中药鉴定学实验指导Word文件下载.docx
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本法适用于纤细的根茎、根、全草、叶、花等质软而细薄的材料。
(2)水煮法:
材料置沸水中煮一段时间,软后取出。
本法适用于软质的根、根茎、茎木、皮类等材料。
2、
切片方法
(1)手持法:
先将材料断面削平,用左手拇指和食指夹住材料下端,用中指或无名指托住,使材料高出拇指和食指,并注意食指应略高于拇指以防切片。
然后用右手平拿刀片,刀口向内,并与材料的断面平行,切时应用臂力以轻微均匀的动作向后拉切,不得断续,更不得来回拉力,切片以薄而透明,组织、细胞形态清晰者为好。
(2)夹持法:
取夹持物切成适当大小,纵向剖开一定深度,将材料夹入按手持拉切,切下的片子放入培养皿中即可。
(3)压切法:
将材料放于切片板上,左手中指及食指轻轻压住材料,右手持刀自左向右或自上而下切削,切片用毛笔挑入培养皿中备用。
此法刀刃易伤,应避免刀刃与板接触。
此法对于细小果实种子类或某些较硬的材料效果比前二法要佳。
3、不染色装片
用毛笔挑取或用镊子轻取透明的薄片放于载玻片中央,直接观察或用水合氯醛透化后加封芷剂盖上盖玻片即可。
4、染色装片
(1)番红染色:
将手切的薄片移入置番红水溶液或酒精中进行染色,番红染色2~24小时,酒精溶液染色1~24小时。
(2)冲洗:
染色后用水或5%酒精冲洗,除去多余的番红色水。
(3)脱水:
用30%、50%、70%、80%不同浓度的酒精依次各浸约5分钟,以逐渐脱除组织细胞内的水分。
如果番红染色是用酒精液,则可自5%酒精开始脱水。
(4)龙胆紫二重染色:
将脱水至80%酒精溶液的切片用龙胆紫酒精溶液染1~5分钟可使纤维素细胞壁呈紫色,如龙胆紫染色适宜即可,用80%酒精浸洗后,用90%及无水酒精(二次)各2分钟以脱去材料中全部水分。
在二重染色后,如紫色太深可用盐酸酒精溶液作褪色剂(100ml)的70%~80%酒精中加1~2滴盐酸放置数刻至紫色适宜为止,用70%~80%酒精洗数次以除去盐酸。
(5)透明:
材料脱水后浸入50%甲苯(即等重的二甲苯与无水乙醇)5~10秒及纯二甲苯10秒使细胞组织透明,便于观察与封芷。
(6)封芷:
将材料移入载玻片上,取加拿大香脂1~2滴于材料上加盖玻片即可长久保存。
(7)标签:
写明材料名称及制作日期等。
(二)表面制片法
表面制片通常属整体封固法的一类,它是将叶的表皮、花冠、果实、种子的外表皮、草质茎的表皮等采取不同的方法取下经过处理而制成的玻片标本。
1、材料的预处理
新鲜材料可用剪刀剪下所需部位,用清水冲洗,处理成适当大小备用。
若干药材叶可先用冷水浸,再用温水浸到能恢复原样即可,若是较硬的材料(果实、种子)还需经过软化处理。
2、方法
(1)撕取法,一般用于表皮易于剥离的表皮制片,取材料分清上、下表皮用刀片在表面轻划一刀或等分折叠后,用镊子在刀痕处或折痕处取表皮,撕得的表皮置载玻片中央,表皮的外表面朝上,除去带绿色部分的表皮,加稀甘油封片即可。
(2)剥取法
(3)解离法
(4)整体透化封固法
(三)操作徒手制片
(四)总结学生操作过程的优缺点
(五)作业写出永久制片的制作全过程徒手切制大黄制片
实验二绘图技巧和方法
【实验器具准备】显微镜、培养皿;
【实验要求】掌握组织结构详图和简图的绘图技巧和描述语言
(1)徒手绘图法:
选择典型的显微标本片和结构,仔细观察各部位的形状、结构及比例关系,用色淡的铅笔(2H或4H),按照显微图象的比例关系画出轮廓草图,经反复对照修改后,再用色深的铅笔(HB或2B)绘出修改图。
