家畜寄生虫学实习Word格式文档下载.docx
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将采集检查吸附在粘膜到的虫体放于保存液中,肺脏表面还应注意观察是否有细粒棘球蚴的寄生。
如有则应连同肺组织一起剪下放于保存液中。
3、肝脏：
先检查是否有细粒棘球蚴,然后检查胆囊,检查内部,并切开胆管,检查有否肝片吸虫或矛形双腔吸虫的寄生,然后将肝撕成小块用清水反复冲洗至上部液体清亮为止,倒去上清液,将沉渣倒入盘内检查有无虫体。
4、胰脏和检查肝脏的方法相同,检查有否胰阔盘吸虫。
5、肠系膜：
检查肠系膜血管是否有血吸虫,并将肠系膜淋巴结切开检查有无舌形虫的幼虫,注意肠系膜上是否有细颈囊尾蚴的寄生,如有,可取下放于70%酒精或巴氏液中。
6、胃：
将胃分离,首先切开第一胃（瘤胃）倒出内容物,检查吸附在胃粘膜上的前后盘吸虫。
然后将第四胃（皱胃）的内容物倒入瓷盆内,将其翻过来用生理盐水充分洗净,再用生理盐水反复冲洗,最后将沉渣倒入大培养皿内检查是否有捻转血矛线虫、奥斯特线虫、马歇尔线虫以及古柏线虫等,如发现虫体,可用解剖针挑出放于保存液中。
7、小肠：
沿肠系膜对侧长轴剪开肠壁,先从十二指肠开始,边剪开边检查,并把肠内容物接到搪瓷盘内,如有寄生虫,用镊子夹到1%盐水内。
在羊小肠内可以发现：
羊斯克里亚宾吸虫、莫尼斯绦虫、无卵黄腺绦虫、曲子宫绦虫、仰口线虫、类圆线虫、毛细线虫、古柏线虫、细颈线虫、奥斯特线虫、毛圆线虫等。
当发现有绦虫时,应轻轻的用剪刀尖紧贴肠壁,避免剪断虫体。
其次应留心前端细小的头节不可拉断或失去,要小心的刮下完整头节,如果有头节牢固吸着宿主肠壁则须连同肠壁组织一起取下,一般不超过5分钟。
（时间过久水分渗入虫体内,就破坏了内部组织器官,影响鉴定）。
洗净的虫体放于70%酒精或巴氏液固定保存。
8、大肠：
将大肠的内容物倒入桶中,翻转大肠,用水冲净,再将内容物反复冲洗,然后将沉渣倒入玻璃盘内检查,在大肠中主要有毛首线虫、夏伯特线虫、食道口线虫等寄生,另外还应注意检查肠壁上有无粟粒大至豌豆大的结节（食道口线虫引起的结节）。
将采集到的虫体组织浸于70%酒精或巴氏液中保存。
9、直肠：
收集直肠中的粪便入一次性手套中，实验室放4℃冰箱保存备用。
以检查粪便中的虫卵种类和每克粪便中虫卵数量。
并将之计入表格中。
（三）寄生虫标本的保存
用蠕虫学剖检法采集的虫体上,附有杂物时,可将虫体装入盛有生理盐水的广口瓶内,加以摇荡将虫体洗净然后后放入固定液中。
线虫通常是用巴尔巴卡罗氏液（简称巴氏液）固定保存,配方如下：
福尔马林液30毫升,食盐7.5克,水1000毫升,吸虫、绦虫和棘头虫则常用70%酒精固定保存。
鉴定：
小型线虫一般比较弯曲,可把虫体逐条放入40-50℃热生理盐水内,使虫体伸直,便于鉴定,然后把虫体移入固定液内。
在固定保存吸虫和绦虫之前,应先将虫体浸入常水中（或冰箱中12小时），使之死亡。
这样可使虫体的组织松弛。
需要制片时,可将虫体平放于载玻片上,加盖一张载玻片,并稍加压力把虫体压平至适当薄度后（依虫体的大小薄厚而定）,放在培养皿内,加入10%福尔马林液固定之。
一般固定数小时,较大型的虫体要在一天以上。
固定后,翻开盖在上面的玻璃片把虫体标本慢慢取下,置于盛有5%福尔马林的玻璃瓶中固定保存。
