丙烯腈对大鼠血清性激素的影响Word下载.docx
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1.1.2实验仪器与材料
GC-1200y放射免疫计数器(中国科学技术大学科技实业总公司中信光电仪
器分公司),LD4-2离心机(北京医用离心机厂),DK-600S型三用恒温水浴箱(上海精宏实验设备有限公司),EDTA真空抗凝管。
1.1.3实验试剂
丙烯腈(中国石化兰州分公司)纯度99.99%;
玉米油(金龙牌食用玉米油),购于华润万家超市;
乙醚,纯度99.9%。
T、ICSH、FSH和E2放射免疫分析试剂盒(天津九鼎医学生物工程有限公司)。
1.2实验方法
1.2.1实验分组及给药
将ACN溶于玉米油,配成12.5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg的ACN溶液。
将24只大鼠按体重随机分为对照组(玉米油)、低剂量组(12.5mg/kgACN)、中剂量组(25mg/kgACN)和高剂量组(50mg/kgACN)组,每组6只,分别给予5ml/kg.bw玉米油和ACN溶液灌胃,1次/天,连续灌胃12周。
大鼠每3天称重1次。
1.2.2采血及血清制备
用脱脂棉蘸取少许乙醚,放入干燥缸中,然后将大鼠放入3~5分钟,观察无角膜反射时,迅速取出大鼠,置于工作台上,仰卧固定四肢,75%乙醇消毒,沿胸骨柄剑突下潜行进针,右心室采血2ml,迅速拔针后按压止血,将大鼠置于通风处清醒。
血液3000转离心5分钟,分离血清置于-20°
C保存待测。
实验开始前采血1次,记为t0,以后每两周采血1次,记为t1~t6,共采血7次。
1.2.3测定指标
用碘[125I]放射免疫分析法(RIA)测定T、ICSH、FSH和E2的血清激素水平,实验步骤完全按试剂盒说明书步骤操作。
1.2.4统计方法
检测数据输入Excel进行整理,采用SPSS18.0进行数据分析,用一般线性模型(GeneralLinearModel)中RepeatedMeasures进行方差分析;
每个分组(对照组和3个染毒组)在7个时间点上的两两比较时,先按分组对数据文件进行拆分,再进行RepeatedMeasures方差分析;
每个时间点上4个分组之间的两两比较,用Multivariate分析。
2.结果
2.1大鼠体重变化
各染毒组大鼠体重随时间变化曲线图,见图2.1。
图2.1不同染毒组ACN对雄性大鼠体重的影响12周(84天)观察结果
由图1可见,随着时间的增加,各组大鼠体重都增加,趋势一致,在35天时,高剂量组大鼠体重有所下降,低剂量组有所升高,但差异无统计学意义(P>
2.2丙烯腈对大鼠血清性激素影响的相关性分析
2.2.1丙烯腈对T水平的影响
由表2.1可知,经Mauchly’s球型度检验,球形不对称(P<
0.001),需参考Greenbouse-Geisser调整概率[11]。
不同剂量组大鼠在不同时间点的T均值的差异有统计学意义,随灌胃时间的增加,T水平降低(P<
0.001)。
处理组与时间点之间无交互作用(P=0.372)。
结合表中组间差别的检验结果和血清T浓度水平变化趋势,不同剂量ACN处理组的T浓度的主效应未见差异(P=0.278)。
所以,可以认为不同剂量的ACN对血清T浓度水平影响未见不同,但不同剂量的ACN在7个时间点上对血清T浓度水平的影响有差异。
表2.10~12周大鼠T水平的方差分析表
变异来源
自由度
离均差平方和
均方
F
P
调整概率
G-G
H-F
处理组(A)
3
101251.469
33750.490
1.449
0.278
组间对象误差
12
279517.325
23293.110
时间(B)
6
5164103.847
860683.975
40.730
<
0.001
A*B交互作用
18
434937.319
24163.184
1.143
0.331
0.372
0.371
组内重复误差
72
1521462.952
21131.430
注:
Mauchly’s球型度检验:
=125.792,P<
0.001,G-Ge=0.201,H-Fe=0.267
2.2.2丙烯腈对ICSH水平的影响
由表2.2可知,经Mauchly’s球型度检验,球形不对称(P<
不同染毒组大鼠在不同时间点的ICSH水平差异有统计学意义,随灌胃时间的增加,ICSH水平降低(P<
染毒组与时间点之间有交互作用(P<
不同染毒组之间ICSH浓度水平差异有显著性,各组大鼠ICSH水平的变化趋势不同。
表2.20~12周大鼠ICSH水平的方差分析表
30.530
10.177
0.892
0.473
136.933
11.411
1353.154
225.526
26.709
460.859
25.603
3.032
0.015
0.003
607.945
8.444
=65.975,P<
0.001,G-Ge=0.411,H-Fe=0.654
2.2.3丙烯腈对FSH水平的影响
由表2.3可知,经Mauchly’s球型度检验,球形不对称(P<
不同剂量组大鼠在不同时间点的FSH均值的差异有统计学意义,随灌胃时间的增加,FSH水平降低(P<
处理组与时间点之间未见交互作用(P=0.055)。
