兽医生物制品电子教案Word文档格式.docx

兽医生物制品电子教案Word文档格式.docx

《兽医生物制品电子教案Word文档格式.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《兽医生物制品电子教案Word文档格式.docx（36页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

过去人们习惯将病毒、立克次氏体制成的叫疫苗，将细菌、支原体和螺旋体制成的叫菌苗。

现在农业部统一规定，“由特定细菌、病毒、立克次氏体、螺旋体、支原体，及寄生虫制成的主动免疫制品，一律称为疫苗，可分别叫它们什么细菌疫苗或什么病毒疫苗。

（1）常规疫苗：

由病原微生物完整本身加工制备的叫之。

A、灭活疫苗（死疫苗）：

用物理或化学方法将病原微生物杀死，仍保留免疫原性。

一般是由强毒力微生物制成，多加上佐剂，提高免疫效果。

灭活疫苗的优缺点：

优点：

a，安全，无副作用，不返祖不散毒。

B，不中和母源抗体和机体抗体。

C，运输保存方便，多为水剂湿苗。

缺点：

a，需多次免疫，抗原用量大，价格贵。

B，只能注射，需要佐剂，仅刺激体液免疫。

弱毒疫苗的优缺点和灭活疫苗相反，不再重复。

a）自身或自家灭活疫苗

从患病动物自身病灶分离病原微生物制成的灭活疫苗，如人反复葡萄球菌感染，可选用此方法做苗；

对动物可用本场分离的病菌制成灭活疫苗，用于本场，具有抗原的针对性，如仔猪黄白痢自家灭活疫苗，链球菌自家灭活疫苗。

b）组织灭活疫苗

利用含病原微生物多的组织制成的灭活疫苗，如兔瘟灭活疫苗，猪园环病毒自家组织灭活苗。

B、活苗（弱毒疫苗）

用人工方法使病原微生物变异减毒而制成。

分强毒活疫苗，如宋朝我国制备的人痘疫苗；

还有中等毒力的鸡新城疫

系，法氏囊中等毒力苗，传支H52等。

弱毒疫苗：

卡介苗—人工培育13年230代；

鸡新城疫

系—自然脱毒筛选；

炭疽疫苗—高温诱变。

猪瘟兔化弱毒疫苗—钝感动物。

化学诱变疫苗：

猪丹毒疫苗—培养基里加锥黄素；

仔猪副伤寒疫苗—培养基里加醋酸砣；

猪肺疫疫苗—培养基加海鸥洗衣粉。

a）同源疫苗：

由病原微生物本身减毒制成，大多数是这样的疫苗。

b）异源疫苗：

含同类属抗原的非同种微生物制备成。

如：

鸡马立克氏病，用火鸡疱疹病毒疫苗预防；

犬瘟热病---用人麻疹疫苗可以预防；

人天花病—用牛痘疫苗预防。

在疫苗中，仅有少数是异源疫苗，即不同微生物，同类抗原少，像钥匙开锁一样，其他钥匙开这个锁纯属偶然。

c）单价疫苗：

利用同一株微生物（这个微生物就一个血清型）或一种微生物的单一抗原制成。

如猪大肠杆菌K88疫苗，禽流感H5N1疫苗。

d）多价疫苗：

是同一种微生物的若干血清抗原菌株制成，如：

大肠杆菌K88，K99，P987三价疫苗；

口蹄疫O、A双价疫苗。

e）混合疫苗，又叫联苗：

不同微生物按一定方法混合制成，如：

猪三联疫苗，即是猪瘟、猪丹毒、猪肺疫三联疫苗。

（2）新型疫苗

A.亚单位疫苗：

利用微生物一种或几种亚单位结构制成的疫苗。

流感的血凝素，神经氨酸酶，肺炎双球菌的荚膜多糖等，都可以做成疫苗。

B.化学疫苗：

用化学方法提取微生物的有效免疫成分而制成。

比亚单位疫苗更简单，如提取荚膜多糖可以做成。

C.合成肽苗：

人工合成肽抗原，与适当载体和佐剂配合而成。

如流感病毒的18肽疫苗，口蹄疫的多肽疫苗已经使用。

D.基因工程疫苗：

通过DNA重组技术而制成的新型疫苗，主要有：

a）基因缺失疫苗：

切除病原微生物的有害基因而制成，如伪狂犬TK基因缺失，还有gE，gG基因的缺失。