绦虫的幼虫可固定保存于巴氏液中。
在固定棘头虫时,如果他们的吻突缩在吻囊里,则须用手轻压,使吻伸出以后,再用70%酒精固定,也可用巴氏液固定保存。
（四）鉴定
小型线虫一般比较弯曲，可把虫体逐条放入40-50℃热生理盐水内，使虫体伸直，便于鉴定，然后把虫体移入固定液内。
在固定保存吸虫和绦虫之前，应先将虫体浸入常水中（或冰箱中12小时），使之死亡。
需要制片时，可·
将虫体平放于载玻片上，加盖一张载玻片，并稍加压力把虫体压平至适当薄度后（依虫体的大小薄厚而定），放在培养皿内,加入10%福尔马林液固定之。
一般固定数小时，较大型的虫体要在一天以上。
固定后,翻开盖在上面的玻璃片把虫体标本慢慢取下，置于盛有5%福尔马林的玻璃瓶中固定保存。
在固定棘头虫时，如果他们的吻突缩在吻囊里，则须用手轻压，使吻伸出以后，再用70%酒精固定，也可用巴氏液固定保存。
（五）蠕虫学剖检记录和标签的书写
进行蠕虫剖检时,为了避免产生混乱和错误,应及时用铅笔在白色硬纸制成的标签上注明动物的种、剖解编号和器官名称,并将写好的标签投入盛有该器官的器皿中。
搜集到的虫体,在已固定装瓶,但还没有经过鉴定的时候,应当向瓶内放入标签,标签正面说明动物的种、性别、年龄、解剖编号、虫体寄生部位和初步鉴定结果。
反面注明解剖地点、日期、解剖者姓名、虫体数目。
三、实验结果
见寄生虫剖检记录表
山羊直肠粪便EPG计数
寄生虫名称
寄生部位
鉴定特征
山羊毛虱
山羊体表
体扁平，无翅，头、胸、腹分界明显。
头部钝圆，大于胸部，咀嚼式口器。
细颈囊尾蚴
肠系膜、肝脏表面
乳白色，囊泡状，囊内充满透明液体，俗称水铃铛，鸡蛋大小或更大，直径约8cm，囊壁薄，在其中一端的延伸处有一白结，即其头节所在
前后盘吸虫
瘤胃
圆锥形或纺锤形，淡红色，背面稍拱起，腹面略凹陷，有口吸盘和腹吸盘各一。
虫卵椭圆形，淡灰色。
捻转血矛线虫
皱胃
呈毛发状，颈乳突显著，雄虫交合伞发达，有一个“Y”
形背肋，雌虫有显著的阴门盖，卵壳光滑，稍带黄色。
肝片形吸虫
肝脏胆管
扁平，呈叶片状，活虫棕红色，固定后灰白色。
头椎:
前端呈圆锥状突出；
肩部:
头椎后方变宽；
肩部以后逐渐变窄；
体表生有许多小刺。
食道口线虫
盲肠
乳白色，虫体口囊小呈圆筒形，口缘有叶冠，颈沟，前部表皮膨大成头囊，颈乳突及侧翼膜，交合伞与排卵器发达，有一对等长交合刺。
四、实验讨论
本组山羊体型消瘦，被毛粗乱，概因其体内寄生的虫体较多，给羊剃毛后其体表几乎被毛虱所覆盖，在大腿内侧对称的部位见有痂块，但未检出疥螨。
剖检后在肝脏胆管内发现4条肝片形吸虫，在肠系膜和肝脏背面发现两个水铃铛，在瘤胃内发现大量的前后盘吸虫，在真胃里有少量捻转血矛线虫，盲肠内有三条食道口线虫，在食道表面、心脏、肺脏、胰脏内未见虫体。
但肺脏边缘较硬，手摸上去有较硬的颗粒状的突起，经询问老师，证实不是寄生虫，可能是之前羊得过呼吸系统疾病。
实验二线虫制成装片标本
一、实验材料
1．寄生虫：
2．实验器材：
显微镜1台；
15cm培养皿2套；
9cm培养皿2套；
挑虫针3根；
玻璃棒2根；
6cm培养皿6套；
100量筒1个。
3.试剂：
无水乙醇、二甲苯、中性树胶
二、实验内容
