浅论Grp78用于胸部良恶性肿瘤鉴别诊断的实验研究Word文件下载.docx
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鉴别诊断
Abstract：
ObjectiveToexplorethepossibilityofdetectingGrp78expressionlevelsinthehydrothoraxdetachedcellsinthedifferentialdiagnosisinchesttumors.MethodsTheexpressionlevelsofGrp78in36casesofsuspendedchesttumorpatientsweredetectedbywesternblotandthehydrothoraxdetachedcellsanalyseswerealsodetectedbyHEstaining.ResultsInthe21casesofpatientsthatGrp78isoverexpressedinthehydrothoraxdetachedcells,19casesofpatientswereidentifiedaslungcancerbyretrospectiveanalysisofclinicopathologicaldata.Inthe15casesofpatientsthatGrp78wasradicallyexpressed,noneofwhichwasdiagnosedascancer.Inthe12casesofpatientsdiagnosedaslungcancerbythehydrothoraxdetachedcellsanalysisbyHEstaining,4caseswereexcludedfromthediagnosisofcancerbasedonclinicopathologicalanalysis.ThesensitivityofHEstainingis47%comparedwith81%ofwesternblot.ThespecificityofHEstainingandwesternblotis85%and% DetectionofGrp78expressionlevelsinthehydrothoraxdetachedcellsisausefultargetinthedifferentialdiagnosisofchesttumor.
Keywords：
Grp78;
chesttumor;
differentialdiagnosis
肺癌发病率高预后较差是一种严重威胁人类健康的疾病，其早期发现对于肺癌病人的治疗及预后具有重要意义。
胸水脱落细胞学检查是早期诊断肺癌的一种常用方法，但是传统的脱落细胞学检查过多依赖于操作者的业务能力，主观性较强，而且灵敏度低，在一定程度上延误了肺癌的诊断，因此，提高检测的灵敏度和客观性是非常必要的［1］。
Grp78是内质网合成的分子伴侣，在内质网中与新生蛋白质和错误折叠的或非折叠蛋白质结合，帮助其折叠形成正确的构象。
近年来的研究表明，Grp78的表达与功能与肿瘤的发生、进展关系密切，在正常细胞中低/不表达，在恶性肿瘤细胞中高表达［2-5］。
在分化程度不同的细胞中Grp78表达的水平不同，在分化程度低的细胞中其表达水平较高而在分化程度高的细胞中其表达水平较低［6］。
本研究，对36例肺癌疑似病人胸水脱落细胞中Grp78的表达水平进行检测，以探讨胸水脱落细胞中Grp78表达作为肺癌鉴别诊断的一个辅助指标的可能性。
1材料与方法
样品
36例肺癌疑似病人的胸水均来者本钢胸科医院肿瘤科，32例胸膜炎病人的胸水均来自本钢胸科医院结核内科。
样品的处理
将胸水5000g离心3min，收集细胞，PBS漂洗3次，向沉淀中加入500μLRIPA缓冲液,混匀,置于冰上作用30min，12000g离心10min，将上清移入一个干净的EP管中。
另取少量沉淀涂片，%多聚甲醛固定，HE染色进行形态学检查。
蛋白质定量
取细胞裂解液2μL加入去离子水3μL，考马斯亮蓝3mL，标准管加入蛋白标准液2μL代替细胞裂解液。
对照管用2μLRIPA缓冲液代替细胞裂解液，应用分光光度计与575nm读取吸光度值，计算细胞裂解液中蛋白质浓度。
蛋白质浓度＝×
标准液蛋白质浓度。
WesternBlot
取相当50μg蛋白质的细胞裂解液上样于10％的SDS-PAGE，电泳至溴酚蓝出胶，然后将蛋白质转印的用甲醇浸透的PVDF膜上，5％脱脂奶粉封闭过夜，然后加入一抗杂交2h，二抗杂交1h，ECL显色。
用凝胶分析系统测定Grp78和Actin的灰度值，并计算二者比值，作为Grp78表达的相对量。
统计学分析
应用t检验对炎性胸水和癌性胸水中Grp78表达水平进行比较；
