标本片文档格式.docx
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显微标本片根据制作方法和保存的需要，分为半永久制片、永久制片和临时制片3大类。
半永久制片的封藏介质是半固体，可作暂时性保存;
永久制片的封藏介质是固体，可作长期保存，但其制作费时，多用于特殊目的，如供显微摄影和核对标本等应用;
临时制片的封藏介质是流动性液体，容易损坏，不耐久藏，但制作简单、迅速，适用于一般观察及进行显微化学反应，在中药鉴定工作中应用最多。
在鉴定工作中，由于观察的目的不同，对不同检品采取的制片方法也不同，所以又分切片标本片（包括横切片、纵切片，纵切片又包括切向纵切片和径向纵切片）、解离组织标本片、表面标本片、粉末标本片和磨片5种。
其中横切片多用于观察组织的排列特征;
纵切片多用于观察茎、木类中药的某些细胞组织，如射线的特征;
解离组织片用于观察某些细胞的形状，如纤维、石细胞等;
表面片多用于观察叶、花、全草、果实和种子等的表面特征，一般取某一部分制片;
粉末片多用于观察组织碎片、细胞及后含物或某些中药颗粒的特征;
磨片用于坚硬药材如骨类、贝壳类及矿石的显微特征观察。
各类标本片的制作方法如下：
（一）切片标本片
切片标本片的制作就是将药材切成极薄的横切片或纵切片，一般片厚为7～20μm，将其放在载玻片上，封藏在适宜的介质中，必要时可将切片先进行透化或染色等处理，然后封藏。
按切片的手段不同可分为2大类：
即机器切片法和徒手切片法。
机器切片法按材料的包埋与否主要有滑走切片法、石蜡制片法和火棉胶制片法。
一般多用徒手切片法及滑走切片法，石蜡制片法和火棉胶制片法因操作时间较长，主要用作永久制片。
1.徒手切片法是较常用而且比较简便的基本切片方法，制成的切片可保持细胞和后含物的原有形态，便于进行各种显微化学反应，但需要有较熟练的操作技术。
（1）材料的预处理：
将新鲜或湿润后的干药材洗净，切成适当大小的块或段，一般以宽不超过1cm，长不超过3cm为宜;
较坚硬的药材则以宽为0.5cm为宜，切面应削平。
质地软硬适中的药材可以直接进行切片;
质地坚硬的药材则须先使其软化才能切片。
常用的软化方法是将材料放入吸湿器中软化，一般可采用玻璃质干燥器在其中放入含0.5%苯酚的水而成，使用时将需软化的药材放在小玻璃皿中，然后置于干燥器中的横隔板上，密封，一般的药材在12～24h后均可吸湿软化，以供切片用。
个别药材如软化后仍较硬，则可放入水中浸软或煮软，一般需120℃20min左右。
此外，对由于过于柔软而不便于切片的药材，可将其浸入70%～95%乙醇中，约20min后即可变得较硬;
柔软而薄的叶、花等药材，不便于直接手持切片时，可用某些植物的茎髓（如通草等）剖成两半夹着切;
细小的种子或果实，可试取软木塞1个或白橡皮1块，在一端切一窄缝，将药材嵌入其中切片，如仍不行，则可用树胶将药材粘贴在软木塞一端或取1小方块石蜡用烧红的解剖针在石蜡的一端烫开1个小孔，立即将材料放在孔中，石蜡凝固后即可供切片用。
（2）切片方法：
用左手拇指、食指及中指紧压和抵住材料，材料上端不要超过3～4mm。
