两栖类标本的采集和保存Word格式文档下载.docx
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不同地区、不同种类的冬眠时间和冬眠地点常不相同，如大鲵多在深洞或深水中冬眠，黑龙江林蛙（Ranaamurensis）在河水深处的沙砾或石块下冬眠，大蟾蜍则多潜伏在水底或烂草中冬眠等等。
（二）昼夜活动
无尾两栖类大多夜间活动，它们白天匿居于隐蔽处，以躲避炎热天气，如大蟾蜍常匿居于杂草丛生的凹穴内，黑斑蛙多匿居于草丛中等等。
黎明前或黄昏时活动较强，雨后更加活跃。
但少数种类如泽蛙则在白昼活动。
有尾两栖类一般也多在夜间活动，如大鲵白天潜居在有回流水的细沙的洞穴内，傍晚或夜间出洞活动，只在气温较高的天气，才在白天离水上陆在岸边活动。
动物的采集是研究动物变异、分布和生活史等的基础工作。
三、两栖类的采集
（一）进行采集时，应该注意的几个问题
1.采集法定保护动物如大鲵等，应事先征求地方政府的许可。
2.事先准备好装存工具。
有尾类和小型蛙类可装人广口瓶中，瓶盖最好穿孔，以保证动物不死。
瓶内还需要放进少量的水以保持湿度，但不能多到埋着动物的头部。
大型蛙类最好装在布袋内，还需要把袋子弄湿。
3.事先选好目的地。
要根据所采集的动物栖息环境来选择。
4.及时采集稀有种类。
遇到稀有种类，一定要设法采到，不要错过机会。
5.尽量使用最简便的采集方法。
最简便的方法是用手捕。
捉蛙类时，要用手握住蛙后肢前面身体的全部。
捉有尾两栖类时，捏颈部或握躯干均可，但不可触及尾部，有些种类的尾部很容易折断。
（二）采集用具
1.钉耙和钩钉耙和钩是翻覆盖物寻找标本的必要工具。
2.头灯或手电筒头灯或手电筒是进行夜间采集的重要工具。
许多两栖类在人工光线照射之下并不惊动，蛙类常继续鸣叫。
但是在要接近它们的时候，必须尽量不造成任何声响，否则它们就会很快逃脱。
3.水网网眼大小要适于打捞蝌蚪或有尾类幼体，网底要比网口宽得多，并且从网口到网底要尽可能深些，以防止入网的大青蛙跳出。
4.拦网需要两个人各执网的一端，必须注意动物不能从网底逃脱。
拦网宜于在小河或溪水中使用，采集人需要从上流翻动水底所有石块及其它障碍物，把动物赶入网内。
5.钓竿钓竿类似钓鱼竿，可用以钓捕较大的水生种类，如大形蛙类。
用肉或鱼作饵，偶而也可钓到有尾类幼体。
钓大的个体时，必须用金属引线。
6.环套在长竿顶端连以金属细丝环套，突然套着动物的颈部，并且很快拉紧，有时很容易成功。
7.陷井式箱捉器在陆地上，一般是把玻璃瓶或缸等容器埋在地下，使瓶或缸口和地面相平，容器中放入数寸深的水，防止捕获物跳出。
使用陷井式捕捉器，在雨天夜晚能捕到大量的两栖动吻，但捕捉器必须安放在不致被雨水充满的地方。
使用陷井式捕捉器，每天至少检查一次，把捕获物拿掉。
8.漏斗捕捉器在生殖季节捕捉两栖类的捕捉器可以制成固定在木板上的长方形铁丝笼。
漏斗口为卵圆形，高出木板6厘米。
木板置于浅凹处，使漏斗口下缘和水底相平。
漏斗内口连以软布筒，防止已进入的动物逃逸。
漏斗外口两旁亦可安放用油纸板作成的围障，围障以小木棒固定在水底。
漏斗捕捉器，一般也可用以捕捉水栖两栖动物。
用1.8-3米长的绳把捕捉器连在岸上，使漏斗口对着河岸。
