高效液相色谱法在中药指纹图谱中的应用现状及分析Word格式.docx

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HPLC;

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　　当前，中药指纹图谱技术在国内外已成为一种进展趋势。

第一是美国食物与药品治理局（FDA）许诺草药保健品申报资料能够提供色谱指纹图。

世界卫生组织（WHO）在1996年草药评判指导原那么中也规定：

若是草药的活性成份不明，能够提供指纹图谱以证明产品质量的一致。

欧共体也将指纹图谱监控技术应用于植物药质量操纵［1］。

我国自200008国家药品监督治理局颁发《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》（国药管注［2000］348号）以来，中药指纹图谱的研究成为中药研究的热点。

国家药品监督治理局要求到2002年末，所有申报的中药注射剂均应有相关的指纹图谱资料，包括中药原料、提取物、产品3种图谱，3种图谱的峰形必需有较大的相关性，不然不予受理［2］。

　　1中药指纹图谱

　　中药指纹图谱是一种综合的、宏观的和可量化的辨别手腕，用以对中药材和中成药进行辨别真伪，评判原料药材、半成品和成品质量的均一性和稳固性。

其大体属性是“整体性”和“模糊性”。

“整体性”是指完整地比较色谱的特点“面貌”；

“模糊性”强调的是对照品与待测样品指纹图谱的相似性［3］。

指纹图谱一样包括两层含义：

1.必需反映出该药材（或成药）有别于其他任何物质；

2.关于中药材，指纹特点还能反映出产地和采收期不同而造成的不同；

关于中成药，那么能反映出同一产品不同批次间的质量不同，不同越小说明药材（或成药）的稳固性越好［4］。

　　2HPLC用于中药指纹图谱的情形

　　文献散布说明，对中药指纹图谱的研究始于1993年，从1993～1999年共发表11篇［5］，指纹图谱的研究大体处于未开发状态。

而从2000年开始，研究中药指纹图谱的文献呈直线上升趋势，尤以近2年进展最快，与指纹图谱相关的文献报导就有上百篇，其中又以高效液相色谱法研究的指纹图谱占多数，高效液相色谱以其应用的普遍性，检测的精准性成为操纵中药质量最要紧的检测方式。

至今已有50种中药材，21种中成药运用HPLC法测定其指纹图谱并发表。

　　据文献统计，目前已对以下中药材运用HPLC进行了指纹图谱研究：

枸杞、柴胡、新疆雪莲、夏天无、延胡索、白芍、白鲜皮、板蓝根、补骨脂、黄芩、赤芍、川东獐牙菜、川芎、刺五加、大黄、丹参、当归、地黄、茯苓、麻黄、甘草、葛根、马甲、红车轴草、红花、厚朴、怀牛膝、鸡血藤、金银花、绿衣枳实、密花石斛、牛膝、秦艽、人参、西洋参、忍冬、山银花、山楂、芍药、水蔓菁、乌拉尔甘草、五味子、石斛、仙茅、旋覆花、淫羊藿、三七、泽泻、栀子、西红花。

中成药中采纳HPLC进行指纹图谱研究的有：

咳必安胶囊、灯盏花素注射液、白屈菜注射液、板蓝根颗粒、补肾方、川芎制剂、丹参注射液、丹参葡萄糖注射液、复方丹参片、参麦注射液、红花注射液、红景天注射剂、黄连解毒汤、脉络宁注射液、人参保健品、青银注射液、三七制剂、三七总皂苷注射液、肾康注射液、香丹注射剂、银杏叶注射剂。

　　指纹图谱能够对样品的产地、采收时刻、加工方式、工艺流程等多方面通过化学成份的不同来反映中药材的种属不同、真伪辨别、中成药的批次不一样等，从而达到操纵中药质量的目的。

在HPLC指纹图谱的研究中，咱们从以下几个方面进行分析和讨论。

　　供试品的制备已研究的指纹图谱其供试品的制备，提取步骤多较为简单。

如杜程芳等［6］在白鲜皮药材指纹图谱研究中采纳甲醇回流提取即得供试品，陶玲等［7］在白屈菜注射液指纹图谱研究中直接将样品作为供试品进样。

其目的主若是尽可能多的保留供试液中的化学成份，以期在指纹图谱中取得更多的信息。

只有在针对特定一类的化学成份时，采纳比较复杂的提取方式。

如聂国朝［8］在枸杞的指纹图谱研究中，针对类胡萝卜素采纳了离心、萃取等步骤进行了试供品的制备。

朱玲英等［9］在大黄药材蒽醌苷元类成份的指纹图谱研究中，采纳氯仿回流、乙醇回流、过氧化氢和盐酸回流，乙醚萃取等步骤进行供试品的制备。

因此供试品制备的方式合理性也是决定指纹图谱最终稳固靠得住的重要因素。

　　标准品的选择由于中药的许多化学成份未知，已制备的标准品数量还很有限，因此在指纹图谱中存在着谱峰无法确认是何化学成份的问题。

一样来讲，或加入内标物，之内标物的峰面积来比较其它各峰的相对保留峰面积。

如张世轩等［10］在测定灯盏花素注射液指纹图谱研究中，以黄芩苷为内标物加校正因子法来测定野黄芩苷；

或将有效成份作为要紧参比峰，并以此峰来比较相对保留峰面积。

如苗爱东等［11］在新疆雪莲指纹图谱研究中采纳雪莲的有效成份紫丁香苷为参比峰。

指纹图谱中代表其它化学成份的色谱峰只能以相对峰面积来进行相对含量分析，这就要求标准品的选择，既要色谱峰面积较大，又要选择有代表性的有效成份，这在指纹图谱中也是决定图谱准确性的一个问题。