结合表中组间差别的检验结果和血清FSH浓度水平变化趋势,不同剂量ACN处理组的FSH浓度的主效应未见差异(P=0.151)。
所以,可以认为不同剂量的ACN对血清FSH浓度水平影响未见不同,但不同剂量的ACN在7个时间点上对血清FSH浓度水平的影响有差异。
表2.30~12周大鼠FSH水平的方差分析表
100.412
33.471
2.121
0.151
189.410
15.784
1042.019
173.670
10.727
0.002
794.466
44.137
2.726
0.055
0.032
1165.726
16.191
=77.267,P<
0.001,G-Ge=0.256,H-Fe=0.359
2.2.4丙烯腈对E2水平的影响
由表2.4可知,经Mauchly’s球型度检验,球形对称(P=0.233),无需调整概率[11]。
不同剂量组大鼠在不同时间点的E2均值的差异有统计学意义,随灌胃时间的增加,E2水平降低(P<
处理组与时间点之间有交互作用(P<
0.001),不同剂量组之间E2浓度水平差异有显著性,各组大鼠E2水平的变化趋势不同。
因存在处理组与时间点间的交互作用,此时不考虑各组间的主效应[11](P=0.014)。
所以,可以认为接触ACN会使雄性大鼠的血清E2水平降低,尤其当接触较低剂量时,血清E2水平降低较为明显。
表2.40~12周大鼠E2水平的方差分析表
1443.525
481.175
5.359
0.014
1077.409
89.784
3072.720
512.120
9.271
6344.897
352.494
6.381
3977.321
55.241
=24.773,P=0.233,G-Ge=0.642,H-Fe=1.000
2.3不同染毒组大鼠血清激素水平随时间变化分析
2.3.1T水平随时间变化趋势
图2.2血清T浓度随时间变化趋势
由图2.2可知,ACN不同染毒组大鼠的T水平与灌胃前比较均呈现不同程度的下降趋势。
对照组大鼠T水平总体呈下降趋势,染毒初期持续下降,中期有所波动,6周时T水平降至最低,与灌胃前比较有统计学差异(P<
随后有所回升,10周的T水平与4周、8周时比较,差异有统计学差异(P<
0.05),但相较灌胃前水平仍然有所降低。
各染毒组大鼠的T水平下降趋势明显:
①低剂量组大鼠染毒后各时间点T水平均低于灌胃前,差异有统计学意义(P<
0.01);
4~12周的T水平均低于2周时,差异有统计学意义(P<
②中剂量组大鼠染毒后各时间点T水平也都低于灌胃前,差异有统计学意义(P<
T水平在4周、6周时降低明显,与2周时比较,差异有统计学意义(P<
6周后T水平有所上升,8~12周的T水平高于4周和6周时,差异有统计学意义(P<
③高剂量组大鼠染毒后T水平较灌胃前均有所下降,波动不明显,其中10周高于4周有统计学意义(P<
2.3.2ICSH水平随时间变化趋势
图2.3血清ICSH浓度随时间变化趋势
由图2.3可知,ACN不同染毒组大鼠的ICSH水平总体波动较大,染毒初期有所上升,随后均有不同程度的下降,与对照组变化趋势相同。
对照组大鼠灌胃后持续上升,至4周时达到峰值,而后开始下降,8~12周时的ICSH水平降低明显,与2周和4周比较,差异有统计学意义(P<
低剂量组10~12周时的ICSH水平下降较多,与2周和6周比较,有统计学意义(P<
中剂量组4周时的ICSH水平最高,8~12周时降低与4周时比较,差异有统计学意义(P<
高剂量组6周时的ICSH水平升至最高,8~12周下降幅度大,但差异无统计学意义(P>
2.3.3FSH水平随时间变化趋势
图2.4血清FSH浓度随时间变化趋势
由图2.4可知,ACN不同染毒组大鼠的FSH水平在染毒初期有所上升,随后都呈现下降趋势。
对照组各时间点之间比较差异无统计学意义(P>
各染毒组在灌胃初期都出现不同幅度的升高,其中高剂量组在2周时的FSH水平高于灌胃前,差异有统计学意义(P<
0.05),其余三组均在2~4周出现FSH高峰值。
随着灌胃时间的增加,各组都出现下降趋势:
低剂量组FSH水平10周时低于4周时,差异有统计学意义(P=0.005)。
中剂量组10~12周的FSH水平均低于2周时,差异有统计学意义(P<
6~12周均低于4周时,差异有统计学意义(P<
12周低于8周时,差异有统计学意义(P<
高剂量组4~12周持续降低,与2周时FSH比较,差异均有统计学意义(P<
此外,12周低于灌胃前、6周和8周,差异也有统计学意义(P<
2.3.4E2水平随时间变化趋势
图2.5血清E2浓度随时间变化趋势
由图2.5可知,不同染毒组的E2水平波动较大。
对照组在初期开始下降后,8~12周明显上升。
8周时的E2水平低于灌胃前、灌胃后2周和4周,差异有统计学意义(P<
12周时高于6周和8周,差异有统计学意义(P<
除8周和12周时的E2水平波动较大外,各时间点的E2水平之间均无统计学意义。
低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠的E2水平在初期都有不同程度的上升,8~12周时三组的E2水平均有所波动,但总体呈现下降趋势。
其中,低剂量组8~12周时的E2水平均低于灌胃前,差异有统计学意义(P<
