动物解剖生理实验指导.docx
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动物解剖生理实验指导
动物解剖生理实验指导
实验内容
实验一、显微镜的使用、组织切片的显微观察
实验二、犬骨骼的观察、骨骼辨认测试
实验三、血液的凝固
实验四、红细胞的脆性试验
实验五、蛙心活动观察
实验六、红细胞计数
实验七、反射弧分析及脊髓反射活动观察
实验八、胃肠运动观察和小肠吸收观察
实验一显微镜的构造、使用和保养
[实验目的]
了解显微镜的基本构造，掌握显微镜的使用方法和保养方法。
[材料设备]
显微镜、组织切片、擦镜纸等。
[方法步骤]
（一）机械部分
1、镜筒
2、物镜转换器
3、镜臂
4、调焦器
5、载物台
6、镜柱
7、镜座
（二）光学系统部分
光镜的光学系统主要包括物镜、目镜和照明装置（反光镜、聚光器和光圈等）。
1、目镜：
常见的有5×、10×和15×（×表示放大倍数）的目镜，可根据不同的需要选择使用，最常使用的是10×目镜。
2、物镜：
常用物镜的放大倍数有10×、40×和100×等几种。
一般将8×或10×的物镜称为低倍镜（而将5×以下的叫做放大镜）；将40×或45×的称为高倍镜；将90×或100×的称为油镜（这种镜头在使用时需浸在镜油中）。
图1-3物镜的性能参数及工作距离
C线为盖玻片的的上表面，10⨯物镜的工作距离为7.63mm；40⨯物镜的工作距离为0.198mm；10/0.25、40/0.65、100/1.25表示镜头的放大倍数和数字孔径。
160/0.17表示镜筒长度为160mm，盖玻片厚度为0.17mm。
3、聚光器：
调节光线的强弱，升高聚光器可使光线增强，反之则光线变弱。
光圈能控制进入聚光器的光束大小的可变光阑。
以调节光线的强弱。
在光圈的下方常装有滤光片框，可放置不同颜色的滤光片。
4、反光镜：
反光镜有两个面，一面为平面镜，另一面为凹面镜，凹面镜有聚光作用，适于较弱光和散射光下使用，光线较强时则选用平面镜。
二、光学显微镜的使用方法
（－）准备
将显微镜平稳地放在身前的实验桌上，略偏左，使镜臂对着身体，镜筒向前。
（二）对光
①转动转换器，使低倍镜对准通光孔，转动粗调节器，使低倍镜前端距载物台约1-2厘米的距离。
②将光圈放大；让左眼朝目镜里注视，同时用手将反光镜转向光源；调节反光镜，直至从目镜里看到一个白色明亮的圆形视野。
（三）低倍镜观察
①将玻片标本放在载物台上，使待检查部分位于通光孔中心，用弹簧夹片压住载玻片两端。
②两眼从侧面注视，将物镜降至距标本约0.5厘米时停止。
③用左眼朝目镜里观察，同时转动粗调节器，缓慢上升镜筒，直到视野中出现物象，再用细调节器调节。
（四）高倍镜观察
①先将低倍镜下找到所需观察的物象，把要进一步放大的部位移到视野正中央。
②转动转换器，使高倍镜到位。
调节反光镜和光圈，使光照明亮，再微微调节细调节器，直到物象清晰。
（五）显微镜复原
用擦镜纸揩净目镜和物镜，用清洁纱布揩净镜体。
再转动转换器，把两个物镜偏到两旁，并将镜筒下降，然后将显微镜平稳地放入镜箱内保存。
实验二动物主要组织的显微镜识别
[实验目的]
掌握单层扁平上皮、单层柱状上皮、单层立方上皮、疏松结缔组织、骨骼肌、平滑肌、神经元的结构特点。
[材料设备]
显微镜、单层扁平上皮、单层柱状上皮、单层立方上皮、疏松结缔组织、骨骼肌、平滑肌、神经组织切片及相关的图。