b）基因工程活载体疫苗：

将目的基因插入到细菌或病毒体内表达。

如将流感病毒血凝素基因插入到牛痘疫苗，将志贺氏菌的基因插入到沙门氏菌中表达。

c）病毒抗体复合物疫苗：

是由相应抗体包埋病毒制成。

特点是安全，病毒缓慢释放。

d）基因疫苗：

即DNA疫苗，将编码某种蛋白质的DNA注入体内，在体内表达出某种蛋白质抗原，具有免疫作用。

自杀DNA疫苗：

为防止DNA重组或改变机体的基因，或使机体致癌，设计了自杀DNA疫苗，即该基因注入体内后，复制若干代后自动关闭。

e）抗独特疫苗：

利用抗原和抗体是镜像关系原理设计出的疫苗。

Ag------动物---Ab1-Ab1-----动物---Ab2（抗独特疫苗）

Ab2----动物----Ab3，这里Ag和Ab2是一样的，Ab1和Ab3是一样的。

利用抗独特疫苗免疫动物，使动物产生的抗体（Ab3=Ab1）可对抗原来的。

微生物。

E.类毒素（脱毒毒素）:

由细菌外毒素经过0、3%--0、4%甲醛处理脱毒制成，如破伤风类毒素，白喉类毒素。

2、诊断剂

用于免疫学诊断，是由抗原或抗体组成，原理是抗原或抗体是特异性结合，利用已知一方，可以检测另一方的存在。

实际中可以用于传染病诊断，抗体水平检测以及病原微生物的鉴定。

常用的有以下6类方法：

2）凝集反应用的抗原或抗体：

如鸡白痢或布氏杆菌凝集抗原。

3）补体结合反应用的抗原或抗体。

4）沉淀反应：

炭疽沉淀反应—ascoli实验，法氏囊抗体检测。

5）标记用抗原或抗体：

荧光抗体，酶标抗体-elisa

6）鉴定细菌用的多价血清或因子血清—沙门氏菌

7）PCR-聚合酶链反应

3、高免血清

人工高度免疫动物提取的血清，用于传染病的治疗和紧急预防—如猪瘟血清，小鹅瘟血清，法氏囊卵黄抗体等。

4、微生态制剂

即益生素或叫EM（有效的微生物制剂），是有益的活菌制剂，调节机体微生态平衡，达到预防或治疗疾病的目的。

常见的细菌有乳酸杆菌、双歧杆菌、地衣芽孢杆菌，蜡样芽孢杆菌等。

益生元：

促进有益细菌生长的物质，如双歧因子，寡聚糖等。

（二）按制造方法和物理性状分类

1、普通制品：

一般方法制备的生物制品，如炭疽杆菌芽孢苗。

2、精制制品：

对普通制品进行浓缩和精制，如精制的破伤风类毒素或抗毒素。

3、液状制品：

也叫湿苗，多为灭活疫苗或诊断制品。

4、冻干制品：

将疫苗冷冻干燥，可更好保护微生物的活性，弱毒疫苗多为冻干制品，另激素、血清、补体等也可以冻干。

5、佐剂制品：

非特异增强疫苗的免疫应答物质，如铝胶，蜂胶，油类，卡介苗等。

二、兽用生物制品的应用

1.用于动物疫病的防治

2.用于动物疫病的诊断

3.用于动物疫病的治疗

4.用于动物的保健

第三节兽用生物制品的发展史与发展前景

一、兽用生物制品的发展史

古代历史上的成绩：

早在1000多年前，宋真宗时期，我国人民就已经会用痊愈天花病人的干痘痂粉，吹入鼻孔，预防人的天花病，叫吹花。

后传给俄罗斯和土、耳其等国家。

预防牛瘟，我国甘肃省早知道，用康复牛的血，灌服给其他牛，可以预防牛瘟。

1796年，英国乡村医生琴纳，用牛痘浆给人接种预防天花成功，1980年全世界消灭了天花疫苗也叫牛痘苗的代名词（vaccine），沿用至今。

1881-1884年，法国巴斯德，发明了炭疽疫苗、禽霍乱疫苗及狂犬疫苗。

1921年，卡介苗诞生，用13年230代培育成功。

后又发展有白喉抗毒素及破伤风类毒素和抗毒素。

我国猪瘟兔化弱毒疫苗质量世界第一；

发明的牛肺疫兔化弱毒疫苗，为我国消灭牛肺疫起到了关键作用，马传贫白细胞活疫苗，为我国填补了空白，猪三联弱毒疫苗，也是我国首创—打破了细菌和病毒疫苗不能混合生产的历史。

