WATERS26952487HPLC仪器操纵简明步骤.docx

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WATERS26952487HPLC仪器操纵简明步骤

WATERS2695-2487HPLC仪器操作简明流程

1、2487检测器开、关机及使用：

实验完毕关掉电源开关即退出。

打开电源仪器自检1-2min预热5min稳定约30min设定通道、波长模式、波长（也可在工作站上设置）回零（AutoZero）分析检测

2、2695分离单元使用操作：

4-5min），待屏幕上方出现“Idle”字样表示自检成功。

”键进入“Status

（1）”界面，移动光标至“DegasserMode”，按Enter

1）开机自检打开电源开关，仪器开始自检（

2）脱气（Degas）按面板右下方“Menu/Status

选择“On”，打开在线脱气。

3）设定柱温（可选项）

在“Status

（1）”界面，移动光标至“ColHtrSet”，输入目标温按Enter即可。

（可在工作站方法中设置）

4）PrimeSealWash（清洗柱塞杆）

按“Menu/Status”键回到“Menu”界面，按下排功能键“Diag”，然后再按下排功能键“PrimeSealWsh”,“Start”，冲洗1~2min后，“HALT”，“CLOSE”。

5）WetPrime

在“Status

（1）"界面中“Composition”下，选择将用到的溶剂通道为“100%”，按液晶屏幕右下角“DirectFunction”键，移动光标选择“2WetPrime”，“OK”，流速及时间可使用默认值，也可自行设定（如：

5ml/min，3min），“OK”即可。

将每一个会用到的溶剂通道按照上述操作一次。

6）PurgeInjector（注射器排气泡及清洗）

进入“DirectFunction”界面后，选择“3PurgeInjector”，“OK”，默认数值为6，“OK”。

7）PrimeNeedleWash（清洗注射针）

进入“Diagnostics”界面，按下排功能键之“PrimeNdlWsh”，“Start”，默认30秒钟，“Close”，即可返回“Diagnostics”界面。

4））。

注：

以上4）-7）为溶剂系统前处理过程，建议每天开机后依次进行。

若发现注射器中有气泡，则可重复6）直至排除。

如果流动相中含有盐类，则实验结束后必须用水清洗柱塞杆（即操作

8）平衡柱子

在“Status

（1）”界面上，按流动相比例设定各通道溶剂比例后，再WetPrime操作一次，然后设置流速，

平衡色谱柱30-60min。

9）放置样品拉开样品转盘舱门，将盛有待测样品溶液的样品瓶放入转盘中，记下样品瓶号，关上舱门。

10）检测样品打开工作站，设置仪器方法、方法组、自动进样序列等，监视基线、检测样品。

11）分析处理数据、打印报告

12）清洗注射器、针、柱塞杆参见上述4）、7）。

13）清洗色谱柱

用水冲洗柱子40-60min（视柱子规格不同，流速通常1ml/min）；然后用甲醇或乙腈冲洗柱子40min（流速1ml/min）。

14）关机关掉电源开关。

另外有相关注意资料

“CLOSE”冲洗1-2min即可，1次。

可以每天开机后进行，或结束实验时进行。

流动相中有盐，结束实验时一定要清洗。

仪器不自动进行。

每次仪器打开后，会自动进行的操作有：

①

选用梯度，用“平衡色谱柱”可以在进样前运行梯度来平衡柱子；而如果选用“平衡”则只是按照初始梯度条件等度平衡柱子。

（当然，如果是用等度的流动相条件，则两者没有区别）18、编辑仪器方法时注意：

0.3时，选25；流速在

。

“针头深度”除样品瓶选用内插管时设为2，其余均用默认值

1）2695“通用”标签下，“单次输送体积”数值根据流动相流速不同有别：

流速V

0.3-1.0时，选50;流速＞1.0时，选100

0。

6）AUFS值在此仪器中没有启用，不改变面积大小。

19、注射器中的气泡快速有效排除方法：

可以小心的卸下注射器抽吸甲醇排除气泡后，注射器中保留少

量溶剂，做“purgeinjeCtor”小心安装上，再做几次“purgeinjeCtor”观察没有气泡即可。

其他方法，如WATERS工程师讲可以在“purgeinjeCtor”开始后、注射器杆向上时，拧掉下边螺丝，上下抽推排除气泡。

溶剂用甲醇较好；不用同时拧掉上方注射器。

20、

21、

检测器开机自检结束时有时会提示“Calibrationdiffers.521nm”,这是仪器自检后提示与上一次自检结果有出入，原因很多，可能是检测池中有小气泡，检测池污染，也可能是流路中溶剂有变动。