[方法步骤]
1、取镜与放置
移动显微镜时，要一手拿镜臂，一手托镜座，将显微镜放置在前方桌面上。
2、打开光源，上升聚光镜，开大孔径光阑。
3、观察
将被检标本置于载物台上，用压片夹夹住,旋转最低倍数物镜观察。
调节粗调焦螺旋，使载物台缓缓上升，直至物镜镜头接近标本。
这时，一边使用目镜观察，一边调节粗调焦螺旋使载物台下降，直至视野中看到物像为止。
移动载片位置，使物象处于视野的中心，此时再调节细调焦螺旋以增加物象的清晰度，可以调节聚光镜和孔径光阑，使光线强弱适中，以便于观察。
转动物镜转换器，换用高倍镜头。
用细调焦螺旋调节，换用高倍镜后，可调节聚光镜和孔径光阑以增加亮度。
观察更细微结构必需使用油镜时，则在制片上滴一滴香柏油。
油镜使用完后，要及时地用蘸有乙醚的擦镜纸把油镜镜头擦拭干净。
4.收显微镜
关闭光源；下降聚光镜；关闭孔径光阑；转动物镜转换器，使之处于最低倍数物镜下。
显微镜保持清洁。
显微镜的光学部分只能用专门的擦镜纸擦拭。
按实验室的要求，做好显微镜的使用记录等。
[实验结果]
1．复层上皮组织
2．平滑肌
3.神经组织
4.心肌切片
5.硬骨组织
6.软骨组织
实验三犬全身主要骨、关节、骨性标志的识别
[实验目的]
在犬骨骼标本上识别各部位骨骼及骨性标志。
[材料设备]
犬骨骼标本。
[方法步骤]
1．脊柱骨的组成：
颈椎、胸椎、腰椎、荐椎、尾椎的形态与连结。
2．胸廓的组成：
胸椎、肋骨和胸骨。
3．骨盆腔构造：
背侧荐骨、侧面髋骨、后侧坐骨、腹侧耻骨组成。
4．四肢骨组成及分布：
骨骼名称、形态、关节名称、关节角度。
5．骨性标志：
肩胛冈、大结节、髋结节、大转子、坐骨结节。
[实验结果]
绘制犬全身主要骨、关节和骨性标志的图示。
[技能考核]
在标本和活体上识别主要骨、关节及骨性标志。
*骨骼辨认测试
实验三血液凝固
[实验目的]
以血液凝固时间作为指标，了解对血液凝固影响的因素，加深对生理止血过程的理解。
[实验原理]
血液凝固是一个酶的有限水解激活过程，可分为三个环节：
（1）凝血酶原激活物的形成；
（2）凝血酶原激活为凝血酶；（3）纤维蛋白的形成。
在此过程中有多种凝血因子和Ca离子的参与。
根据凝血过程起动时激活因子来源不同，可将血液凝固分为内源性激活途径和外源性激活途径。
内源性激活途径是指参与血液凝固的所有凝血因子在血浆中，外源性激活途径是指受损的组织中的组织因子进入血管后，与血管内的凝血因子共同作用而启动的激活过程。
[实验药品和器材]
生理盐水，液状石蜡、草酸盐、柠檬酸盐、肝素（8U/ml）。
注射器，试管6支，小烧杯2个，试管架，竹签1束（或细试管刷），秒表。
[实验方法与步骤]
1.采血（动物不限）。
2.准备试管。
试管1不加任何处理（对照管）
试管2用液状石蜡润滑整个试管内表面
试管3放少许脱脂棉
试管4加草酸钾1～2ml
试管5加柠檬酸盐1～2ml
3.每管加入血液1-2ml。
将多余的血盛于小烧杯中，并不断用竹签搅动直至纤维蛋白形成。
4.记录凝血时间每个试管加血1-2ml后，即刻开始计时，每隔壁15s倾斜一次，观察血液是否凝固，至血液成为凝胶状不再流动为止，记录所经历的时间。
4、5号试管加入血液后，用拇指盖住试管口将试管颠倒两次，使血液与药物混合。
5.如果加草酸钾和柠檬酸盐的试管不出现血凝,可再向两管内分别加入0.025mol•L-1的CaCl2溶液2～3滴,观察血液是否发生凝固?