其次，畜禽常用的疫苗和血清，我国都可以自己生产。

特殊疫苗，我国研制有鸡球虫病疫苗，猪囊虫疫苗及弓形体疫苗。

还有水产用的嗜气单胞菌疫苗和草鱼出血热灭活疫苗。

辅助治疗的副免疫制品有猪干扰素，白细胞介素等。

冻干技术的改进，用真空箱内压盖技术，为弱毒疫苗生产质量提高作出了贡献。

华中农大程焕春院士，自主开发研制的伪狂犬基因缺失疫苗，填补了我国该疫苗的空白。

我国除上述生物制品外，还开发研制了大量诊断试剂，传统有鸡白痢全血平板凝集抗原和布氏凝集抗原，结核菌素等。

新研制有ELISA各种诊断试剂，基本满足国内畜禽疾病的诊断。

2001年时，我国兽医生物制品有188种，灭活疫苗56种，活疫苗57种，抗血清7种，诊断试剂61种，其他制品7种。

最近几年，我国新增生物制品更多，有力的促进了我国畜牧业的发展。

二、兽用生物制品的发展前景

我国养殖业发展速度快，猪鸡的饲养跃居世界第一。

但是，畜禽疫病十分严重，我国畜禽出栏率比外国发达地区低的多。

新疫病不断出现，旧的病死灰复燃。

当前，迫切需要高质量的生物制品来解决问题，今后生物制品的方向应该是：

1、传统疫苗为主，多联多价苗倍出

传统疫苗有质量稳定，价格低廉的优势，在农村广大地区，起主导作用；

一些多联多价疫苗，将降低劳动成本，成为畜牧业发展的新需求。

2、提高疫苗质量，研制新型疫苗

SPF，是指无特定病源动物，鸡胚，细胞是弱毒疫苗质量的关键，但是，部分疫苗不是用SPF原料生产的，造成疫苗的污染和散毒，需要从原料上进行治理。

还有新的疫病无疫苗预防：

圆环病毒，蓝耳病，鸡白痢等，需要加大研究力度。

3、研究新型的基因工程疫苗是发展方向

我国已经有伪狂犬基因缺失疫苗，对筛选野毒携带起重要作用，如果把这个技术推广到猪瘟等其它疫苗上，将更好地净化野毒的携带者。

DNA疫苗也是发展的方向。

4、试剂盒标准化，简单化

当前我国试剂盒不稳定，非特异性高，需要国家扶持和发展；

国外质量高，但价格贵，不适用农村推广；

操作麻烦也是解决的问题。

5、微生态制剂、寄生虫疫苗、鱼类疫苗发展空间大

我国加入WTO，要求出口绿色产品，为达到这个质量，就需要微生态制剂；

寄生虫和鱼类疫苗特少，需要研究开发。

6、加快生物制品GMP建设，与世界接轨

全国06年就要求兽医药厂，必须达到GMP标准，否则要关闭；

但是，有借批号的，合并、分厂现象多。

是上有政策，下有对策。

7、完善兽医法规，加强生物制品管理

我国已经颁布了《中华人民共和国防疫法》和《兽医生物制品管理办法》，问题是执行不力，监督不力，需要进一步完善和加强。

学习外国兽医官制度，是当务之急。

思考题：

1、基本概念：

兽用生物制品，兽用生物制品技术，疫苗，弱毒疫苗，灭活疫苗。

2、简述生物制品的分类与应用。

3、简述生物制品的命名原则。

4、结合我国兽用生物制品现状，试述兽用生物制品的发展前景。

第二章细菌和病毒的培养技术

第一节细菌培养技术

细菌培养技术是生物制品制造的基础，一些内容在微生物学已经学习过，这里主要讲一些重要的细菌培养技术。

一、细菌培养技术

熟悉细菌的生长曲线，因为不同的生物制品，要用不同时期的细菌，如细菌疫苗，要数期或稳定期细菌；

芽孢疫苗，要衰老期细菌；

外毒素要老龄细菌。

其次，要根据不同细菌用不同的培养基进行培养，用不同的培养方法（需要氧气，微需氧，厌氧。

另培养温度，pH，渗透压等。

）。

二、细菌培养的基本技术

步骤：