应用2检验比较两种检查方法的灵敏度及特异性。
2结果
WB检测
应用WesternBlot技术分别检测癌性胸水及炎性胸水脱落细胞中Grp78的表达水平，结果发现癌性胸水中Grp78的表达量明显高于炎性胸水，这表明胸腔积液脱落细胞中Grp78表达水平可用于癌性胸水与炎性胸水的鉴别诊断。
上图为Grp78的表达情况，下图为actin的表达情况
图1WB检测癌性胸水及炎性胸水中
脱落细胞的Grp78的表达水平
表1癌性胸水与炎性胸水中Grp78表达水平分组n±
stP癌性胸水±
炎性胸水±
＜
经统计学t检验分析表明，癌性胸水脱落细胞中中Grp78表达水平明显高于炎性胸水。
两种方法对肺癌的鉴别诊断
与传统的脱落细胞学检查方法相比，应用WesternBlot技术分别检测癌性胸水中Grp78的表达水平可以提高胸水脱落细胞学检查的灵敏度，这些进一步证明胸腔积液脱落细胞中Grp78表达水平可用于癌性胸水与炎性胸水的鉴别诊断。
如表2所示，在36例肺癌疑似病人胸水脱落细胞中Grp78的表达水平进行检测，结果发现其中21例Grp78表达水平较高，15例表达水平较低。
在Grp78高表达的病例中有19例被临床确诊为肺癌，灵敏度为90%。
特异度为%。
应用传统的形态学检查36例肺癌疑似病人胸水脱落细胞，有12例被诊断为肺癌，其中8例临床确诊为肺癌，灵敏度为42%，特异度为85%，经统计学χ2检验分析新方法的灵敏度明显高于形态学检查，特异度没有差别。
表2两种方法进行肺癌鉴别诊断的结果对比阳性例数阴性例数形态学检查1224检测Grp78表达水平2115
3讨论
肺癌在我国发病率以及病死率高，严重威胁人们的生命，胸水是肺癌的一个重要临床表现［7］，因此，胸水脱落细胞学检查是肺癌的诊断与鉴别诊断的一个重要环节。
但传统的脱落细胞学检查过多依赖于操作者的业务能力，灵敏度低，尤其难以区分肺癌和炎性增生，因此，提高检测的灵敏度和客观性是非常必要的。
Grp78是内质网合成的分子伴侣，近年来的研究表明，在分化程度不同的细胞中Grp78表达的水平不同，在分化程度低的细胞中其表达水平较高而在分化程度高的细胞中其表达水平较低［6］544-551。
本研究36例肺癌疑似病人胸水脱落细胞中Grp78的表达水平进行检测，以期明确Grp78作为肺癌早期诊断的一个客观指标的可能性。
我们的研究表明，癌性胸水脱落细胞中Grp78的表达水平明显高于炎性胸水。
与形态学检查相比，应用WesternBlot技术检测胸水中Grp78表达水平应用于肺癌的诊断和鉴别诊断灵敏度高，特异性差别不大。
这些表明，胸水脱落细胞中Grp78表达水平是反映细胞增殖程度的一个指标，可以应用于肺癌的诊断与鉴别诊断。
【参考文献】
［1］袁帅,张焜和.恶性胸/腹水的实验诊断研究现状［J］.中国实验诊断学, 2008,12（6）:
815-817.
［2］Lee inductionincancer:
therapeuticandprognosticimplications［J］.CancerRes,2007,67（8）:
3496-3499.
［3］FuY,Lee regulatedproteinsincancerprogression,drugresistanceandimmunotherapy［J］.CancerBiolTher,2006,5（7）:
741-744.
［4］YeungBH,KwanBW,HeQY,etal.Glucose-regulatedprotein78asanoveleffectorofBRCA1forinhibitingstress-inducedapoptosis［J］.Oncogene,2008,27：
6782-6789.
［5］ZhengHC,TakahashiH,LiXH,et ofGRP78andGRP94aremarkersforaggressivebehaviorandpoorprognosisingastriccarcinomas［J］.HumPathol,2008,39（7）:
1042-1049.
［6］WangQ,HeZ,ZhangJ,et ofendoplasmicreticulummolecularchaperoneGRP94andGRP78inhumanlungcancertissuesanditssignificance［J］.CancerDetectPrev,2005,29（6）:
544-551.
［7］Heffner andmanagementofmalignantpleuraleffusions［J］.Respirology,2008,13
（1）:
5-20.
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