捕捉器内可以不放饵，也可放些肉或鱼作为饵料。
（三）采集的时间和环境
1.采集时间北方地区的3～8月，南方地区的2～9、10月，都有两栖类进行繁殖，尤其是3～7月，进行繁殖的种类最多，是采集的最好时期。
在此时期中，雌、雄成体会集到水域或近水域的场所，相互抱对产卵，此时不仅可采到许多成体，也可采集卵和蝌蚪。
2.采集环境适合采集两栖类的环境，一般是草木繁茂、昆虫滋生、河流、池塘和山溪较多的地方。
在这样的环境中，两栖类的种类和个体数目最多。
（四）采集方法
1.无尾两栖类的采集方法。
对活动能力较弱的种类如大蟾蜍、花背蟾蜍和中国林蛙，可用手直接捕捉；
对水中活动和跳跃能力较强的种类，如黑斑蛙、金线蛙（Ranaplancri）、蝾螈等，可用网捕捉；
有些种类栖息于洞穴，水边或稻田草丛中，如虎纹蛙，可用钓竿进行诱捕。
诱捕时，一手持钓竿，不时抖动钓饵，诱蛙捕食。
蛙类具有吞食后不轻易松口的特点，可以利用这一特点进行捕捉。
无尾两栖类在夜间行动迟缓，尤其在手电筒照射时，往往呆若木鸡，很好捕捉。
但夜间路途难行，采集者如果道路不熟悉，容易落入水中。
因此组织中学生采集两栖类时，应安排在白天进行，以防止发生意外。
2.有尾两栖类的采集方法。
有尾两栖类大多为水栖，而且大多栖居在高山溪流的浅水中，白天多潜伏在枯枝落叶的石块下或石缝中。
可在白天翻动石块寻找。
有些种类生活在山区水塘中，如肥螈、瘰螈等，当水清时，常能从水上看到它们。
这些种类性情温和，游动缓慢，可用手捕捉或用网捕捞。
四、野外记录
写好野外记录是保证标本采集、保存质量的重要工作。
采集工作者必须记住两点：
（1）野外记录对研究工作非常宝贵。
因此必须记录清楚和准确。
（2）野外记录应当包括观察到的所有事实。
因为所记录的结果即使和当前研究课题无关，也可能对将来要作的研究有用。
野外记录册应当是具有硬皮便于携带的本子，每换一个地区应当开始新的一页。
下面是记载的主要项目：
1.日期—记载日、月和年。
2.地址—写出距某个城市的某一万向若千公里的具体数字。
如兰州东南150公里。
3.采集人—所有参加采集的人名一律列出，执笔人列在前面。
4.时间—写出每天几点钟开始以及持续采集多少小时。
5.生境—描述地形、海拔高度和植物群落如落叶森林和开阔草原等。
也记载植物和其它动物的名称以及它们的相对丰富度。
特别重要的是应记载两栖类和爬行类的天敌和它们所吃的动物名称。
如果可能，可以采集一些动植物标本留待以后鉴定。
在现场至少要写出当地的优势植物群，如树、灌木和草以及水面上下的水生植物等。
对常见种尽可能作出一般鉴定，如杨树、怪柳、狼尾草、骆驼蓬和浮萍等。
此外，也应当记录植被覆盖面积的大小。
6.物种记载—应以采到和见到的为限。
对每一个物种要作出数量估计，可分成“很多”、“常见”和“稀少”三个等级，如果能作出更精确的估计更好。
对每一物种所栖息的小生境如池塘边缘和灌木丛中等以及行为、颜色和大小等的变异也应当详细记载。
野外记录册应用铅笔书写，并需在室内重新抄写，以便改正错误。
在长途采集时，还应另外写出标本目录和物种量度的单行材料。
应当携带详细地图和照像机，把进行采集过的地方标记在地图上，在采集地区对物种和，生境进行拍照具有很大价值。