福尔马林固定的捻转血矛线虫→挑取部分眼观较好的虫体→清水漂洗数次→挑取展开放于70%酒精溶液中脱水（至少0.5h）→80%酒精溶液脱水（至少0.5h）→90%酒精溶液脱水（至少0.5h）→95%酒精溶液脱水（至少0.5h）→100%酒精溶液中脱水（至少0.5h）→二甲苯中透明（根据虫体大小调整透明时间至眼观虫体变得透明）→挑至滴加1~2→显微镜下观察虫体典型结构（♂交合伞及倒“Y”形背肋♀虫体后部的阴门盖）→调整虫体的相对位置至观察到最佳的典型结构为止→加盖玻片→玻片晾干→拍照记录→填写玻片标签→上交待考核（本次制作玻片标本请见附图）。
见附图
四、注意事项
1.虫体于固定的福尔马林取出后应在清水中充分漂洗，之后用挑虫针挑取具代表性的几个于镜下进行初步鉴定，为制作玻片提供初步准备。
2.脱水步骤要做得详细而彻底。
最好从50%酒精开始→60%酒精→70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→100%酒精，每次脱水至少为0.5h，可以根据实际情况延长脱水时间。
脱水部分耗时较长，但至关重要，否则得到的玻片虫体会变黑，影响制作效果。
3.虫体脱水完毕后，转入二甲苯中透明的时间根据虫体的大小调整，虫体大的延长透明时间。
虫体变得通体透明后取出，展开放于载玻片上的中性树胶内，镜下观察配合虫体位置调整，将典型结构的视野调至最佳方可盖片。
该片时轻度按压虫体，使得交合伞等结构更加充分的展开，便于观察，提高制片之效果。
4.等待树胶干燥完毕后，对虫体进行详细的鉴定，并贴些标签，上交待考核。
五、实验讨论
1、由附图6可以看到，捻转血矛线虫的整个镜像都是黑的，脱水没脱好的缘故。
只有交合刺是透明的，但交合刺与倒“Y”行的背肋这些典型结构还是很清晰的。
2、脱水不成功的原因分析可能主要是酒精梯度脱水过程中，时间不够长，每次每个梯度只是刚好半个小时或稍微多些，这样就很可能导致脱水不够彻底，最终导致制片的虫体变黑。
另外当天天气较潮湿，这也对脱水有较大影响。
3、二甲苯中的透明也很重要，根据虫体大小，适当延长透明时间，等到眼观到整个虫体透光良好时，取出虫体，浸没在中性树胶中，观察后适当调位，加盖盖玻片。
如果盖玻片压的力度恰当，对交合伞的充分展开是很有帮助的。
实验三两种鸡抗球虫药的效力比较试验
一．实验材料
1．实验动物：
20日龄健康公雏鸡60只
2．药物：
药Ⅰ磺胺喹噁啉钠；
药Ⅱ磺胺氯吡嗪钠
3．实验器材：
鸡笼四只、塑料网格垫板、料槽四只、饮水器四只、粪盘四只、保鲜膜、解剖剪、解剖盘、镊子若干、塑料烧杯若干、玻璃棒若干、显微镜、载玻片（含盖玻片）、麦克马斯特计数板、计数器、电子天平、恒温水浴锅、一次性手套、记号笔、胶头滴管、檫镜纸、注射器、量筒（100ml）、照明白炽灯若干；
全价肉仔鸡饲料（不添加抗球虫药物）、饮用水；
生理盐水、饱和食盐水、浓盐酸、胃蛋白酶等。
二．实验内容
1．试验准奋工作
选用15～25日龄左右的健康雏鸡。
防止雏鸡自然感染球虫。
供试鸡使用前应绝对禁用含有抗球虫活性药物的饲料，直至试验结束。
2．试验鸡分组
试验开始时，分别称量雏鸡的个体重，尽量挑选体重接近的，以10只为一组，分别设组：
a：
给药1组——磺胺氯吡嗪钠
b：
给药2组——磺胺喹噁啉钠
c：
感染不给药组（感染对照组）
d：
不感染不给药组（空白对照组）——研究生饲养
3．投药方法
