度他雄胺含量检测方法验证方案精Word格式.docx

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组织协调和实施验证工作

组员

4验证依据

ICHQ2QC-SMP014

5验证内容

5.1验证可接受标准

项目

指标

方法专属性

稀释剂空白实验

不干扰供试品测试

潜在杂质加入实验

主峰与相邻杂质峰间分离度大于1.5

系统适用性

盐酸厄洛替尼主峰理论塔板数

大于3000

盐酸厄洛替尼主峰峰面积相对标准偏差

≤2%

回收率

回收率在99.0%～101.0%之间

验证范围内的线性测定

相关系数大于0.999

重复性

≤2.0%

中间精密度（相对标准偏差

准确度

回收率99.0%～101.0%

溶液稳定性

RSD≤2.0%

5.2.1色谱条件

仪器：

高效液相色谱仪

色谱柱：

ZORBAXSB-CN，4.6×

250mm，5μm

流动相：

正己烷：

异丙醇=95：

5

柱流速：

1.5ml/min检测波长：

240nm

进样量：

20μl柱温：

40℃

5.2.2实验用溶剂及供试品

名称

批号

含量/级别

来源

正己烷

异丙醇

杂质A

杂质C

度他雄胺

度他雄胺对照品

5.2.3溶液的配制

5.2.3.1流动相的配制

5.2.3.2供试品溶液的配制

供试品溶液的配制：

取供试品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加5ml异丙醇超声使溶解，再加正己烷稀释至刻度，摇匀，即得。

（平行配制两份）

对照溶液配制：

取对照品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加5ml异丙醇超声使溶解使溶解，再加正己烷稀释至刻度，摇匀，即得。

5.2.4测定方法

测定法：

分别精密量取对照品溶液和供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，理论塔板数按度他雄胺峰计算应不低于3000，按外标法以峰面积计算供试品中度他雄胺的含量。

含量计算公式：

式中：

As——供试品溶液中主峰峰响应值；

Cs——供试品质量，mg；

Ar——对照品溶液中主峰峰响应值；

Cr——对照品质量，mg；

W——供试品的水分+残留溶剂，％；

Ps——对照品的含量，％。

验证过程不考虑水分和残留溶剂。

结果判断：

若含量（按无水物）在98.0%～102.0%之间，则判为符合规定。

5.3专属性

成品含量检测方法验证和有关物质检测方法验证色谱系统相同，专属性见度他雄胺有关物质检测验证。

5.4系统适应性

5.4.1目的

确认用该仪器系统运行含量测试方法的验证是否符合要求。

5.4.2操作步骤

精密称取度他雄胺对照品约25mg，置50ml量瓶中，加5ml异丙醇超声使溶解，再加正己烷稀释至刻度，摇匀，平行配制两份分别为对照品R1溶液和对照品R2溶液。

取对照品R1溶液连续进样6次，记录色谱图，计算主峰面积的RSD%，及主峰理论塔板数；

取对照品R2溶液连续进样2次，记录色谱图，与对照品R1溶液计算回收率。

5.4.3测试结果

表1系统适应性测试数据

进样次数

主峰保留时间

（分钟）

主峰峰面积

主峰理论塔板数

对照品R1溶液

1

2

3

4

6

平均

——

RSD%

对照品R2溶液

5.4.4结论

5.5线性（50%～150%）

5.5.1目的

确定在验证范围内，供试品浓度与峰面积之间的线性关系。

5.5.2操作步骤

5.5.2.1精密称取本品对照品250mg，置50ml量瓶中，加异丙醇超声使溶解并稀释至刻度，摇匀。

精密量取该溶液各2.5ml、3.75ml、5.0ml、6.25ml、7.5ml分别置50ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，依次制成线性溶液（相对标准浓度50%、75%、100%、125%、150%）。