五、标本保存
（一）保存的主要步骤
杀死和固定保存的工作可在室内进行。
1.颜色记录和照像两栖动物死后颜色常会改变。
所有两栖类在福尔马林和酒精中保存一个时期以后都将褪色，因此在杀死这些动物以前，应当把身体各部分的颜色确切的记录下来。
如果可能，还应当进行彩色拍照。
2.杀死
在进行保存以前，先把动物杀死非常重要，因为把动物直接投人保存液中，动物将会因为强烈疼痛而僵硬收缩。
杀死的动物在刚刚死后身体是舒展的，便于进行测量，也便于随心所欲地把它安排在盛有保存液的容器内。
乙醚（Ether）是最好的杀伤药，把少量乙醚注人盛放动物的玻璃瓶中，然后把盖盖紧，在15-30分钟的时间内，动物多半死亡。
如果乙醚的量过少或过早的把动物从瓶中取出，动物就会苏醒。
44-49℃的温水可以杀死两栖类。
把装有动物的布袋整个放人盛有温水的容器中，等动物死后立刻从袋内取出，否则，时间过久动物即保持死时的姿态而不能舒展。
盐酸普鲁卡因（procaineHydrochloride）数片，每片含药0.07克，配成10%水溶液，注入动物体内可以致死。
对两栖类来说，把药液注入体内和把动物投入药液中，可以取得同样效果。
3.测量
测量宜在动物刚被杀死以后进行。
测量单位以毫米计。
应该准备好不同长短的米尺、卷尺和弯角规等测量用具。
（1）无尾两栖类的主要测量部位
体长自吻端至体后端。
头长自吻端至上、下颌关节后缘。
头宽左右关节之间的距离。
吻长自吻端至眼前角。
前臂及手长自肘关节至第三指末端。
后肢长自体后端正中部分至第四趾末端。
胫长胫部两端间的长度。
足长内趾突至第四趾末端。
（2）有尾两栖类的主要测量部位
体长自吻端至尾端头长自吻端至颈褶
头宽左右颈褶间的距离（或头部最宽处）
吻长自吻端至眼前角
尾长自肛孔后缘至尾末端
尾宽尾基部最宽处
4.标签和编号
标签纸应当是吸收墨汁能力很强的优质纸。
亦可由布条或小木牌代替。
用墨汁或软铅笔书写。
不同地区的同一物种应当分组保存，并各有相应记录，记录也应分开。
每次采集均应有标本编号。
每天在同一地点采到的同一物种可以个体编号，也可集体编号，但每个标本都应挂标签。
同组标本常放在同一容器之内，或者用纱布包裹和其它标本共放在一个大的容器中，绝不可把不同的两组标本混在一起。
编号在标本的标签上、编号薄上和野外记录册上必须一致。
编号薄上应有主要记录，记录册上应有测量数据。
在标签纸背面应写上物种的拉丁文名称、雌雄和成幼等，如标签纸较大，也可从野外记录册上摘要记载习性、量度或其它资料。
5.保存剂
通常是把整个个体置于液体保存剂中。
福尔马林（甲醛溶液）是几种保存液中最恰当的一种。
一般出售的福尔马林是含37%甲醛气体的水溶液。
保存标本时要把买到的福尔马林以100%看待，加水配成10%溶液使用。
两栖动物在经过药液体内注射之后，可保存在5%福尔马林中，但必须在24小时后更换一次新液，最后把两栖类保存在3%福尔马林内。
福尔马林具有强烈刺激气味，能够引起某些人产生明显的不适反应。
没有福尔马林，亦可使用酒精，普通所谓的纯酒精实际上是50%乙醇。
70%酒精可作为两栖类的最初保存剂。
在标本放进酒精中之后的前几天，必须一再检查动物身上是否有未被浸泡好的区域。
