原料药质量研究Word格式.docx
《原料药质量研究Word格式.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《原料药质量研究Word格式.docx（16页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
溶剂
溶解度测定结果
结论
水
50mg在500ml中不全溶。
几乎不溶
甲醇
3.1012g在3.1ml中不全溶，在25ml中全部溶解。
易溶
乙醇
0.5021g在5ml中不全溶，在10ml中全部溶解。
溶解
丙酮
2.0212g在2ml中不全溶，在4ml中全部溶解。
结论：
本品在甲醇或丙酮中易溶，乙醇中溶解，在水中几乎不溶。
11.2.3熔点
取本品，依法进行熔点测定（中国兽药典2005年版一部附录45页）。
测定结果见表11-3。
表11-3.熔点测定结果
熔点（℃）
196.9~197.9
197.0~198.1
196.9~198.0
196.3~197.0
由表11-3可见：
本品三批样品的熔点在194~200℃之间，熔距均小于1.5℃。
本品的DSC谱见图11-1。
由DSC谱可见，本品确有熔点存在，熔点为194.9℃（Onset）。
11.2.4旋光度
取本品，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含10mg的溶液，依法进行旋光度的测定（中国兽药典2005年版一部附录47页），测定结果表明，本品的旋光度在-0.010°
~+0.010°
之间。
试验结果：
检验本品三批及对照品的旋光度，结果如下表所示，均符合要求。
表11-4.熔点测定结果
旋光度（O）
11.3鉴别试验
11.3.1紫外吸收光谱
取本品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀；
精密量取5ml，置50ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
照紫外-可见分光光度法（中国兽药典2005年版一部附录23页）测定，本品在204nm波长处有最大吸收，在280nm处有吸收。
测定结果见表11-4，UV谱见图11-1~11-4。
表11-4.紫外吸收光谱测定结果
最大吸收波长（nm）
204
①本品三批样品与非泼罗尼对照品的UV图谱相一致，均在204nm处有最大吸收。
11.3.2红外吸收光谱
取本品，采用溴化钾压片法，依法进行红外吸收光谱的测定（中国兽药典2005年版一部附录25页）。
IR谱见图11-5~11-8。
本品三批样品与非泼罗尼参考对照品的IR图谱相一致。
11.3.3HPLC鉴别
在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
HPLC谱见图11-9~11-12。
检验本品三批及对照品，从色谱图中保留时间结果（见表11-5可见，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
表11-5.样品及对照品主峰保留时间测定结果
保留时间（分钟）
11.3.4其它鉴别反应
取本品约20mg，有机破坏后，吸收液分别显：
（1）有机氯化合物的鉴别反应（中国兽药典2005年版一部附录22页）；
（2）有机氟化合物的鉴别反应（中国兽药典2005年版一部附录19页）。
（3）有机硫化合物的鉴别反应（中国兽药典2005年版一部附录21页）。
11.4检查
11.4.1干燥失重
取本品，在105℃干燥至恒重（中国兽药典2005年版一部附录69页）。
测定数据见表11-6。
由表11-6可见：
本品三批样品的干燥失重均未过0.5%。
11.4.2炽灼残渣
取本品1.0g，置铂坩埚中，依法进行炽灼残渣检查（中国兽药典2005年版一部附录71页），结果见表11-6。
本品三批样品的炽灼残渣均未过0.1%。
11.4.3重金属
取炽灼残渣检查项下遗留的残渣，依法进行重金属检查（中国兽药典2005年版一部附录66页第二法），结果见表11-6。
本品三批样品的重金属均未过0.002%。
表11-6.干燥失重、炽灼残渣和重金属检查结果
干燥失重
炽灼残渣
重金属
20080201
0.08%
<
0.1%
0.002%
20080202
0.12%
20080203
0.09%
11.4.4有关物质
本品的有关物质采用高效液相色谱法（中国兽药典2005年版一部附录32页）测定。
11.4.4.1制法概要
从本品的工艺合成路线看，本品的有关物质主要为中间体硫化物、氧化副产物磺酰物和其它未知杂质。
我们在参考文献[2]（“氟虫腈高效液相色谱分析方法的研究”-《现代农药》2006年4月第5卷第2期）中分析方法基础上，开展了多种色谱条件的摸索和优化，并进行了详细的方法学研究。
11.4.4.2仪器系统
安捷伦1260型高效液相色谱仪，DiamonsilTMC18
（2）色谱柱（5μm×