右手执刀片，刀口向内并使刀刃与材料的切面平行，移动右臂使刀锋自左前方向右后方斜滑切削，即可得到薄片，注意切片时要保持材料平整，刀口轻轻压住材料，切时要用臂力而不用腕力，左手不动，并在材料和刀片上时时用水（用于坚实的材料）或稀乙醇（用于较柔软或含粘液的材料）使保持湿润，以防止材料干燥收缩和避免切出的薄片粘在刀片上不易取下。
将切得的薄片用毛笔轻轻从刀上拂下，移至装有蒸馏水或稀乙醇的培养皿中，除去过厚的切片及夹持材料即得。
（3）选片：
目选最薄而平整的切片，放在载玻片上，加水或稀乙醇1滴，在低倍镜下观察，判断切片在厚薄、特征的完整性和清洁性等方面是否符合要求。
（4）染色及封藏：
徒手切片一般均不染色，而直接封藏在适宜的试剂中，如水合氯醛液、稀甘油或某种显微化学试剂等。
如要制成半永久性标本片，可用稀甘油洗去水合氯醛液等，然后用溶化的甘油明胶封藏。
若需染色并制成永久标本片，则应选取最好的切片，参照石蜡切片项下的染色及封片方法进行。
2.滑走切片法是利用滑走切片机，将材料夹在上面直接进行切片。
它是一种简单的机械操作，主要用于较坚硬药材的切片。
切片机的主要部件有切片刀、材料推进器及调节切片厚度的机件等。
材料推进器上有一固定材料的夹子，它随切片刀的滑动而升高，其升高的高度由调节切片厚薄的机械部分控制。
一般制成10～20μm厚的薄片。
切片方法：
将处理好的材料（方法同徒手切片法项下所述）固定在推进器上的夹子中，使其高出夹面约0.5cm，在刻度盘上调节好需要切片的厚度，然后在夹刀器上安装切片刀，调整刀锋与材料切面以及刀口与材料纵轴方向所成的2个角度，均应为30°
～45°
。
旋动摇柄，使材料上升至其顶面离刀口0.5～1mm，然后即可切片。
切片时用右手推、拉刀具的握手，使切片刀延着滑槽往返移动，材料会自动地做等距离升高，切片刀每往返1次即可得一均匀的薄片。
切片时，材料和刀口都要保持湿润，每切一片后要用毛笔蘸水或稀乙醇使材料的切面和刀口湿润。
切得的薄片置盛水或稀乙醇的培养皿中。
因滑走切片厚薄均匀而多完整，所以选片只用目选。
染色及封藏均参见徒手切片法项下所述。
3.石蜡制片法石蜡制片法是目前植物性中药重要的、常用的、效果较好的切片方法之一，但制片周期较长是其缺点。
石蜡制片法是借助于石蜡的特性，以其作为材料的填充剂和包埋剂，用石蜡切片机进行切片的制作方法，主要用于柔软和细小的药材切片。
石蜡制片的步骤及操作基本过程如下：
取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→粘片→脱蜡→染色→透明→封藏。
（1）取材：
取材的工作很重要，是整个制片工作成败的关键。
选择的材料要少而精，应具有代表性和完整性，有些药材要区分其切片的部位。
切片的材料选择好后，要用毛笔细心洗净，干燥的材料需用水浸软或用水煮及甘油乙醇等溶液进行软化处理使其恢复原状。
然后将其分割成小块，切块愈小愈好，一般以边长在0.2～1cm为宜，太小易损伤内部组织，太大则会给其他操作带来困难。
一般地说，表面角质化程度强或渗透较困难的宜切得小些;
反之则可稍大。
药材分割的方法和取材的部位须视切片的目的和材料的种类与性质而定。
例如草质茎和根等近似圆柱形的药材，直径在0.2～1cm范围内的，可切成长2～5mm的小段或饼状;
直径在1cm以上的，除按上述方法切段外，可径纵向、切向分为二至更多的等份，取出一份。
叶类药材若叶宽不超过1cm的可切成2～5mm的段，较宽者可分割切取中脉和叶缘部分。