[注意事项]
1.采血的过程尽量要快，以减少计时的误差。
对比实验的采血时间要紧接着进行。
2.判断凝血的标准要力求一致。
一般以倾斜试管达45度时，试管内血液不见流动为准。
3.每支试管口径大小及采血量要相对一致，不可相差太大。
[实验结果]
将实验结果及各种条件下的凝血时间，并进行比较、分析解释产生差异的原因。
[思考题]
1.血液凝固的机制及影响血凝的外界因素？
2.为什么有几管不凝？
为什么有几管比对照组管凝血时间长？
为什么有几管比对照管凝血时间短？
实验四红细胞脆性的测定
[实验目的]
学习测定红细胞渗透脆性的方法，理解细胞外液渗透张力对维持细胞正常形态与功能的重要性。
[实验原理]
正常红细悬浮于等渗的血浆中，若置于高渗溶液内，则红细胞会因失水而皱缩；反之，置于低渗溶液内，则水进入红细胞，使红细胞膨胀。
如环境渗透压继续下降，红细胞会因继续膨胀而破裂，释放血红蛋白，称之为溶血。
红细胞膜对低渗溶液具有一定的抵抗力，这一特征称为红细胞的渗透脆性。
红细胞膜对低渗溶液的抵抗力越大，红细胞在低渗溶液中越不容易发生溶血，即红细胞渗透脆性越小。
将血液滴入不同的低渗溶液中，可检查红细胞膜对于低渗溶液抵抗力的大小。
开始出现溶血现象的低渗溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力；出现完全溶血时的低渗溶液浓度，则为该血液红细胞的最大抵抗力。
生理学上将与血浆渗透压相等的溶液称为等渗溶液；而将能维持红细胞正常形态、大小和悬浮于其中的溶液称为等张溶液。
等渗溶液不一定是等张溶液（如1.99%的尿素溶液），但等张溶液一定是等渗溶液。
[实验药品]
1%肝素，1%氯化钠溶液，2%氯化钠溶液，蒸馏水。
[仪器与器材]
10ml小试管，试管架，滴管，1ml移液管，2ml移液管。
[实验方法与步骤]
1.溶液配制：
取11个小试管，配制出11种不同浓度的氯化钠低渗溶液。
不同浓度的NaCL溶液配制
试管号
试液
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
1%NaCl/ml
1.4
1.3
1.2
1.1
1.0
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
2%NaCl2
蒸馏水/ml
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0
1.1
1.2
1.3
1.4
1.5
0
NaCl浓度/%
0.7
0.65
0.6
0.55
0.5
0.45
0.4
0.35
0.3
0.25
2
2.制备抗凝血：
不同动物采血方法各有所异，但多采用末梢血，将血滴在有1%肝素（或柠檬酸盐）的表面皿上，混匀（1%肝素0.1ml可抗10ml血）。
3.加抗凝血：
用滴管吸取抗凝血，在各试管中各加一滴，轻轻摇匀，静置0.5～1h。
4.观察结果：
根据各管中液体颜色和浑浊度的不同，判断红细胞脆性。
①未发生溶血的试管：
液体下层为大量红细胞沉淀，上层为无色透明，表明无红细胞破裂。
②部分红细胞溶血的试管：
液体下层为红细胞沉淀，上层出现透明淡红（淡红棕）色，表明部分红细胞已经破裂，称为不完全溶血。
③红细胞全部溶血的试管：
液体完全变成透明红色，管底无红细胞沉淀，表明红细胞完全破裂，称为完全溶血。
[实验结果]
报告该实验动物红细胞的最小渗透抵抗力和最大渗透抵抗力。
将全班的结果加以统计，并用平均值±标准差表示。
讨论如何通过渗透脆性特征判断机体的健康状况。
[注意事项]
小试管要干燥，加抗凝血的量要一致，只加一滴。
混匀时，轻轻倾倒1～2次，减少机械震动，避免人为溶血。
抗凝剂最好为肝素，其他抗凝剂可改变溶液的渗透性。
配制不同浓度的NaCl溶液时应力求准确、无误。
NaCl溶液的浓度梯度可根据动物的实际情况适当进行调整。
[思考题]
1.红细胞的形态与生理特征有何关系？
2.根据结果分析血浆晶体渗透压保持相对稳定的生理学意义。
3.输液时应注意的事项。
实验五蛙心活动观察
[实验目的]
观察滴加乙酰胆碱、肾上腺素对心脏运动的影响。
[实验原理]
心脏的特殊传导系统具有自动节律性，但各部分的自动节律性高低不同。
两栖类动物的心脏起搏点是静脉窦（哺乳动物的是窦房结）。
正常情况下，静脉窦（窦房结）的自律性最高，能自动产生节律性兴奋，并依次传到心房、房室交界区、心室，引起整个心脏兴奋和收缩，因此静脉窦（窦房结）是主导整个心脏兴奋和搏动的正常部位，
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