(2)组织简图绘制法:
组织简图即用代表符号画成较简明的组织构造图,能清晰地表示出各组织和某些特征排列的位置、分布情况及比例关系,以了解该器官组织构造的全貌。
组织简图各部位表示符号如下。
绘图步骤:
①将组织标本片置于显微镜下观察,用铅笔将图象的各部位轮廓画出。
②按照规定的表示符号绘出各部位的重要特征(如厚壁组织、分泌组织、维管束等);
准确表示组织中各部位的范围、界限及重要特征的所在位置。
③将各部位依次向右方引出直线,标上图注,图下注明各部分名称及放大倍数。
放大倍数=
(3)组织详图绘制法:
将显微镜下观察的组织、细胞及其内含物的真实形态、大小等特征,如实的绘制到画面上的图形,称为组织详图。
绘图步骤同简图绘制法,应注意薄壁组织用单线条表示,厚壁组织用双线条表示。
【注意事项】①在药材预处理时应避免影响欲观察的显微特征。
如观察菊糖、黏液等特征时,不可与水接触,以免特征溶解消失;
观察挥发油、树脂等特征时,则不可与高浓度乙醇或其它有机溶剂接触。
②用水合氯醛试液透化处理时,加热温度不宜过高,以防水合氯醛试液沸腾,将组织中带入气泡。
作业绘制甘草的根的简图
实验三粉末显微绘图技巧
【实验器具准备】显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片等;
稀甘油、甘油醋酸试液、水合氯醛试液
【实验要求】掌握粉末标本片的制作方法及注意事项
适用于药材、饮片及含药材粉末的成方制剂的显微鉴别。
1.粉末制备药材应先干燥,磨或锉成细粉,过4号筛,混匀,装瓶,贴上标签。
制备粉末时,取样要有代表性,如根要切取根头、根中段及根尾等部位,全部磨成粉,不得丢弃渣头;
干燥温度一般不宜超过60℃,以免淀粉粒糊化。
2.制片用解剖针挑取粉末少许,置载玻片中央偏右的位置,滴加适宜的透明剂1~2滴,搅匀,待液体渗入粉末后,用左手食指与拇指夹持盖玻片的边缘,使其左侧与试液左侧接触,再用右手持小镊子或解剖针托住盖玻片的右侧,轻轻下放,使液体逐渐扩延并充满盖玻片下方。
若液体未充满盖玻片,应从空隙相对的边缘滴加液体,以防产生气泡;
若液体过多,用滤纸吸去溢出的液体,最后在载玻片的左端贴上样品标签,即可镜检。
需用水合氯醛试液透化时,滴加试液后,手执载玻片一端或用镊子夹持,保持水平置酒精灯火焰上方约1~2cm处加热,微沸后,离开火焰,再滴加水合氯醛试液,放在小火上继续加热,如此反复操作至粉末呈透明状为止,放冷后滴加稀甘油1~2滴,封片镜检。
3.粉末绘图将粉末标本片置显微镜下观察后,绘出有代表性的细胞、后含物及某些组织碎片特征。
绘图时,主要特征绘在画面的中央部位,次要特征绘在图面的边缘部位。
单个细胞要求完整,组织碎片可绘全部或典型的一部分。
【注意事项】
1.在进行未知粉末装片时,一般先用水、稀甘油或甘油醋酸装片,观察记录后再用水合氯醛冷装或透化装片,最后可滴加其他理化试剂进行显微观察。
2.装片用的液体如易挥发,装片后应立即观察。
用水装片也较易蒸发而干涸,滴加少许甘油可延长保存时间。
3.应注意防止标本片产生气泡,干扰观察。
用水或稀甘油装片时,先加少量乙醇使其润湿,可避免或减少气泡的形成,或反复将盖玻片沿一侧轻抬,亦可使多数气泡逸出;
用水合氯醛试液透化处理时,加热温度不宜过高,以防水合氯醛试液沸腾,使组织中带入气泡;
搅拌时产生的气泡可随时用针将其移出;
菌类药材一般用蒸馏水装片,若用稀甘油装片,因其渗透性较差,粉末易成团并形成大量气泡。