将试验药物按规定剂量溶于饮水中。
在人工接种时同时喂给。
各种混药及试验药物应分别做好标记。
4．人工接种
①柔嫩艾美耳球虫卵囊易于纯分离，且致病力最强，故一般抗球虫药药效试验的人工接种均用柔嫩艾美耳球虫卵囊。
②取保存备用的有感染能力的孢子化卵囊，离心去掉重铬酸钾液，然后加水稀释，进行卵囊计数。
5万个卵囊/ml。
③试验组每只雏鸡接种量为5万个卵囊（即每只鸡1ml），一般在给饲前用吸管经过口腔将卵囊液注入嗦囊。
5．试验观察及处理
①试验期前后应做好详细记录，作为药效试验的原始资料。
②试验期为8天，以人工接种当天为第0天，以后每天观察试验雏鸡数次，记录精神、食欲、粪便等状况，根据不同试验组别分别给足相应的饲料和饮水。
③第3天（周日）开始检查粪便，每天数次，记录各试验组血粪堆数（仅有血丝不算），直至第8天扑杀剖检为止。
④对人工接种第3天后死亡的雏鸡应逐只进行称重、剖检，查明死因，并做好详细记录。
⑤第5天（周二）开始收集每组试验鸡的粪便，集中分别检查出每组雏鸡排出的卵囊总数。
⑥第8天（周五）将各试验组雏鸡分别进行扑杀剖检，一般先扑杀不感染不给药组，然后为给药组，最后是感染不给药组。
剖检器具要分开，每组一套。
⑦剖检前逐只称重，剖检后重点检查盲肠病变，根据病变标准进行评分。
⑧然后将盲肠按试验组进行消化（消化液配方为：
浓盐酸0.7ml、胃蛋白酶0.5～1g、蒸馏水100ml）或制成匀浆，来计数盲肠卵囊数。
6．药效判定方法
药效判定方法及依据以“抗球虫指数（ACI）”来判定药物效力，其计算方法为：
ACI=（相对增重率得分＋存活率得分）-（病变扣分＋卵囊扣分＋血粪扣分）
①相对增重率得分
以不感染不给药组在试验期间每鸡的平均增重为100%，算出其它各组每鸡的平均增重百分率，即相对增重率，相对增重率×
100即为相对增重率得分。
②存活率得分
以不感染不给药组的存活率为100%，算出其它各组试验鸡存活率，存活率×
100即为存活率得分。
③血粪扣分
分别对各组试验鸡生前最严重的一天血粪进行记分，该天每鸡平均血粪堆数在1～3.9堆，则分别记1～3.9分，如平均3.5堆即记3.5分，依次类推。
4堆及其以上的计4分，一直无血粪的记0分。
血粪记分×
5即为该组血粪扣分数。
（4）病变扣分以各试验组平均每只雏鸡的病变记分×
5，即为该组病变扣分数。
病变记分标准：
卵囊情况
盲肠病变
记分
无卵囊
盲肠正常
有卵囊
盲肠黏膜增厚，有少量散在性出血
1
盲肠壁增厚，有明显的血液或血样内容物
2
盲肠黏膜增厚，有大量的血凝块
3
死亡
盲肠外观呈酱色，明显肿大，内容物血样
4
（5）卵囊扣分
把剖检后消化的盲肠匀浆内卵囊数与该组第5～8天粪中卵囊数相加，分别求出每组每鸡的平均卵囊数，按下列标准扣分。
卵囊扣分标准：
每鸡平均卵囊数（×
106）该组卵囊扣分
0——0.10
0.1——1.01
﹥1.0——2.05
﹥2.0——5.010
﹥5.0——6.015
﹥6.0——10.020
﹥10.0——11.030
﹥11.040
7．药效的判定标准
抗球虫指数（ACI）在120以下，不宜用作抗球虫药；
在160以下为控制球虫感染不满意，在160～180之间只有中等的控制球虫感染作用，在180以上时控制球虫感染满意，用作抗球虫药药效好。
三、实验结果与分析