分别取上述溶液各20μl进样，每份溶液平行测定2次，记录色谱图，计算每个浓度点的峰面积平均值。

以样品浓度对相应平均峰面积做线性回归，计算回归方程及相应的线性回归系数。

回归方程：

Y=KX+b。

5.5.3测试结果

表2盐酸厄洛替尼线性测试数据

编号

相对浓度

50%

75%

100%

125%

150%

浓度（µ

g/ml）

峰面积

平均值

回归方程

相关系数r

5.5.4结论

5.6重复性

5.6.1目的

确定对于相同供试品多次称样测定结果的重现程度。

5.6.2操作步骤

对照品溶液A：

精密称取本品对照品约25mg置50ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液B：

80%样品溶液配制：

取本品约20mg，精密称定，置50ml量瓶中，加5ml异丙醇超声使溶解，再加正己烷稀释至刻度，摇匀，即得（平行配制3份）。

100%样品溶液配制：

取本品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加5ml异丙醇超声使溶解，再加正己烷稀释至刻度，摇匀，即得（平行配制3份）。

120%样品溶液配制：

取本品约30mg，精密称定，置50ml量瓶中，加5ml异丙醇超声使溶解，再加正己烷稀释至刻度，摇匀，即得（平行配制3份）。

取对照品溶液A、对照品溶液B及各样品溶液进样，记录色谱图，计算含量及RSD。

5.6.3测试结果

表3重复性测试数据

对照品溶液1浓度（μg/ml）

峰面积平均值

峰面积RSD%

对照品溶液2浓度（μg/ml）

单位浓度峰面积

平均单位浓度峰面积

样品溶液

称样量（mg）

浓度（μg/ml）

含量（%）

RSD（%）

平均值（%）

80%

120%

5.6.4结论

5.7中间精密度

5.7.1目的

为考察随机变动因素对精密度的影响。

5.7.2操作步骤

不同时间不同检验人员分别按照标准称量的80%、100%和120%配制供试品测试溶液及100%对照溶液（2份）。

每个浓度的供试品溶液各配制3份，计算每份供试品溶液中含量值及RSD%。

5.7.3测试结果

表4中间精密度测试数据

表5两人数据汇总

操作者

5.7.4结论

5.8方法准确度

5.8.1目的

5.8.2操作步骤

对照溶液：

配制100%对照溶液2份，进样。

加标前样品溶液的配制：

精密称取度他雄胺样品25mg，置50ml量瓶中，加5ml异丙醇超声使溶解，再加正己烷稀释至刻度，摇匀；

再取此溶液2.0ml，置20ml量瓶中，平行移取10份。

加标溶液的配制：

精密称定度他雄胺对照品250mg，置50ml量瓶中，加异丙醇超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

供试液的配制：

分别移取加标溶液1.6ml、2.0ml、2.4ml各3份加入加标前样品溶液中，用稀释剂稀释至刻度，另外剩余一份直接用稀释剂稀释至刻度。

测定方法：

将上述对照品溶液和供试液注入液相色谱仪，记录色谱图，计算样品的加标回收率，

实际检出量=

5.8.3测试结果

表6方法准确度测定结果

单位峰响应值

第二份标准品：

μg/ml

回收率%

---

平均单位峰响应值

p

加标前峰面积

加入标准

理论量（μg/ml）

加标后峰面积

加入标准峰面积

实际回收量（μg/ml）

所有值RSD%

5.8.4结论

5.9溶液稳定性

5.9.1目的

确认溶液的稳定性情况。

5.9.2操作步骤

取本品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加5ml异丙醇超声使溶解，再加正己烷稀释至刻度，摇匀。

分别在不同时间点进样20µ

l，记录色谱图。

5.9.3测试结果

表7溶液稳定性测试数据

时间（h）

RSD（％）

5.9.4结论

5.10偏差讨论

验证小组成员应对验证出现的偏差进行偏差讨论：

参与讨论者：

讨论日期：

5.11综合分析评价与结论

验证小组成员对检测过程及记录进行综合分析后作出评价与结论：

结论人：

结论日期：

6最终批准

6.1负责人审阅上述所有测试及分析评价，最后批准。

6.2检验方法经验证合格后才能用于实际检测。

7再验证

当分析仪器、色谱柱型号和品牌、工艺等发生变更时应进行再验证。