粗大的药材只能取用其小块部分。
切取材料时一般应用锐利刀片，不可来回切制，更不可用剪刀剪取;
较坚硬的木质茎和木质类药材，可用细齿锯锯开，以防损伤组织。
（2）固定：
固定是将切好的材料投入固定剂中。
固定的主要作用是杀死原生质，保持原来微细结构，并凝固和沉淀各种蛋白质，使组织变硬，不致在以后的种种处理中发生变形。
为了使固定液进入组织内，有时需采用抽气装置将材料中的空气抽出去，抽气亦用于脱水、透明等制片过程中。
固定剂的种类很多，须根据材料性质与切片目的来适当地选用。
在中药材制片中，最常用的固定剂为FAA固定剂，又称为标准固定剂，由甲醛、冰乙酸和乙醇组成，它们都有固定作用，其中冰乙酸能使组织膨胀，而乙醇可使组织收缩，因此二者合用可以互相制约其收缩与膨胀作用。
配方中各药品的比例也可根据材料的性质适当改变，例如固定坚硬的木质药材，可增加冰乙酸的用量，而减少甲醛（渗透力较差）的用量。
FAA固定剂性质稳定，又可用于保存材料。
固定剂的用量一般为材料的25～50倍，不可太少，以免被材料中的水分过度稀释。
固定时间视材料而定，一般在12～24h，木质茎类应在7天左右。
在固定材料时，应注意以下问题：
材料投入固定液中若不能立即下沉，其中必定含有空气，应采用间歇抽气法驱除空气，否则固定液难以渗入。
如抽气数次后材料仍不下沉，则以后渗蜡亦难完全，故应将其弃去不用。
干燥药材可不必固定，用水浸软或软化后，即可切成小块进行脱水处理。
若暂时不用，也可浸在固定液中。
（3）冲洗：
经固定的材料，必须洗去内部沉淀物，以利材料的保存和染色。
冲洗剂一般用水或与固定剂浓度相近的乙醇洗涤3～4次，将材料冲洗干净。
（4）脱水：
材料经冲洗后，组织中含大量水分，不能直接进入透明剂和石蜡中，故需脱水。
脱水的目的是完全除去组织内的水分，使透明剂和石蜡能够顺利地渗入组织中，并和细胞壁亲密贴合，也可使材料变硬，便于切片，封藏时形状不变。
常用的脱水剂有乙醇、丙酮、正丁醇、叔丁醇、二氧杂环乙烷等。
现将乙醇和叔丁醇脱水法分述如下：
①乙醇：
脱水用的乙醇浓度须由低到高逐渐增加，以免发生原生质收缩和细胞壁变形的现象。
常用乙醇的浓度梯级为：
50%、60%、70%、80%、95%、100%。
脱水用第一级乙醇的浓度，应按材料的含水量而定。
例如材料是用FAA固定的，而FAA的乙醇含量是50%，冲洗时亦用50%的乙醇，所以可用50%乙醇开始脱水;
若材料经过水浸或水洗，则需用5%乙醇开始脱水，下一级用10%乙醇，以后各级浓度均相差10%;
供组织学研究的坚硬木质药材亦可直接用50%乙醇脱水。
梯度乙醇的用量一般为材料的2～3倍。
材料在50%～95%各级乙醇中的时间为：
柔软材料为1～2h，过于坚硬的材料3～4h;
在100%乙醇中需2次，1次1h，以求脱尽水分。
材料可在70%～95%乙醇中过夜，但在无水乙醇中时间不宜过长，以免材料变脆，难于切片。
脱水可在指管中进行，管口用软木塞塞紧，换液时要防止材料弹出。
用过的乙醇滤过后，可以作低一级的乙醇使用，但浓度在50%以下的乙醇一般不保存。
②叔丁醇：
脱水用的叔丁醇是与水及乙醇的混合液，各级浓度的配法如表（表9-1）。
表9-1混合液各级浓度的配制（mL）
品名
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