先分离出单个菌落→斜面培养基→生化或血清鉴定→菌种保存→生产生物制品→先接种到斜面菌种→小三角瓶肉汤→大三角瓶肉汤。

（一）细菌分离培养（目的是稀释病料，得到单个典型菌落）。

1、需氧菌分离培养：

分段划线、倾注培养。

2、微需氧培养：

鸭疫巴氏杆菌，牛布氏杆菌病，猪传染性胸膜肺炎菌等，用蜡烛缸方法。

3、厌氧菌培养：

用疱肉基，物理除氧气（加氮气，氢气），化学除氧：

焦性没食子酸加烧碱。

（二）细菌的规模培养

生物制品是产品，一般要大规模培养，才能满足基层需要。

1、菌种接种量：

1-3%，过少生长慢，过度带入有害产物多，影响生长。

2、培养时间：

菌苗，对数期和稳定期的细菌好；

芽孢疫苗：

衰老期细菌；

外毒素：

需要1周时间培养。

在培养过程中，如果有少量污染，可以提前灭活终止培养。

3、培养方法：

根据不同制品的性质和要求，选育不同方法。

①固体表面培养：

多用于诊断剂，也有菌苗生产。

可随意调节细菌浓度，但操作麻烦，劳动量大。

培养方法有克氏瓶，大平皿，到入菌夜，L玻棒刮抹接种，培养后加生理盐水，再用L棒刮洗下细菌混悬液。

②液体静止培养：

一般细菌疫苗多用，用大三角瓶（5000ml）或发酵罐，装入培养基1/2—-2/3量，需氧培养，要5小时摇动一次，增加氧气浓度。

培养厌氧细菌，可以装满培养基，上面加少量石蜡油，隔绝空气，下加肝块或肉渣（疱肉基），它们氧化，吸收氧气，达到除氧气目的。

液体培养含菌量低，多需要浓缩。

③液体深层通气培养（发酵罐）：

可自动调节温度、氧气、pH、营养、搅拌，注意消泡沫和污染。

④透析培养：

半渗透膜作用，营养可以不断补充，可以提高细菌和毒素含量。

⑤连续培养：

营养不断加入，培养好的细菌不断流出。

（三）细菌计数技术

细菌疫苗必须有一定含菌量，才有好的免疫效果。

所以，应该对生产的疫苗计算含菌量。

1、直接显微镜检查计数

①定量定面积染色计数：

10vul菌夜，涂抹1cm2面积的载玻片上，干燥固定染色，油镜下观察，油镜直径是0、16mm，视野面积是0、02mm2，1cm2面积有50万个油镜视野，多观察几个视野，算出一个视野细菌平均数X50万X100，即每ml含细菌量。

②比例法计数（也叫对照法）

如用已知人红细胞为500万/mm3（可以把红细胞0、4%甲醛固定，长期使用），取一环红细胞放在载玻片上，另取一环菌夜与红细胞混匀涂片，干燥固定染色，显微镜下检查，如果平均每个视野是一个红细胞，10个细菌，那么，被检查细胞为5000万/mm3，，1ml是500000万个细菌。

③估计计数法

接种环直径在0、5cm，取一环细菌液，涂抹在载玻片上，大约0、5—1cm2，干燥固定染色，显微镜检查，如果每个视野平均是1—9个细菌，菌夜含量是105-6个/ml，10—99为107-8个/ml，100以上为109-10个/ml，密不可计为1010个以上/ml。

④红细胞计数室法：

X（细菌量）Y/80*400*稀释倍数*10=细菌数/mm3，变ml乘1000。

（Y是5个中方格细菌总数，乘10是计数室的高度为0、1mm，计数室1内mm2，有400个小格，有25个中格，每个中格是16个小格）。

该方法多用于计数大的细菌或酵母菌、细胞。

2、比浊比色法

①比浊管法含菌量与浑浊度正比，用已知菌含量的试管与标准比浊管相比，找出规律，如1亿细菌=1号比浊管颜色，10亿等10号，以后，用未知细菌液与标准管比色，得出大致细菌含量。