　　结果分析方式结果分析方式可分为两种。

一种是测定相对保留时刻和相对峰面积，这也是目前采纳最多的一种方式。

在指纹图谱中，各化学成份的相对保留时刻比较固定，能够作为定性和真伪鉴定的依据，但相对峰面积的比较那么存在困难，各产地的药材同种成份的峰面积不同较大，很难对其进行定量分析。

如苗爱东等［11］在新疆雪莲指纹图谱研究中7个不同产地的雪莲各成份含量的相对峰面积比值不同较大。

何春年等［12］在葛根药材HPLC指纹图谱研究中不同来源的葛根药材中8个共有峰的相对峰面积相差较大，提示葛根用药应在固定产地的前提下。

另一种是聚类分析法，采纳离差平方和（Ward’s）法，利用欧氏距离（Euclidean）作为样品的聚类依据，以峰面积为样品谱图的特点值，将样品分为几类。

计算样品与共有模式之间的相似度，即可对样品进行鉴定、分类和评判［13］。

如张克荣等［14］在白芍HPLC指纹图谱相似度的分析中即采纳此法从28个白芍药材将样品分为3类。

李晓蒙等［15］在秦艽药材HPLC指纹图谱研究中也采纳了指纹图谱相似度计算法，得出10批药材有比较好的一致性，都可作为投料利用。

这种分析法去除人为的主观评判和误差，具有较好的客观性。

从研究结果看，在种属鉴定方面具有必然的优势。

　　3讨论

　　在中成药的指纹图谱研究中，多是固定原料药材的质量、品种，检测不同批次的样品，从中找出共有指纹峰进行比较，如张世轩等［10］在灯盏花素注射液测定中，选取了5批灯盏花素注射液的指纹图谱，来反映批间药品质量的稳固性。

陶玲等［7］在白屈菜注射液指纹图谱研究当选取了10批白屈菜注射液的指纹图谱。

因其中药质量的稳固，必需成立在中药材性质稳固，采收加工产地一致的前提下，才能实现中药成品质量的稳固靠得住。

在制剂上，已发表的21种中成药指纹图谱研究中14种是注射剂，占到2/3的比例。

分析缘故一是由于国家慢慢标准注射剂的质量标准，要求注射剂提供中药原料、中间物、中药成品的指纹图谱；

二是由于中药注射剂的制剂工艺要求严格，所含化学成份比其它剂型的成份相应较少，各批间由于工艺造成的成份不同较小，在固定了药材的前提下，研究的成药指纹图谱比较稳固，能够用于质量操纵。

　　关于中药材的指纹图谱，多是采收几个产地的药材进行分析，如张克荣等［16］在赤芍的指纹图谱研究中，测定了18个产地的赤芍药材，得出的指纹图谱能快速区分不同来源的赤芍药材。

马翠英等［17］在黄芩中黄酮类成份指纹图谱研究中对10个不同地域的黄芩进行了研究，为黄芩药材质量操纵提供科学依据。

由于中国幅原辽阔，药材的产地复杂多样，许多药材均为野生，很难对所有产地的药材进行细致完全的图谱搜集分析，而生长、采收等情形的不同，也使药材的内在质量有专门大的不同。

这些都使指纹图谱用于中药材质量操纵存在困难，从这点来看，中药材的标准种植治理势在必行，GAP的实施已迫在眉睫。

　　指纹图谱的重现性。

由于实验仪器的不同，色谱柱效的阻碍，和实验人员的操作误差，使得即便成立了一套指纹图谱，在不同实验条件下，色谱图中各成份的相对保留时刻，会显现必然的误差，这在必然程度上阻碍了指纹图谱的可比性。

在供试品制备时，由于尽可能的简化了制备进程，造成进入色谱柱的成份较多，对色谱柱有必然的污染，阻碍色谱柱的寿命。

这些问题都是指纹图谱研究中必需考虑的问题。

　　与西药不同，大部份中药的化学成份不完全明确，其中已知的化学成份往往不能显示中药的全数疗效，因此采纳化学分析的方式间接地操纵中药质量存在着很多困难。

目前还无法解析出指纹图谱中某一峰或某一段峰所代表的药理作用。

单味药材的化学成份十分复杂，而复方中成药化学成份之间的交叉和彼此阻碍更增加了分析结果的不确信性。

缺少对照品和对如实验又无法保证取得标准指纹图谱实验条件的一致性，二者之间的不同可能使实验方式的重现性受到阻碍［18］。

　　中药指纹图谱目前还处于起步时期，需要咱们做大量的基础工作，只有当中药化学成份确信，并非断搜集不同产地，不同采收期及不同加工方式的药材进行指纹图谱的研究，成立系统全面的药材指纹图谱库，通过十几年乃至几十年的研究积存，采纳指纹图谱来操纵中药质量的方式才能真正得以实现，中药质量操纵任重而道远。

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