Ⅴ
Ⅵ
蒸馏水
乙醇
叔丁醇
40
50
10
30
20
15
35
25
75
100
各级脱水时间为1h，在Ⅱ级中可过夜，在纯叔丁醇中2次，每次2～3h。
脱水后的材料，在叔丁醇和石蜡等量混合液中1～3h，即可移入纯石蜡中浸蜡，不需透明。
脱水是制片中最关键的问题，需特别细心处理。
脱水后的切片进入透明剂时，如产生混浊现象，需退回脱水剂中再行脱水。
（5）透明：
用乙醇脱水后的材料，不能直接渗蜡，应经透明剂除去乙醇，并使材料透明干净，便于进入埋藏剂及封闭剂。
常用的透明剂为二甲苯和氯仿。
此外苯和甲苯、丁香油等也可使用，但易着火。
其中以二甲苯应用较广泛，作用迅速，可与封闭剂混合，但易使组织收缩、变脆。
氯仿不易燃烧，而且不易使组织变脆。
用二甲苯作透明剂时，须配成4种不同浓度的等级，即1/3二甲苯+2/3无水乙醇（或丙酮）、1/2二甲苯+1/2无水乙醇、2/3二甲苯+1/3无水乙醇、纯二甲苯;
用氯仿为透明剂时，可配成3种不同的浓度等级，即：
1/3氯仿+2/3无水乙醇、2/3氯仿+1/3无水乙醇、纯氯仿。
材料经各级透明剂的时间一般为0.5～3h，但经过纯二甲苯或纯氯仿时须换2次，以便除净材料中的乙醇。
如材料尚未透明干净，则须重新透明。
（6）浸蜡：
使石蜡慢慢溶于有材料的透明剂中，最后使石蜡完全代替透明剂而进入组织内的过程称浸蜡或渗蜡。
石蜡充满在全部组织中，并和细胞壁密切贴合，以便承受切片时的压力，并保持切片中各种组织细胞的原来位置。
①石蜡的选择：
切片用的石蜡与切片的成败关系很大，所用的石蜡一般应具备下列条件：
要有适当的硬度和熔点，一般熔点越高则硬度越大。
夏季制片宜采用熔点在55℃～60℃的石蜡;
冬季制片宜采用熔点在45℃～50℃的石蜡。
石蜡中加入蜂蜡或蜂蜡与松香，可使熔点升高，韧性增强;
加入凡士林或液体石蜡，可使熔点降低。
选用的石蜡应质地均匀细腻，不得有结晶或颗粒结构，也不得含有灰尘、水分、挥发性或油性成分，否则须加精制。
购得的石蜡除应测其熔点外，应做浇模试验。
所得蜡块用刀切成薄片时，应成为卷曲的薄片，而不应成为松脆的颗粒，折断面无任何颗粒状态。
将此蜡块保持在30℃～35℃，经24h，不应有气泡或不透明的结晶点出现。
用过的石蜡，经熔化滤过后可以再用。
②石蜡的精制方法：
取石蜡在锅中加热至将冒烟时，改用小火加热30min以上，使水分和挥发性杂质除去。
加热时避免温度过高而致燃烧。
将熔融的石蜡保存在温处，待杂质颗粒下沉，冷却至蜡面开始凝固时，将上部清洁的石蜡倒出，备用。
③石蜡与其他物质的混合剂制法：
石蜡-蜂蜡混合剂，石蜡与蜂蜡的比例一般为5∶1，取二者加热熔化混匀即得。
质地硬的材料可酌量增加蜂蜡的用量，其变化范围1～4;
石蜡-蜂蜡-松香混合剂：
取石蜡、蜂蜡和松香，按5∶1∶1.5的比例，加热熔化后混匀，即得;
石蜡-蜂蜡-橡皮混合剂：
取生橡皮20g至加热已近发烟的石蜡中，混匀，得石蜡橡皮混合物，然后将石蜡、石蜡橡皮混合物和蜂蜡按100∶4～5∶1混合，将上述混合物加热至发烟点，用滤纸保温滤过，冷却即得，其用于脆性材料效果很好。
④浸蜡的方法：
浸蜡时，蜡液浓度必须逐渐增加，使其缓慢地浸入，若蜡液浓度增加过快，可导致浸蜡不彻底，切片发生困难。
一般方法及步骤如下：
低湿浸蜡：