假如两栖类最初放在95%酒精中，24-48小时后需换入70%酒精中。
假如连酒精也没有，可把标本暂时保存在近于饱和的食盐水中（水l000cc，食盐约80克）。
用酒精或盐水保存的标本应该及早设法包装寄往目的地，在未寄出之前要不断更换新液，防止标本腐烂。
（二）其它有关保存事项
1．注射所有两栖动物除特别小的蛙类和有尾类外，都应当用皮下注射器进行药液注射。
5cc的注射器最适于应用，可进行腹腔注射。
如果没有注射器，可用刀剪在标本上切口，使药液进人体内。
蛙、小鲵、蝾螈在腹中线的一侧作切口。
标本在浸泡之前，还需要用棉花把上下领撑开，以便检查牙齿和口腔中其它构造。
2.固定经过注射的标本可放在浅磁盘或玻璃瓶中，然后加药液浸埋身体。
可以把标本整理成所要求的姿势，例如有尾类摆成直线，大的标本尾部折向后方，蛙类的后肢向前折叠成为自然状态。
3.核查在正常情况下，浸泡的标本24小时后变硬，无柔软或褪色斑块，在核查中若发现斑块，应随时在斑块处作大于斑块的切口
4.贮存经过核查的标本保存在新的10%福尔马林中，注意不使药液在容器内有蒸发的可能。
如果在福尔马林中的贮存时间超过两个星期，需要加人硼砂予以缓冲，防止福尔马林产生的少量酸性物质腐蚀骨骼使标本变软。
在大的博物馆中，只把福尔马林作为临时保存液，两周后换人70%酒精中长期贮存。
6.蝌蚪、幼体和卵的处理
可放入3%福尔马林中保存，也可放人浓度较大的药液中，但标本常出现皱缩。
7.皮肤颜色的保持。
两栖动物的皮肤颜色很不稳定，在福尔马林或酒精中容易褪色或根本消失。
保存蛙类皮肤颜色的方法是把皮肤贴在厚纸板上；
用氯仿把蛙杀死，可以避免出血和褪色；
置已被杀死的蛙腹面向上，沿腹中线从肛门向前剪开皮肤到下领，小心勿剪断皮下组织；
在前肢水平线上把皮肤剪开，切口延至每个前肢的指部；
同样在后肢水平线上把皮肤剪开，切口延至每个后肢的趾部；
轻轻把皮肤和皮下组织分开，肛区的连接需要用剪刀剪断，把剥下的皮肤放在盛水的玻璃盘中，清除所粘附的皮下组织；
移入另一盛清水的玻璃盘中，使它漂浮在水面上，无色面朝下，用适当大小的硬纸板从水下向上轻举，到整个皮肤平铺纸板上为止；
双手执解剖针，纠正各部份的位置，并使所有切缘移向硬纸板周边下方；
用手指或棉花球排除皮肤和硬纸板间所有的气泡；
用厚的吸墨纸覆盖在皮肤有色面上，吸去大部分潮湿，使皮肤无色面的胶质物牢固的贴在硬纸板上；
用湿纱布轻轻擦掉粘附在皮肤上的吸墨纸纤维，放人植物干燥器中，使标本完全千燥。
按照以上步骤制成的蛙皮标本，可以长时间不改变颜色，但需要保存在没有强光照射的地方，并且不直接和空气接触。
（三）活动物的照管
1.成体和幼体
为观察动物的行为、配对、产卵或颜色变化，在杀死保存之前，常常需要使它们生活一个短暂时期。
陆生种类需要一个小水盘和一个供爬行的器具。
水生种类可放进带有水草的水缸中，缸中放一块突出水面的岩石，提供它们爬出水面的机会。
在数天到一周的短时间内，动物不吃东西可以生活，青蛙和蟾蜍喂以活的昆虫，有尾类喂蚯蚓。
2.蝌蚪和有尾类早期幼体
可饲养在浅盘中，最初加入原生活处的水，以后只需加入普通用水即可。
也可加人水生植物。
蝌蚪喂以藻类、水草或嫩菠菜，有尾类幼体喂以生牛肉碎片或蚯蚓小段。