6~12周均低于2周时,差异均有统计学意义(P<
8~12周均低于4周时,差异均有统计学意义(P<
中剂量组4周和6周的E2水平高于灌胃前,差异均有统计学意义(P<
8周和10周时均低于6周时,差异有统计学意义(P<
0.01)。
高剂量组中E2水平2周、10周均高于6周和12周,差异有统计学意义(P<
2.4不同时间点各染毒组大鼠血清激素水平变化分析
2.4.1不同时间点ACN对大鼠T水平的影响
灌胃前、灌胃后2周、8周、12周时各组之间T水平比较,差异均无统计学意义(P>
灌胃后4周、6周、10周,低、中、高剂量组的T水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<
另外,10周时,中、高剂量组的T水平高于低剂量组,差异有统计学意义(P<
表2.5不同时间点ACN对T水平影响的比较(
)单位:
ng/dl
时间
n
对照组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
灌胃前
621.66±
270.36
764.06±
186.72
961.12±
381.77
593.65±
524.15
灌胃后2周
163.92±
99.62
207.74±
56.05
157.02±
39.41
131.34±
94.09
灌胃后4周
152.60±
38.98
70.51±
15.14*
36.22±
20.03*
63.95±
20.82*
灌胃后6周
151.44±
21.50
93.40±
37.40*
58.58±
10.14*
84.95±
18.01*
灌胃后8周
158.29±
40.68
94.47±
12.73
119.76±
20.07
95.66±
81.94
灌胃后10周
266.80±
44.45
62.25±
9.76*
151.45±
27.15*#
138.24±
33.82*#
灌胃后12周
209.34±
155.07
98.43±
38.55
182.21±
57.29
95.75±
42.96
*表示与对照组比较P<
0.05;
#表示与低剂量组比较P<
0.05
2.4.2不同时间点ACN对大鼠ICSH水平的影响
灌胃前、灌胃后4周、6周、10周时各染毒组之间ICSH水平比较,差异均无统计学意义(P>
灌胃后2周,中、高剂量组的ICSH水平均低于对照组与低剂量组,差异有统计学意义(P<
0.005)。
灌胃后12周,中剂量组和高剂量组的ICSH水平均低于对照组,差异有统计学意义(P=0.007)。
表2.6不同时间点ACN对ICSH水平影响的比较(
mIU/ml
4.76±
2.36
3.30±
1.21
4.59±
2.60
5.07±
2.14
6.81±
0.89
8.62±
3.29
2.46±
1.29*#
2.22±
0.87*##
12.08±
6.53
6.15±
2.87
10.48±
2.13
9.74±
3.46
5.16±
1.25
12.87±
7.40
5.43±
1.95
13.68±
8.78
1.78±
0.57
3.85±
2.71
1.83±
1.09
0.21±
0.06#
0.51±
0.43
0.52±
0.61
0.86±
0.81
0.59
1.54±
0.28
0.91±
0.80
0.39±
0.15*
0.49±
0.27*
#,##表示与低剂量组比较P<
0.05,P<
0.001;
&
表示与中剂量组比较P<
0.05。
2.4.3不同时间点ACN对大鼠FSH水平的影响
灌胃前、灌胃后4周、10周时各组之间FSH水平比较,差异均无统计学意义(P>
灌胃后2周,高剂量组的FSH水平高于低、中剂量组,差异有统计学意义(P<
灌胃后6周,中、高剂量组的FSH水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<
灌胃后8周,高剂量组的FSH水平低于对照组,差异有统计学意义(P<
灌胃后12周,低剂量组的FSH水平高于对照组、中、高剂量组,差异有统计学意义(P<
表2.7不同时间点ACN对FSH水平影响的比较(
mIU/ml
2.31±
1.08
2.43±
1.64
3.54±
2.07
2.40±
0.76
15.38±
16.80
4.77±
1.76
4.03±
1.49
19.39±
7.43#&
6.66±
5.31
3.09
6.35±
2.37
2.82±
1.61
4.41
4.24±
1.15
2.00±
1.77*
1.33±
0.63*
4.39±
3.30
3.46±
2.23
1.77±
0.42
1.21±
0.28*
1.15±
0.30
0.97±
0.82
0.89±
0.58
1.38±
1.02
1.70±
0.52
5.40±
3.32*
0.57±
0.37#
0.62±
0.39#
2.4.4不同时间点ACNE2对大鼠E2水平的影响
灌胃后8周时各组之间E2水平比较,差异均无统计学意义(P>
灌胃前,中剂量组的E2水平低于对照组(P=0.014),中、高剂量组的E2水平均低于低剂量组,差异有统计学意义(P<
灌胃后2周,中剂量组的E2水平低于对照组、低剂量