将材料放入1个适当大小的指管中，加入二甲苯至高的1/3，将石蜡块削成小圆锥体，直径较指管略小，长度与管中的二甲苯高度相近，尖端朝下插入指管中，管口用软木塞塞好，放在35℃温箱中，石蜡不熔化，而缓慢地溶解在二甲苯中，向下渗入材料组织内。
当蜡块全部熔解后，倾出1/2蜡液，再插入另1个蜡块，待蜡块不再溶解，而蜡层下方显半透明结晶状时，即表示在此温度石蜡已达饱和点。
此步骤即使时间稍久，组织亦不致受损，所以必要时可延长2～3日。
高温浸蜡：
将指管移入较高温度的温箱中，温度应比石蜡熔点高出1℃～2℃（一般在53℃～55℃）。
此时残余的蜡块当即熔化而逐渐溶解于液体内。
此后每隔3～4h，倾去约1/2的蜡液，而加入等量熔化的石蜡，如此反复加蜡4～5次后，将全部蜡液倾出，加入纯石蜡，2～4h后，再用纯石蜡置换1次，如此反复2～4次后，即可将二甲苯全部去净。
为此须做“钮子”试验，即将指管中的蜡倾出少量于冷水杯中（指管须立即放回温箱中），浇成“钮子”，约硬币大小，待其冷却后，取出观察，应不显油腻样，入口中嚼，不得有二甲苯或其他溶剂的臭味，其质地应均匀一致，无结晶样现象，无杂质颗粒，并试验其切片性能，如均合格，再用纯石蜡置换1次，即可准备包埋。
（7）包埋：
就是在浸蜡后，将熔化的石蜡连同材料一起倾入包埋器中，将材料的位置调整后，迅速冷却，使其凝固成蜡块。
①包埋器：
常用铜模和纸盒2种包埋器。
铜模（图9-3，由2个L形铜板和1个平面铜板组成。
用时，把L形铜板放在平面铜板上，根据需要配成各种大小的长方形柜，里面涂一薄层甘油以免与石蜡粘连。
纸盒用作包埋器也很方便，其制法是按照图9-3中A的虚线折成B和C的形状。
纸盒的大小和深度应根据需要而定，纸盒的宽度一般应比材料宽3～4mm，深度比材料高2～3mm。
②包埋方法：
先将包埋器放在加热台上，保持加热台上的温度比石蜡熔点高1℃～2℃。
将蜡连同材料倒入包埋器中，如石蜡不够，可用指管补加适量熔化的石蜡。
如发现有气泡，可取解剖针1支，在酒精灯上加热后，插入包埋器中，迅速除去石蜡中的气泡，再另换1根热针，插入包埋器中，迅速将材料排列整齐。
排列方式应根据材料大小、性质及目的而定（图9-4）。
蜡块的底面为切面，所以材料的切面应当朝下放。
例如叶子应单个直立在石蜡中，以便制作横切片，也可几个叶子平行排列，中间有适当的距离。
而针状叶或根尖等则可几个排成1束，以便制成的切片上有几个断面，便于比较观察。
较粗大或坚硬的材料同时包埋，则应加大相互间的距离，以便制成蜡块后再分割成几块。
材料排列工作必须迅速完成，如石蜡已开始凝固，则不能再移动材料，否则材料易被损坏。
1
A
B
C
2
图9-3包埋器
1.铜模;
2.纸盒及折叠法
D
E
F
图9-4各种形状的材料在石蜡中的排列位置
A.叶（横切）;
B.小形的茎或其他圆柱形器官（横切）;
C.同B（纵切）;
D、E.树枝的一部分（横切）;
F.大形草质茎的一部分（径向纵切）
待石蜡逐渐冷却，至移动包埋器而不致影响其中材料的位置时，即将包埋器放入冷水盆中，任其漂浮水面。
待蜡面开始凝固时，可将铜模浸入水中，或将纸盒翻转浸入水中，使其迅速冷却（蜡块的迅速冷却极为重要，如慢慢冷却，则石蜡容易析出结晶，而不能切片，补救方法是熔化后重新包埋）。
待蜡块充分冷却硬固后（约30min），即可取出，放在阴凉处吹干。
