落数在30--300之间的的稀释度最为合适。
例如：
取湖水稀释成10-1、10-2、10-3。
每个稀释度作两个培养皿，并依上法倾入培养基制成平板，培养，计数。
菌落计数方法：
（1）先计算同一稀释度的平均菌落数。
若其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不应采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。
若片状菌落的大小不到培养皿的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2代表全平板的菌数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。
（2）首先选择平均菌落在30—300之间的平板，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数（见表1中例1）。
（3）若有两个稀释度的平均菌落数都在30--300之间，则按两者菌落总数之比值来决定。
若其比值小于2则应取两者的平均数；
若大于2则取其中较小的菌落总数（表1中例2及3）。
（4）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数（表1中例4）。
（5）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数（表1中例5）
（6）若所有稀释度的平均菌落数均不在30--300之间。
则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数（表一中例6）
表一计算菌落总数方法举例
例次
不同稀释度的平均菌落数
两个稀释度
菌落数之比
菌落数
10-1
10-2
10-3
1
2
3
4
5
6
1365
2760
2890
无数
27
164
295
271
4650
11
305
20
46
60
513
12
1.6
2.2
1600或1.6*104
38000或3.8*104
27000或2.7*104
5.1*105
270或2.7*102
31000或3.1*104
（三）用发酵法检查大肠菌群
接种水样量（毫升）
每升水样中
大肠菌群数
100
10
0.1
-
+
<
9
9.5
18
19
22
23
28
92
94
180
230
960
2338
>
2380
表四大肠菌群检数表
接种水样总量11.1毫升（10毫升、1毫升、0.1毫升、0.01毫升各1份）
接种水样量（毫升）
0.01
90
95
190
220
280
920
940
1800
2300
9600
23380
23800
五、实验报告内容
（一）我校各生活区水样中，细菌总数每毫升多少？
经大肠菌群
检查每升水中含多少？
水源被污染，出现什么情况？
（二）在湖水（或河水）水样中细菌总数及大肠菌群数是多少？
不同区域取样有无区别，为什么？
六、思考题
（一）大肠菌群中的细菌种类一般并非是病原菌，为什么要选大
肠菌群作为水源被污染的指标？
（二）伊红美兰培养基中的哪些成分有助于我们鉴别大肠杆菌?
附录:
所需培养基配方
一、牛肉膏蛋白胨培养基：
（300ml/桌，用500ml三角瓶做）
牛肉膏3克
蛋白胨10克
NaCl5克
琼脂20克
自来水1000毫升
PH7.2---7.4
灭菌121℃，30分钟
二、乳糖蛋白胨培养液（单倍）（200ml/桌，用500ml瓷缸子做）
蛋白胨10克
牛肉膏3克
乳糖5克
NaCl5克
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1毫升
将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及NaCl加热溶解于1000毫升蒸馏水中，调pH至7.2---7.4。
加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1毫升，混匀，分装于有倒置杜氏小管的试管中。
115℃灭菌20分钟。
三、三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液：
（600ml/桌，用1000ml瓷缸子做）
上述培养液中成分各按三倍量配制，蒸馏水仍为1000毫升。
四、伊红美兰培养基（200ml/桌，用300ml三角瓶做）
乳糖10克
磷酸二氢钾2克
蒸馏水1000毫升
*2%伊红水溶液20毫升
*0.5%美兰水溶液13毫升
pH7.2---7.4
灭菌115℃,20分钟
*为灭完菌再加
水质细菌学检查实验时间安排
第一次：
讲实验
第二次：
准备器皿、洗器皿、准备无菌水管、灭菌
第三次：
做培养基、采样、接种、初发酵实验
（第三次应在下午1时准时开始）
第四次：
平板计数、接种于伊红培养基中
第五次：
革兰氏染色、复发酵实验
第六次：
分析结果
水质细菌学检查需要器皿（共分六个组）
培养皿：
18副/组，配铁桶2个/组
试管架：
1个/组（能插入大试管的）
大试管：
22支/组，配塞子
小试管：
5支/组，配塞子
500毫升矿泉水瓶：
2个/组
150毫升三角瓶：
4个/组，配塞子
300毫升三角瓶：
1个/桌，配塞子（做伊红美兰培养基用）
500毫升三角瓶：
1个/桌，配塞子（做细菌培养基用）
100毫升容量瓶：
2个/组（灭菌）（接种水样用）
5毫升枪头：
5支/组（其中需灭菌3支）
1毫升枪头：
6支/组（全部灭菌）
50毫升量筒：
1个/组酒精灯：
1个/组
指形试管：
4支/组玻璃纸：
3张/桌
杜氏小管：
22支/组铁丝筐：
瓷缸：
1000毫升1个/桌
500毫升2个/桌
玻璃棒：
2支/桌
pH广泛试纸：
1个/桌
凉开水：
1锅
洗衣粉
革兰氏染色盘：
1套/桌
所需试剂：
（实验室准备一份）
1NHCl：
（贮于棕色小试剂瓶中）
HCl（含量为38%）83.3毫升
蒸馏水916.7毫升
1NNaOH：
NaOH40克
蒸馏水100毫升
2%伊红水溶液：
伊红2克
0.5%美兰水溶液
美兰0.5克
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液
溴甲酚紫1.6克溶于100毫升95%乙醇中
一板
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