4.6mm×
15cm）
11.4.4.3试剂
甲醇（色谱纯，Honeywell公司）
乙腈（色谱纯，Fisher公司）
11.4.4.4色谱条件的建立
11.4.4.4.1流动相的选择
先选用甲醇-水（1：
1）试验，结果柱效低，见图9；
将甲醇换成乙腈，未见改善，见图10；
将水换成0.02mol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液，将pH值调节到6和7，测定结果发现，柱效明显增高，并且随pH值增加则柱效增高，见图11、12；
另有机溶剂选用甲醇时，柱效好于乙腈，见图13；
将0.02mol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液与甲醇的比例调整至70：
30时，主药的出峰时间适宜，在6~7分钟左右，见图14。
因此选用流动相为甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠（用NaOH调pH至7.0）（30：
70）为流动相。
11.4.4.4.2检测波长的选择
从UV光谱看，本品在204nm有最大吸收，但考虑到分析方法中流动相溶剂甲醇，乙腈及水的截止波长，在此低波长下，流动相背景吸收和干扰较大，故未选择最大吸收波长204nm作为测定波长；
而第二大吸收波长280nm，响应过低，灵敏度不够高，故也没采纳280nm作为方法的检测波长；
经综合考虑，本产品中主要产物非泼罗尼和主要杂质磺酰物，中间体硫化物的化学结构很相似，经DAD检测器全波长扫描后，其紫外吸收图谱也很近似，三种物质均在220nm下有较强吸收和响应，同时经实验证实，在220nm的检测波长下，样品中非泼罗尼和主要杂质磺酰物及中间体硫化物有很接近的响应因子，其中磺酰物对非泼罗尼的相对响应因子为1.03，硫化物对非泼罗尼的相对响应因子为0.96，均在0.9～1.1之间，符合兽药典中用不加校正因子主成分自身对照法测试杂质含量的要求，故选择220nm作为此方法的检测波长。
11.4.4.4.3仪器及工作条件的初步确定
在上述11.4.4.4.1及11.4.4.4.2试验的基础上，我们初步确定如下的工作条件：
高效液相色谱仪：
Agilent1260LC
色谱柱：
DiamonsilC18
（2）（5μm×
15cm），柱温30℃。
流动相：
甲醇-乙腈-水（10:
43:
47），流速为1.0ml/min。
在确定以上的色谱条件后，我们又对实验室小试的样品进行了反应体系的跟踪测试，从对反应液到粗品到精制品的连续跟踪测试结果表明，在此工作条件下，产品主峰和各杂质峰能有效分离，理论塔板数，分离度及纯度因子均达到要求，可用于非泼罗尼有关物质的测定。
反应体系跟踪测试图谱见11-13~11-18，纯度因子图见11-19~11-20。
11.4.4.5色谱系统适用性检查
按11.4.4.4.3中的色谱条件对色谱系统作适用性检查，测定结果见下表，HPLC谱见图11-21~11-25。
表11-7.色谱系统适用性检查测定结果
11.4.4.6空白试验
取流动相10μl注入液相色谱仪，见图11-26。
11.4.4.7分离度试验
非泼罗尼与中间体硫化物、氧化副产物磺酰物的分离度试验：
取非泼罗尼，硫化物及磺酰物适量，配制成一定浓度的混合溶液后，进行分离度试验。
（1）非泼罗尼与中间体硫化物的分离良好，分离度3.24，非泼罗尼峰的理论板数为5535；
HPLC谱见图11-24。
（2）非泼罗尼与氧化副产物磺酰物的分离良好，分离度7.52，非泼罗尼峰的理论板数为5535；
HPLC谱见图11-25。
（3）中间体硫化物与氧化副产物磺酰物的分离良好，分离度7.52，非泼罗尼峰的理论板数为5535；
（4）同时，对非泼罗尼中的各分离峰做光学纯度考查，其中主产物非泼罗尼，中间体硫化物，氧化副产物磺酰物的峰纯度因子分别为999.98，999.909，999.897，故分离度及峰纯度均满足要求。
11.4.4.8破坏性试验
在上述色谱条件下，进行破坏性试验考察：
取本品适量，加流动相溶解并稀释制成0.1mg/ml的溶液A，分别取溶液A适量进行酸，碱，加热，光照，氧化破坏，考察主峰与降解产物的分离情况。
（1）光照破坏：
取溶液A5ml置4000lx的强光下照射2小时，按供试品溶液测定方法测定，HPLC谱见图11-26。
（2）高温破坏：
取溶液A5ml置110℃下加热破坏2小时，按供试品溶液测定方法测定，HPLC谱见图11-26。
（3）酸破坏：
取溶液A5ml，加入0.1mol/L盐酸溶液4ml，室温放置2小时，用氢氧化钠溶液中和后，按供试品溶液测定方法测定；
HPLC谱见图11-29。
（4）碱破坏：
取溶液A5ml，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液4ml，室温放置30分钟，用盐酸溶液中和后，按供试品溶液测定方法测定；
（6）氧化破坏：