②美蓝还原褪色法：

含细菌多，使美蓝褪色快。

10ml牛奶，加1ml美蓝液（1/3000），37度水浴，褪色少于20分钟，细菌多于2000万/ml，20-2小时，为400—2000万；

2----5、5小时为50—400万；

5、5小时以上，为少于50万/ml，为一级牛奶；

如果用于细菌苗，应先用已知细菌找出规律。

3、活菌计数：

原理，一个菌落是一个细菌的后代，数菌落就知道含菌量，也叫菌落形成单位—CFU：

colonyformatunite。

①倾注法（GB方法）：

菌液10倍递减稀释，选2-3个稀释度，各取1ml于平皿，加45-50营养琼脂，37度培养，计算菌落，乘稀释倍数，即每ml细菌数。

②平板表面涂布法：

先做好营养琼脂平板，将不同稀释度菌液0、1ml加上，玻璃棒刮匀，37度24h培养，计算菌落乘稀释度乘10=菌数/ml

③微量滴板法：

将不同稀释度菌液，各取0、02ml滴在营养琼脂板上，一板可以滴多点，自然扩散，37度培养，计算每点菌落乘50乘稀释度=菌数/ml。

三、培养基

微生物学已经学过，自己温习，重点熟悉：

1、不同微生物用不同的培养基来培养

2、注意各种营养物资浓度配比

3、调节合适的pH范围

第二节病毒的培养技术

一、病毒的复制与培养

病毒为专性细胞寄生物，必须在活细胞内生存，其复制过程是：

吸附，进入，脱壳，生物合成，装配和释放。

微生物已经讲，自己复习。

二、病毒的动物接种增殖

（一）、病毒材料的处理

1、病毒的释放：

剪碎研磨，冰冻融及超声波处理。

2、除杂菌：

细菌过滤器过滤，高速离心取上清夜；

其次是抗生素处理，加500—1000u青霉素和链霉素，4度过夜杀菌。

（二）动物选择

1）健康动物、SPF动物；

2）未接种相应病毒疫苗动物

3）适宜年龄和体重

4）易感动物。

（二）接种方法：

皮下，肌肉，静脉，腹腔，脑，胸腔等

三、鸡胚的接种

（一）鸡胚的选择

1、健康的SPF鸡胚

2、白壳，薄壳消毒蛋

3、没免疫相应病毒疫苗

4、5-7天照蛋，去无精、死胚鸡蛋

5、画出气室，接种24h照蛋，定时收病毒。

（二）鸡胚的接种和收获

避开血管和心脏，确定接踵部位，先碘酒消毒，再酒精消毒，用三棱针或12号针头钻孔，然后可以接种。

预先准备好病料，注射器，融化的石蜡。

1、卵黄囊接种：

用5-8天鸡胚，在气室中心，胚胎对侧刺入3cm（先用三棱针钻孔）。

用于病毒，立克次氏体，衣原体接种。

2、尿囊腔接种，用9-11日鸡胚，在气室边缘下2cm，避开血管，40°

进针0、5-1、5cm。

适应鸡新城疫，鸭肝炎，鸡传染支气管炎病毒接种。

3、羊膜腔接种：

用10-12日鸡胚，在胚胎对侧进针，有抵抗时注入病毒。

4、绒毛尿囊膜接种：

选11—13日鸡胚，先造人工气室，然后在人工气室内注射，适合痘病毒，疱疹病毒等。

另外，还有脑，胚体，静脉接种，难度大，科研使用。

不同病毒用不同接种途径，培养时间不同，收获组织也不同。

（三）影响禽胚增殖病毒的因素

1、种蛋质量：

要用SPF蛋，母源抗体存在，抗生素（对立克次氏体和衣原体）。

2、孵化环境：

温度是37、8--38℃，湿度53-57%，通风，定时翻蛋。

3、接种技术：

无菌操作和消毒，收获根据不同病毒，收获病毒时间不同，不要臭蛋和浑浊蛋。

收获后测效价，加双抗-20℃保存。

四、细胞增殖病毒技术

1、细胞培养概念：

利用机械、酶、化学方法使组织或单层细胞分散成单个或2-4个细胞的悬液，进行培养。

（1）原代细胞：

新鲜组织制备的单细胞进行培养，一般仅可以传代3代。