1．雏鸡增重
表1 相对增重率得分
组别
攻虫时体重（g）
处死时体重（g）
平均增重（g）
相对增重率（%）
相对增重率得分
空白对照
109.2±
17.2
152.3±
24.4
43.1
100
感染不给药
96.1±
22.4
145.3±
29.4
49.2
114.2
给药1
106.2±
162.8±
24.1
52.6
122.0
给药2
103.1±
18.8
139.9±
23.1
36.8
85.4
2.存活率得分
表2存活率得分
攻虫时鸡只数量
处死时鸡只数量
存活率（%）
存活率得分
15
3．病变扣分
表3 病变扣分
盲肠病变记分
平均每鸡病变记分
病变扣分
30
10
29
1.93
9.65
32
2.13
10.65
4．卵囊扣分
表4 卵囊扣分
盲肠卵囊总数
粪便卵囊总数
每鸡平均卵囊数
卵囊扣分
6.595x106
1.054x109
7.071x107
40
7.502x104
3.130x108
2.087x107
1.218x105
4.384x108
2.923x107
5．血粪情况
表5 血粪扣分
最高血粪堆数
平均每鸡血粪堆数
血粪记分
血粪扣分
27
1.8
9
1.9
9.5
26
1.7
8.5
6、测定药效的ACI计算：
表6 各组的抗球虫指数
相对增重得分
抗球虫指数（ACI）
100.0
0.0
40.0
9.0
162.85
126.65
7.结果分析
表7两种药物的抗球虫效果比较
药物
药效判定
磺胺喹噁啉钠
160~180，中等控制作用
磺胺氯吡嗪钠
120~160，控制感染不满意
由上表可看出，磺胺喹噁啉钠有中等控制球虫感染作用，磺胺氯吡嗪钠控制球虫感染作用很弱。
四．讨论与总结
本次试验中空白对照组的鸡群理论上应为正常，但是在解剖时却发现盲肠亦出现病变，盲肠出现肿大，出血，盲肠呈酱油色。
分析其原因可能为在进行雏鸡喂养时未注意清洁消毒，以致正常鸡受到了病鸡球虫的传染。
由实验结果可知，磺胺氯吡嗪钠几乎没有抗球虫效果，而对比这两种药物的临床应用效果与其他发表的相关抗球虫效力试验的结果，磺胺氯吡嗪钠应该有较强的控制球虫感染的作用，可知本次试验的相关环节出现了问题，给药组的增重尤其是给药2组的增重，提示出现了问题，从而影响了试验数据，最终影响到对两种药物ACI的评价。
现以个人角度分析试验误差较大的原因：
其一，雏鸡试验初体重没能严格按照试验设计挑选，个别鸡只体重相差较大；
其二，攻虫时攻虫数量控制的不够统一，导致有组的鸡只明显比同条件下的其他鸡只健康状态差；
其三，饲喂人员变化太大，不排除饲喂效果对试验的影响，由于药物是通过饮水给药，试验鸡只饮用量可能不足，不平均，使雏鸡体内不能达到有效药物浓度，从而导致给药组试验数据的不理想；
其四，数血便、计数卵囊、粪便中虫卵计数、盲肠计分时受主观影响较大。
其五，鸡只的饲养环境不理想，比如环境温度、通风，笼具挨的太近，可能导致的交叉感染等，均可能影响到实验效果。
学生自我鉴定：
习
单
位
考
核
意
见
评语（在校内实习本栏不用填）：
考核等级（五级记分制）：
实习单位指导教师（签名）：
实习单位（盖章）
年月日
指
导
教
师
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