取溶液A5ml，加入30%过氧化氢浓溶液0.5ml，室温放置2小时后，按供试品溶液测定方法测定；
测定结果表明：
本品在高温条件下，未发生降解，在强光，酸，碱及氧化条件下有降解，在此色谱条件下，各降解产物对产品主峰均无干扰，故可用上述色谱系统来测定非泼罗尼中有关物质含量。
11.4.4.9最低检测限与定量限试验
逐级稀释非泼罗尼供试品溶液，测定非泼罗尼的峰高，同时测定相同条件下的色谱基线噪声，取基线噪声的3倍值时的浓度作为依达拉奉测定的最低检测限，，取基线噪声的10倍值时的浓度作为依达拉奉测定的最低定量限。
（1）测得非泼罗尼的最低检测限为0.011µ
g∕ml（S/N≈3），定量限为0.055µ
g∕ml（S/N≈10）；
HPLC谱见图11-32、11-33。
（2）氧化副产物磺酰物的最低检测限为0.023µ
g∕ml（S/N≈3），定量限为0.062µ
HPLC谱见图11-34、11-35。
（3）中间体硫化物的最低检测限为0.021µ
g∕ml（S/N≈3），定量限为0.072µ
HPLC谱见图11-36、11-37。
由上试验数据可知，在本方法中，非泼罗尼最低检测量为0.11ng，试验中非泼罗尼进样量约为1µ
g,即样品中杂质含量大于0.013%即可被检测出，满足测定的需求。
11.4.4.10有关物质检查溶液稳定性试验
取非泼罗尼适量，加乙腈溶解后并用流动相稀释制成0.1mg/ml的溶液，室温放置，并分别在即刻、2、4、8、12、24、48小时取样测定，记录色谱图，按面积归一化法计算有关物质。
测定结果见表11-8，HPLC谱见图11-38~11-44。
表11-8.有关物质检查溶液稳定性试验数据
时间（h）
即刻
2
4
8
12
24
48
Rsd%
单个最大杂质（%）
1.31
1.34
1.32
1.35
1.3
杂质总量（%）
1.48
1.51
1.49
1.55
1.59
2.8
由表11-8可见，本品的有关物质检查溶液可在48小时内稳定。
11.4.4.11样品的有关物质检查
供试品溶液的配制称取非泼罗尼适量，加乙腈溶解并用流动相稀释制成每1ml中含0.1mg的溶液，作为供试品溶液。
对照溶液
（1）的配制精密量取上述供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液
（1）。
磺酰物对照溶液的配制精密称取磺酰物对照品适量，加10ml乙腈溶解后，再以流动相稀释制成每1ml中含2.5μg/ml的溶液，作为对照溶液
（2）。
测定法取对照溶液
（1）10μl注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使非泼罗尼峰高度能够达到正确积分的要求；
再精密量取供试品溶液和对照溶液
（1）、
（2）各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至非泼罗尼峰保留时间的2倍。
供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰的面积，磺酰物按杂质峰面积对照法计算，其它杂质按不加校正因子的主成分自身对照法计算，磺酰物不得过2.5%，杂质总量不得过3.0%。
3批样品有关物质检查结果见表11-9，HPLC谱见图11-10~11-17，图11-45~11-52。
由表11-9可见，本品3批样品的磺酰物未过1.5%，单个最大未知杂质未过0.5%，有关物质总量未过2.0%。
从HPLC图上可见，磺酰物为本品最大的有关物质。
由此可以说明，本品较易发生氧化。
表11-9.有关物质检查结果
磺酰物
单个最大未知杂质
杂质总量
1.41%
0.32%
1.73%
1.32%
0.33%
1.65%
1.45%
0.27%
1.72%
11.5有机残留溶剂
本品合成过程使用的溶剂为正己烷、二氯甲烷、氯仿、甲苯，精制溶剂为乙醇，故分别对其进行了残留量的研究和检查。
方法学研究结果表明：
（1）溶剂N,N-二甲基甲酰胺（DMF）对正己烷、二氯甲烷、氯仿、甲苯和乙醇的测定无干扰，各溶剂间的分离度良好。
（2）有机溶剂残留研究结果见表11-10：
表11-10.有机残留溶剂研究结果
研究项目
正己烷
二氯甲烷
氯仿
甲苯
检测限μg/ml
0.09
0.23
0.3
0.18
0.25
定量限μg/ml
0.36
0.63
1.0
0.55
0.7
线性范围μg/ml
0-48.32
0-100.48
0-18.16
0-145.68
0-201.04
线性方程
Y=117792X
+10807
Y=49906X
+495.32
Y=5264.3X
+373.92
Y=646854X
+87100.06
Y=31433X
+26491
回归系数
r=0.9994
r=0.9996
r=0.9990
r=0.9997
中间精密度%
3.5
加样回收率%
99.83
RSD=2.41%
99.62
RSD=1.01%
100.4
RSD=0.43%