分析原因，清洗检测池，排气泡，或者请工程师帮助。

要注意样品瓶中死体积大小，防止供试液体积不足，针头吸不到。

HPLC日常维护办法之一：

压力异常

操作压力的变化往往是故障的征兆。

从下表中找出所观察到的现象，并在右侧的列表中参考相应的解决方法。

A、没有压力显示，没有流动相流动原因解决方法

1、电源问题1、接通电源，开机

2、保险丝被烧坏2、更换保险丝

3、控制器设定不正确或设定失败3、a、采取恰当的设定b、修理或更换控制器4、柱塞杆折断4、更换柱塞杆

5、泵头内有空气5、溶剂脱气、启动泵抽出空气

6、流动相不足6、a、补充流动相b、更换入口滤头

7、单向阀损坏7、更换单向阀

8、漏液8、拧紧或更换手紧接头

B、流动相流动正常，但没有压力显示原因解决方法

1、仪表损坏1、更换仪表

2、压力传感器损坏2、更换压力传感器

C、压力持续偏高

原因解决方法

1、流速设定过高1、调整流速设定

2、柱前筛板堵塞2、a、在允许情况下反冲色谱柱b、更换筛板

C、更换色谱柱

3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀3、a、使用恰当的流动相b、冲洗色谱柱

4、色谱柱选择不当4、选择恰当的色谱柱

5、进样阀损坏5、清洗或更换进样阀

6、柱温过低6、提高温度7、控制器失常7、修理或更换控制器

8、保护柱阻塞8、清洗或更换保护柱

9、在线过滤器阻塞9、清洗或更换在线过滤器

色谱柱选择不当3、选择恰当的色谱柱

柱温过高4、降低温度

因解决方法

因解决方法

G、压力不断下降，但不回零

原因解决方法

1、见列表D1、见列表D

H、压力波动原因解决方法

1、泵中有气体1、a、溶剂脱气

b、从泵中除去气体

b、改变脱气方法（使用在线脱气法等）

5、系统漏液5、确定漏液位置并维修

6、使用梯度洗脱6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动

HPLC日常维护办法之二：

漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。

但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。

如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉。

A、接头处漏液

5、部件不匹配5、使用同一品牌的配件

B、泵漏液

原因解决方法

1、单向阀松动1、a、拧紧单向阀（不必拧的过紧）b、更换单向阀

2、接头松动2、拧紧接头（不必拧的过紧）

3、混合器密封损坏3、a、更换混合器密封b、更换混合器4、泵密封损坏4、维修或更换泵密封件

5、压力传感器损坏5、维修或更换压力传感器

6、脉冲阻尼器损坏6、更换脉冲阻尼器

7、比例阀损坏7、a、检查隔膜，如果漏液立即更换

b、检查手紧接头，损坏的立即更换8、放空阀的损坏8、a、拧紧放空阀b、更换放空阀

C、进样阀漏液

原因解决方法

1、转子密封损坏1、重新安装或更换进样阀

2、定量环阻塞2、更换定量环

3、进样口密封松动3、调整

4、进样针头尺寸不合适4、使用恰当的进样针5、废液管中产生虹吸5、保持废液管高于废液液面

6、废液管阻塞6、更换或疏通废液管

D、色谱柱漏液原因解决方法

1、尾端接头松动1、拧紧接头

2、卡套内有填料2、拆下、清洗卡套、重新安装

3、筛板厚度不合适3、使用合适的筛板（参考下表）

筛板选择指导物质粒径筛板孔径

3-4u0.5u5-20u2u

E检测器漏液

原因解决方法

1、流通池垫片损坏1、a、避免过大的背景压力（压力降）b、更换垫片

2、流通池窗破碎2、更换窗口

3、手紧接头漏液3、拧紧或更换

4、废液管阻塞4、更换废液管

5、流通池阻塞5、重新安装或更换

HPLC日常维护办法之三：

谱图的各种问题液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。

其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其

他的问题必须通过修改操作程序来解决。

对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。

A、峰拖尾

因解决方法

筛板阻塞1、a、反冲色谱柱b、更换进口筛板

色谱柱塌陷2、填充色谱柱

干扰峰3、a、使用更长的色谱柱

b、改变流动相或更换色谱柱

4、流动相PH选择错误4、调整PH值。

对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰

5、样品与填料表面的溶化点发生反应

5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂

b、更改色谱柱B、峰前延

因解决方法

样品溶剂选择不恰当2、使用流动相作为样品溶剂

样品过载3、降低样品含量

C、峰分叉

原因解决方法

1、保护柱或分析柱污染

图1、取下保护柱再进行分析。

如果必要更换保护柱。

如果分析柱阻塞，拆下来清洗。

如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。

如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。

2、样品溶剂不溶于流动相2、改变样品溶剂。

如果可能采取

流动相作为样品溶剂。

D、峰变形

因解决方法

因解决方法

1、

样品溶剂选择不恰当1、a、减少进样体积

b、运用低极性样品溶剂

F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰

原因解决方法

1、柱外效应1、a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）

b、使用小体积的流通池

G、K'增加时，脱尾更严重原因解决方法

1、二级保留效应，反相模式1、a、加入三乙胺（或碱性样品）

b、加入乙酸（或酸性样品）C、加入盐或缓冲剂（或离子化样品）d、更换一支柱子

2、二级保留效应，正相模式2、a、加入三乙胺（或碱性样品）

b、加入乙酸（或酸性样品）

C、加入水（或多官能团化合物）d、试用另一种方法

3、二级保留效应，离子对3、加入三乙胺（或碱性样品）

H、酸性或碱性化合物的峰拖尾

原因解决方法

1、缓冲不合适1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液

b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液

I、额外的峰原因解决方法

b、使用流动相作为样品溶剂

因解决方法

K、保留时间不断变化

因解决方法

b、选择合适的混合流动相

L、基线漂移

原因解决方法

1、柱温波动。

（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。

通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。

）

1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交