当它们进行变态时，需要在饲养盘中安放突出水面的石头或砖块，使它们有可能爬出水面，否则它们将被淹死。
3.卵
两栖类的卵可放置在盛有池水的容器中。
孵化出的蝌蚪或幼体需要取出放人另一容器中，如果不进行分离，将会造成拥挤使卵子腐坏。
六、标本制作
两栖类大多根据外形和内部骨胳特点进行分类检索。
因此，在采集和测量记录之后，应制作浸制标本和骨胳标本。
现以蛙类为例，说明标本制作过程。
（一）浸制标本制作
1.用具用品
①解剖盘、标本瓶、注射器：
用于盛放标本和向标本注射固定液。
②福尔马林液：
用于固定和保存标本。
2.制作方法步骤。
浸制标本的制作方法比较简单，只需经过固定和保存两个步骤。
①固定。
将已处死的标本放置在解剖盘上，先向腹内注射适量的5～10%福尔马林溶液，再放入盛有5～10%福尔马林的标本瓶中进行固定，固定时应将标本的背部朝上，四肢做成生活时的匍匐状态，并将指、趾伸展好。
固定时间约需数小时至1天左右。
②保存。
将标本放入5%福尔马林液或70%酒精液中浸泡保存。
（二）骨胳标本制作
①解剖刀、解剖剪、镊子：
用于剔除软组织。
②玻璃水槽、解剖盘：
用于制作过程中盛放标本。
③卡片纸、大头针、胶水：
用于对标本进行定形和固定。
④标本台板：
用于放置骨胳标本，用木板制成。
⑤0.5～0.8%氢氧化钠溶液：
用于腐蚀标本上的残存肌肉。
⑥汽油：
用于脱掉标本上的脂肪。
⑦3%过氧化氢：
用于漂白标本。
骨胳标本的制作方法比较复杂，需要经过剔除软组织、腐蚀、脱脂、漂白、整形和装架等步骤。
①剔除软组织。
包括剥皮、去内脏和剔肌肉三部分内容。
剥皮应从腹部开始，用剪刀剖开腹部皮肤，陆续剥向身体各部。
在剥皮过程中，注意不要拉断指骨和趾骨。
皮肤剥净后，再挖掉内脏和眼球，随后进行剔肉。
剔肉时，不要将头骨、肩带和四肢骨的各个关节相连的韧带剔掉，以借助韧带保持各关节的联系。
当肌肉基本剔净后，在颈椎和枕骨之间的缝隙中，向颅腔中插入适当粗细的铅丝，将脑组织破坏，再将铅丝插入椎骨，将脊髓挤压出来。
然后用水将标本冲洗干净。
②腐蚀。
将已剔除软组织的骨胳浸入0.5～0.8%氢氧化钠中，腐蚀残存的软组织。
约1～3天后取出，在清水中进行冲洗。
此时，骨胳上的软组织已被腐蚀干净。
③脱脂。
将经过腐蚀的骨胳，放入汽油中进行脱脂。
脱脂时间约需1～2天。
④漂白。
将已脱脂的骨胳浸泡在3%过氧化氢溶液中，进行漂白。
漂白时间约需1～4天，在漂白期间要经常检查，只要标本已经洁白，就要及时取出。
⑤整形。
将已漂白的骨胳平放在木板或泡沫塑料板上，将躯体和四肢按自然姿态整理好，并用卡片纸条和大头针固定在板上，以防止标本在干燥过程中变形。
在下颌和胸椎骨下面，要用纸团垫起，使其成生活时头部抬起的状态。
还要将两个上肩胛骨附着在第二、三颈椎横突的两侧，待骨胳干燥后，用胶水粘住，使全副骨胳连成一个整体。
⑥装架。
将上述已整形的骨胳，放在标本台板上，用胶水将前肢的腕骨和后肢的蹠骨粘在标本台板上，贴上标签，写明编号、名称、采集时间、采集地点、采集人、制作人，即可保存备用。
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