然后在蜡块下粘纸编号;
如用纸盒包埋，则可在纸盒把手上编号，贮于凉处备用。
（8）切片：
包埋完成后，就可把蜡块粘在蜡座上进行切片。
蜡座一般为边长2cm的立方块。
分硬木制的木质蜡座和金属蜡座2种。
①石蜡块在蜡座上的固定与修正：
先选取要切的蜡块，用刀将蜡块的凹面修正。
任意相对的两面必须互相平行。
修正完毕后，将蜡块放在平面上，有材料的一面向下。
然后取蜡座1个，在需要固定蜡块的一面上，放几块石蜡碎屑，用热的刀烫平，使石蜡熔化而布满蜡座面上，立即翻转，对准蜡块略加压力，蜡块便粘在蜡座上。
再翻转蜡座，在蜡块四周放一些石蜡碎屑，用热刀使它熔化并烫平，使蜡块坚固地粘附在蜡座上，将蜡座连同粘附的蜡块投入冷水中，冷却数分钟后取出，再用刀将蜡块修成整齐的长方形。
②蜡座在切片机上的安装：
将蜡座连同蜡块安装在切片机的蜡座夹中。
装时要注意平正，不可稍有倾斜，蜡块的切面应与切片刀的刀口平行，然后拧紧固定螺丝。
③切片操作：
安装好蜡座并调整好刀面角度和切片厚度（常应根据材料的性质和目的选定，一般为15～20μm，组织紧密的可薄些，组织疏松的应厚些;
观察染色体的结构须切成2～4μm厚的片子，而菌类应切较厚的片子）后，即可慢慢转动切片机的轮子，直至每次切下1片为止。
用毛笔蘸少量二甲苯轻轻擦去刀口两面的蜡片屑，然后再开始正式切片。
旋转速度以无压缩现象并能形成蜡带为宜。
旋转过快，不仅使切片受压缩，而且易损坏机器，所以应该避免。
切片时，为了盛放切出的蜡带，应在切片机前放1个方盘，盘中铺以清洁光滑的纸，切出3～4片时，用毛笔支承蜡带，边切边缓缓移动，使切片连成长条带状。
当蜡带长达20cm左右时，用毛笔将蜡带轻轻挑起，使它和刀口脱离，放在盘的纸上。
待盘中盛有足够的蜡带时，即可停止切片，将盘中的蜡带盖好，防止沾上灰尘。
④切片检查：
切片是否良好，可随时进行检查。
方法是用铜铲割取切片1片，放在载玻片的水滴上，稍加温，使蜡片伸展后，倾斜载玻片使水流去，石蜡切片就紧贴在载玻片上。
用扩大镜、解剖镜或低倍镜观察，这时可看到组织和细胞的轮廓，其中所有的空腔完全被石蜡所填充，如发现有空隙或组织和石蜡分离，就表明渗蜡不彻底。
必要时可加二甲苯1滴，使石蜡溶解，再用高倍镜检查细胞是否有变形及质壁分离的现象。
切片工作结束后，应随时将切片用具一一擦净，收藏好。
切片刀如暂时不用，应涂上一薄层凡士林，以防生锈。
⑤切片中遇到的问题及解决方法
蜡带弯曲切出的蜡带呈弯曲形，可能是如下原因：
蜡块的上下二边不平行，可用刀细心修平;
蜡边的下边不和刀口平行，可调节蜡座夹，使二者平行;
靠近蜡块一边的刀口不够锋利，可将刀向一侧移动，用其锋利部分或换一把刀;
材料在蜡块中位置不定，可用刀修正;
材料的形状不对称，一边厚一边薄，蜡带向薄的一边弯曲，补救方法是将材料较厚的一侧修窄一些。
蜡片卷起：
不成连续的蜡带，可能由于石蜡过于坚硬，可用口在刀片上呵气，使它的温度稍稍增加，或增加室内温度，或在切片机附近放一酒精灯，或将刀放在熔蜡炉旁加温，或试切较薄的片子，或将蜡块浸入35℃～45℃温水中12h以上，使软化后再切片，或用较软的、熔点较低的石蜡重新包埋;
刀口太钝，须换一把刀或重新磨刀，使它锋利;
刀的倾斜度太大，可以重新调整。
切片纵裂或有横走条纹：
