科研课题申请书.docx

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科研课题申请书

科研课题申请书

课题项目:

申请人:

学号:

单位:

专业

申请时间:

2014年12月

细胞粘附分子T-cadherin（T-cad）基因在肝癌、肺癌、乳腺癌等多

种肿瘤中因启动子甲基化而失活，其表达显著下降或缺失，推测其

可能为一新的肿瘤抑制基因。

申请人首次证实 T-cad 基因在脑胶质

母细胞瘤 C6 细胞中的肿瘤抑制基因功能，并揭示其分子机制。

本

研究将在肝癌细胞株进一步研究 T-cad 基因失活与肝癌细胞的增殖

及侵袭等恶性生物学特征的关系，并调查其分子机制；在临床切除

的肝癌标本中研究 T-cad 基因失活与肝癌恶性分化程度、转移及复

发等恶性生物学特征的关系，明确 T-cad 基因失活与临床肝癌预后

的关系；在肝癌细胞株和肝癌裸鼠模型上证实去甲基化药物是否能

重新诱导 T-cad 分子表达并抑制肝癌细胞的增殖、侵袭等恶性生物

学特征，探

索去甲基化药物对肝癌的治疗价值。

该研究对进一步揭示肝癌发病

的分子机制、设计合理的治疗药物及判断预后，提高我国肝癌的治

疗水平具有重要意义。

关 键 词：

T-cadherin；肿瘤抑制基因；肝癌

（一）立项依据与研究内容

1、项目的立项依据

原发性肝癌是高度恶性的肿瘤，尽管采取积极手术治疗，但绝大多

数病人仍难免死于肿瘤复发及转移，其死亡率高居我国肿瘤死亡率

的第二位。

研究已表明肝癌的发生乙肝、丙肝感染及摄入黄曲霉素

污染的食物有密切关系,其发生发展与多种癌基因过度表达，以及

肿瘤抑制基因失活密切相关。

但目前对其发生发展的精确分子机制

尚不完全清

楚。

因此,进一步探索研究新的基因功能改变与肝癌发生发展及其

恶性特征的关系，对揭示其发生发展的精确分子机制、设计合理的

治疗药物及判断预后， 进一步提高我国肝癌的治疗水平具有重要意

义。

T-cadherin 分子属细胞粘附分子 cadherin 超家族。

 Cadherin 超家

族分子为细胞表面糖蛋白，其功能主要包括调节钙介导的细胞粘附、

细胞极性及形态形成，以及参与细胞间的识别和信号传导机制

（1,2,3,4）。

经典的 Cadherin 分子如 E-cadherin 和 N-cadherin 由细

胞外钙结合区及跨膜区两部分组成，而T-cadherin因缺失经典

Cadherin分子所具有的跨膜区而经糖基磷脂酰肌醇分子附着于细胞

膜上（5）,故而命名 truncated-cadherin（即T-cadherin，又称

CDH13 或 H-cadherin）。

近年来对经典的 Cadherin 分子的深入研究

发现，E-，N-cadherin分子缺失或突变与多种肿瘤如肝癌、胃癌、

乳腺癌、肺癌的发生及转移特征密切相关（6，7，8,9,10）。

将E-

cadherin 分子重新导入缺失 E-cadherin 分子表达的肿瘤细胞，则肿

瘤细胞的增殖及侵犯能力显著受抑（11）。

近年已开始有 T-cadherin

分子在肝癌、乳腺癌、肺癌、结直肠癌、卵巢癌及皮肤鳞癌中表达

显著下降、缺失的报导（12，13，14，15,16,17,18），推测T-

cadherin 分子在这些肿瘤中可能扮演肿瘤抑制基因角色,但尚无人对

其在不同肿瘤中的基因功能及其分子机制进行研究。

2003 年，申请

人（黄志勇）最新研究表明，将 T-cadherin 基因导入缺失表达 T-

cadherin分子的大鼠脑胶质母细胞瘤C6细胞使其过度表达 T-

cadherin 分子，C6 细胞的增殖及侵袭能力显著受抑，首次证实 T-

cadherin在大鼠脑胶质母细胞瘤中的肿瘤抑制基因功能，并进一步

揭示其抑制机制是 T-cadherin 分子通过诱导 P21 CIP1/WAF1 表达

致使肿瘤细胞于细胞周期G2期阻滞。

该文发表于Molecularand

Cellular Biology 2003,23:

566-578（19）。

这一研究发现为进一步研究

T-cadherin 分子在肝癌中的功能、分子机制及临床意义奠定了坚实的

基础。

肿瘤抑制基因启动子甲基化导致基因失活在肿瘤的发病机制

中起着重要作用（20，21，22，23）。

T-cadherin 基因在乳腺癌、结

直肠癌及肺癌中并未发生缺失突变，但由于其启动子异常甲基化导

致 T-cadherin 基因失活，进而导致其蛋白表达水平显著下降或缺失

（13,16,24）。

T-cadherin 基因位于染色体 16q24，肝癌的发生与染

色体 16q24 的缺失、突变密切相关（25）。

 Riou （2002）对位于染

色体 16q24 的 13 个常常在肝癌中缺失表达

的基因的转录研究发现，T-cadherinmRNA 在HepG2,

PLC/PRF/C,TONG 和HA22TNGH 四种肝癌细胞株中缺失表达，但

T-cadherin 基因本身并未发生缺失突变（12）。

Yu（2002）

进一步研究显示T-cadherin基因启动子在肝癌中高度甲基化，而

E-cadherin 基因启动子在肝癌中不发生甲基化，表明在 Cadherin 细

胞粘附分子超家族中 T-cadherin 基因启动子

甲基化在肝癌中具有高度特异性,且 T-cadherin 基因启动子甲基化与

T-cadherin 基因失活密切相关（26）。

这些研究表明 T-cadherin 基

因启动子甲基化是T-cadherin基因在肝癌中失活的主要机制。

Takeuchi 在对皮肤鳞癌细胞株的研究中发现，与 2ug/ml 去甲基化

药

物 5-aza-2’-deoxycytidine 共孵 6 天能使皮肤鳞癌细胞株恢复 T-

cadherin 分子表达（17）。

但目前对 T-cadherin 基因失活与肝癌恶性分化程度、肝内转移及复

发等恶性生物学特征的关系，以及应用去甲基化药物是否能诱导 T-

cadherin 分子在肝癌细胞株中重新表达，

并抑制肝癌细胞的增殖、侵袭及转移等恶性特征全世界尚无研究报

道。

本研究将进一步研究 T-cadherin 在肝癌中的基因功能，调查缺

失表达 T-cadherin 的肝癌细胞株重新表达 T-cadherin 是否能抑制

肝癌细胞的增殖、侵袭及转移等恶性生物学特征，并在裸鼠肝癌模

型上加以证实。

同时，进一步研究其基因功能的分子机制。

在临床

切除的肝癌标本中研究 T-cadherin 基因失活与肝癌恶性分化程度、

转移及复发等恶性生物学特征的关系，进一步揭示 T-cadherin 基因

失活与临床肝癌预后的关系。

在肝癌细胞株及裸鼠肝癌模型上证实

是否去甲基化药物能重新诱导 T-cadherin 分子表达，并抑制肝癌细

胞的增殖、侵袭及转移等恶性生物学特征，观察其潜在的治疗作用

和可能的毒副

作用。

由于国内外尚无类似研究报道，申请人具有研究T-cadherin

基因与 C6 细胞恶性生物学特征的关系及其分子机制的丰富经验，

预期该研究成果能达国际先进水平。

主要参考文献：

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5.Angst,B.D.,Marcozzi,c.,andMagee,A.L.TheT-

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