（2）二倍体细胞：

自继代细胞选出的也特殊生物学标志的细胞，染色体是二倍体，可传代50-100代，主要做疫苗生产。

（3）传代细胞：

非二倍体，多为癌细胞，可无限生长，如Hela细胞，多用做病毒研究，不能做疫苗生产。

2、细胞培养的方法

（1）静止培养：

细胞悬液接入培养瓶中，密封置温箱培养，细胞沿瓶子壁长成单层，为最简单培养病毒方法。

（2）转瓶培养：

细胞悬液在转瓶旋转培养，10-20转/h，细胞贴壁生长，需要营养液少。

（3）悬浮培养：

通过震荡，转动使细胞悬浮于液体中培养。

（4）微载体培养：

以固体小颗粒为载体，便于细胞附着，载体扩大了表面积。

（5）中空纤维培养：

细胞在中空纤维内生长。

（6）微囊化培养：

细胞在微囊中生长。

3、细胞的制备

细胞间有胶原蛋白，要破坏它们才变成分散单细胞。

1）机械分散：

将组织剪碎成1mm3小块，再挤压通过铜丝网孔，可得到单细胞。

2）酶消化法：

常用胰酶破坏细胞间质，活力1：

250，浓度是0、25%，pH7、4-7、6。

3）鳌合剂分散法：

EDTA可除去维护细胞间结合的Ga++和Mg++，常用于单层细胞的分散。

4、细胞培养的要素

（1）营养物资：

培养液（含氨基酸，犊牛血清，维生素，盐，糖等成分）。

现多用成品细胞培养基，engle液，RPMI-1640和DMEM等。

（2）接种量：

与单细胞生长成正比，量过大，因细胞碎片产生毒性作用，过小，不易长成单层。

不同细胞有不同接种量，如鼠肾细胞50万/ml，鸡成纤维细胞20—40万ml，猪肾细胞80万/ml，血球计数室计数。

（3）pH、温度、气体环境：

pH7、2-7、4，不低于6、8，不高于7、6；

温度一般是37℃，过高容易死亡，过低生长慢，20--25℃，细胞缓慢长。

气体环境，一是橡皮塞蜜蜂培养；

二是CO2培养箱培养。

5、污染问题：

细菌、真菌、支原体污染，加一定量抗生素可杀菌，如加青链霉素100u，有霉菌污染加制霉菌素。

病毒污染：

有组织代毒和培养带毒，前者用SPF动物组织可以解决，后者注意灭菌和消毒。

胶原虫：

（存在犊牛血清），血清37℃培养1个月以上，高速离心，检查沉淀物。

5、病毒增殖技术

（1）选敏感动物细胞。

（2）注意营养，温度和pH。

（3）接种量和方法：

1-10%接种，V/V；

分同步和异步接种。

（4）支原体污染，加抗生素。

（5）细胞病变：

CPE，有圆缩、聚合、合胞体、包涵体，轻微病变，以及无细胞病变。

（6）收获：

CPE到80%收获，反复冻融，离心取上清夜，测效价，加双抗，-20℃保存。

1.细菌规模化培养方法有哪些？

2.细菌计数技术有哪些？

3.用动物培养病毒时，如何选择动物？

4.用鸡胚培养病毒的接种方法有哪些？

如何收获病毒？

5.细胞培养的方法有哪些？

6.细胞培养病毒需要哪些条件

第三章灭活剂、冻干保护剂、与免疫佐剂

第一节灭活剂

一、灭活与灭活剂

（一）灭活：

杀死病原微生物，但不影响免疫原性；

其次是破坏血清的补体，以免干扰血清学反应结果。

灭活剂：

灭活微生物的化学试剂。

（二）灭活方法：

物理灭活：

加热、及射线灭活微生物，此方法免疫原性易破坏，现很少使用（血清56°

C半小时灭活补体用此方法）。

化学灭活：

用化学试剂将病原微生物杀死，此方法经常使用。

二、常用的灭活剂种类和原理

（一）甲醛：

是最古老常用的灭活剂，现在我国用的26种灭活疫苗，均以甲醛为灭活剂。

性质：

甲醛为刺鼻的气体，水溶液叫福尔马林，浓度为3