可能由于刀口缺口或刀的倾斜度太大，或刀口有灰尘或石蜡碎屑，可磨刀、调整刀的倾斜度或用二甲苯将刀口擦净;
材料中含有坚硬物质，如硅质及某些结晶颗粒等，须设法除去后再行包埋;
包埋时，石蜡分次倒入包埋器中;
以致分层凝固，层间发生裂缝，须重新包埋。
蜡片皱缩或粘成一团：
可能由于刀口钝或刀的倾斜度不够，或因刀口不洁，可磨刀，或调整刀的倾斜度，或清洁刀口;
石蜡太软，可将蜡块投入冷水中冷却，或移至冷室中切片或增加切片厚度，或改用较高熔点的石蜡重新包埋;
如片子皱缩不很强烈，则可在以后步骤中使其展开;
渗蜡不完全，须用二甲苯液去石蜡，然后重新渗蜡和包埋。
材料与蜡片脱离：
由于刀的倾斜度太大或太小，可调节刀的倾斜度;
材料太硬或太粗，可改用火棉胶包埋法;
刀片太薄，可改用较厚的刀切。
蜡片厚薄不匀或时有时无：
由于切片机装置松动，可将蜡座夹旋紧，如仍不能解决，则须修理切片机;
材料太硬，须设法使材料变软。
（9）粘片：
将切好的蜡片粘贴在载玻片上称粘片。
要求粘附牢固，蜡片伸展平整。
要使粘片工作顺利进行，须注意下列几点：
所用载玻片必须绝对清洁;
所用粘合剂必须适合于所切的材料;
蜡片须先加热使充分展开;
须待粘合剂完全干燥后才能进行染色，否则切片容易脱落。
粘片的具体步骤如下：
①载玻片的选择与清洁
选择：
从侧面看无色的为好，显绿色的不好;
边缘光滑的较好，粗糙的不好;
厚薄适中且均匀的较好，过厚的或过薄的不好;
表面有云雾状斑点的，多因受霉菌污染或化学腐蚀所致，此种斑点无法除净，不可用;
表面有划痕或其他伤痕的不宜用。
清洁方法：
载玻片如有油渍或其他物质附着，则妨碍蜡片粘贴，且染色时易脱落。
因此，载玻片不论新旧，用前必须用清洁液（常用的清洁液配法：
取重铬酸钾100g，研碎，溶解在500mL水中，然后量取浓硫酸500mL，分多次，每次少量加入上液中，搅匀，可时时将混合液冷却。
此液须装入带玻璃塞瓶中，可反复应用至变深绿色为止）洗净。
清洁时可将载玻片用自来水冲洗后，沥去多余的水，再放入清洁液中，浸泡30min或过夜，然后把清洁液倒回原瓶，再用自来水冲洗30min，用含几滴氨水的蒸馏水再洗1次，再用70%乙醇浸洗1次或浸泡24h，最后用干净的白布或毛巾擦干。
为了节省清洁液，污渍较多的载玻片可先用洗衣粉洗涤，并用自来水冲洗后，再浸入清洁液中。
盖玻片的清洁法与载玻片同，但处理时须特别小心，以免破碎。
②粘合剂的种类：
常用的粘合剂有2种：
郝氏粘合剂（Hauptisadhesive）和梅氏粘合剂（May-er’sadhesive）。
使用郝氏粘合剂，同时需准备2%～4%的甲醛溶液供漂移切片使用。
梅氏粘合剂的粘合力较郝氏粘合剂为弱，且能多少吸收煤焦油染料。
因此，在制片时如涂抹过多，染色后的片子往往污秽而不美观。
③粘片方法：
首先将带状切片小心移入盛温水（35℃左右）的搪瓷盘中，使其浮在水面，再慢慢地分次加适量热水至蜡带伸展平直时为止，放置待选。
然后左手执载玻片，右手用玻璃棒蘸取粘合剂，加1滴于载玻片上。
随即用右手清洁的小指将粘合剂均匀地涂抹成一薄层，如有多余的粘合剂，可以除去。
再将载玻片放在平台上，不待粘合剂干燥，立即加3%甲醛溶液1滴。
割取适当长度的蜡片，用钢铲
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