99.98
RSD=0.28%
103.54
RSD=0.37%
从表11-10中可以看出，各溶剂在相应的浓度范围内线性良好；
日内、日间精密度良好；
最低检测限、最低定量限、回收率等研究均已完成。
方法学研究资料见附件二、三。
（3）三批样品有机溶剂残留检测结果见表11-11：
表11-11.三批样品有机溶剂残留检测结果
有机溶剂
检测结果（ppm）
11.05
10.14
10.2
未检出
3.3
3.08
3.2
由表11-11可见，测定结果表明，本品三批样品均未检出残留正己烷、氯仿和甲苯，检出二氯甲烷残留平均为3.1ppm，未过600ppm;
检出残留乙醇平均为10.1ppm，未过5000ppm。
11.5、含量测定
采用高效液相色谱法（中国兽药典2005年版一部附录32页）对非泼罗尼的含量测定进行了方法学研究。
在“11.4.4有关物质”项下的研究中，色谱系统的适用性良好：
（1）非泼罗尼与中间体硫化物，氧化副产物磺酰物的分离良好。
（2）非泼罗尼与酸、碱、氧化、强光、高温破坏降解产物的分离良好。
（3）选择检测波长为220nm时：
A）非泼罗尼的最低检测限为0.013µ
g∕ml，定量限为0.055µ
g∕ml；
B）磺酰物的最低检测限为0.023µ
g∕ml，定量限为0.062µ
C）中间体硫化物的最低检测限为0.021µ
g∕ml，定量限为0.072µ
g∕ml。
故选择有关物质测定项下的色谱条件作为非泼罗尼含量测定的色谱条件。
11.5.1仪器系统
安捷伦1260型高效液相色谱仪
11.5.2色谱条件
根据有关物质测定项下试验结果，选择色谱条件如下：
十八烷基键合硅胶柱（DiamonsilTMC18
（2）色谱柱，5μm×
47）
流速：
1.0ml/min;
检测波长：
220nm
柱温：
30℃进样量：
10μl
11.5.3线性范围考察
取本品适量，加乙腈溶解并甲流动相稀释制成在0~600μg/ml范围内系列溶液，分别精密量取上述溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积。
测定结果见表11-12。
表11-12.非泼罗尼线性范围
序号
浓度（ug/ml）
峰面积
回归方程
1
A=30.591C
R2=0.9999
23.88
730.9
3
49.75
1535.8
99.5
3037.3
5
199
6056.3
6
303
9331.6
7
398
11996
404
12341.6
9
505
15462.9
10
597
18300.4
11
606
18597.6
非泼罗尼工作曲线
由表11-12可见，本品在0~606μg/ml范围内的线性良好，HPLC谱见图11-53~11-62。
11.5.4溶液稳定性
取非泼罗尼适量，加甲醇制成0.5mg/ml的溶液，室温放置，并分别在即刻、2、4、8、12、24、48小时分别取样测定，记录色谱图。
测定结果见表11-11。
表11-13.含量测定溶液稳定性试验数据
15643.4
15670
15458.6
15571.5
15713.9
15281.2
RSD
0.98%
由表11-3可见，本品含量测定的供试品溶液室温放置，可在48小时内稳定。
HPLC谱见图11-38~11-44。
11.5.5色谱系统的精密度
取非泼罗尼0.5mg/ml的溶液，重复进样6次，记录色谱图，量取峰面积，计算RSD，以考察色谱系统的精密度。
测定结果见表11-14。
表11-14.色谱系统的精密度试验数据
进样次数
峰面积A
平均值
15434.6
15436.7
15529.7
A=15476.7
15452.8
RSD=0.26%
15495.8
15510.7
由表11-14可见，本品供试品溶液重复进样6次，峰面积的RSD为0.26%，说明本品含量测定色谱系统的精密度良好。
HPLC谱见图11-63~11-68。
11.5.6色谱系统的中间精密度
取非泼罗尼0.1mg/ml的溶液，由两个检验人员分别使用不同的仪器，在不同的时间进样测定，记录每次进样的峰面积，计算RSD，以考察色谱系统的中间精密度。
测定结果见表11-15。
表11-15.色谱系统的中间精密度试验数据
时间
主峰面积
检验员A/仪器A
检验员B/仪器A
检验员A/仪器B
第一天
99.35%
98.92%
99.28%
98.81%
98.98%
99.22%
第二天
99.73%
99.34%
99.62%
99.72%
99.61%
99.58%
平均含量
由表11-15可见，本品由两个检验人员分别使用不同的仪器，在不同的时间进样测定，12个数据平均峰面积的RSD为0.32%，说明本品含量测定色谱系统的中间精密度良好。
HPLC谱见图11-69~11-80。
11.5.7含量测定方法
照高效液相色谱法（中国兽药典2005年版一部附录32页）测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶（
升级会员 