【实验报告】绘山药(或半夏)粉末特征图。
实验四大黄的鉴定
【实验器具准备】显微镜、微量升华装置、紫外分析仪、烘箱、分析天平;
稀甘油、甘油醋酸试液、水合氯醛试液、氢氧化钠试液、甲醇、45%乙醇。
大黄药材
【实验要求】掌握大黄的显微及理化鉴别特征。
掌握大黄的性状鉴别。
1.辨认大黄药材
2.显微鉴别
(1)大黄根茎横切面:
注意观察:
①残存的木栓层。
②韧皮部筛管群明显。
③形成层成环。
④木质部射线,导管非木化,稀疏排列。
⑤髓部宽广,内有红棕色物;
异型维管束散在,形成层成环,木质部位于形成层外方,韧皮部位于形成层内方,射线呈星状射出。
⑥薄壁细胞含草酸钙簇晶,并含多数淀粉粒。
(2)大黄粉末:
黄棕色。
①草酸钙簇晶直径较大,棱角较钝。
②具缘纹孔、网纹、螺纹及环纹导管,非木化。
③淀粉粒甚多,单粒类球形或多角形,直径3~45µ
m,脐点星状,复粒由2~8分粒组成。
3.理化鉴别
(1)取本品粉末少量,进行微量升华,可见菱状针晶或羽状结晶。
(2)取本品粉末0.2g,加甲醇2ml,温浸10min,放冷,取上清液10µ
l,点于滤纸上,以45%乙醇展开,取出,晾干,放置10min,置紫外光灯(365nm)下检视,不得显持久的亮紫色荧光(检查土大黄苷)。
【实验报告】绘大黄根茎横切面简图及粉末特征图;
记录理化实验结果。
实验五川怀牛膝的鉴定
【实验器具准备】显微镜;
稀甘油、水合氯醛试液川牛膝怀牛膝
【实验要求】掌握川牛膝与牛膝的显微鉴别特征;
掌握川牛膝与牛膝的性状鉴别,熟悉川牛膝与牛膝的理化鉴别方法。
1辨认川牛膝和怀牛膝的性状
2显微鉴别
(1)川牛膝横切面:
①中央有正常维管束;
其外侧有异常维管束断续排列成4~11轮同心环,维管束外韧型,无束间形成层,木质部由导管及木纤维组成,强烈木化。
②薄壁细胞含草酸钙砂晶。
(2)牛膝横切面:
注意与川牛膝的区别:
①中央有正常维管束,中心木质部集成2~3群;
异常维管束断续排列成2~4轮,维管束外韧型,束间形成层除最外轮有的明显外,向内各轮均不明显,木质部有导管、木纤维和木薄壁细胞。
【实验报告】绘川牛膝与牛膝横切面简图;
实验六商陆,何首乌的鉴定
【实验器具准备】显微镜商陆何首乌药材
【实验要求】掌握商陆何首乌的组织显微鉴别特征,掌握商陆何首乌的性状鉴别。
明确三生构造和发生部位
1商陆何首乌的性状鉴别
1.商陆根横切面①木栓层为数列木栓细胞。
②皮层较窄。
③异常维管束断续排列成数环,形成层连续成环,每环几十个维管束,维管束外韧型,木质部的木纤维较多,常数个相连或围于导管周围。
④薄壁细胞含草酸钙针晶束,针晶束长40~72μm;
并有少数方晶、簇晶及淀粉粒。
2.何首乌横切面①木栓层为数列细胞,内含棕色物。
②木栓层内方、韧皮部外侧组织中有周韧型异型维管束4~11个,导管稀少。
③次生维管束位于根的中央,形成层成环,
木质部导管较少,周围有管胞及少数木纤维。
薄壁细胞含草酸钙簇晶及淀粉粒。
3.观察三生结构发生部位
【实验报告】绘商陆和何首乌横切面简图(全部简图)
实验七甘草的鉴定
稀甘油、水合氯醛试液、80%硫酸溶液。
【实验要求】掌握甘草的粉末鉴别特征;
熟悉甘草的组织特征。
掌握甘草的性状鉴别。
1.甘草的性状鉴别。
2.显微鉴别
(1)甘草横切面:
①木栓层细胞棕色。
②韧皮部射线宽广,弯曲;
纤维多成束,周围薄壁细胞常含草酸钙方晶。
③木质部导管较多;
木纤维成束,断续排列成放射状。
周围薄壁细胞常含草酸钙方晶。
④根中心无髓;
根茎中心有髓。
(2)甘草粉末:
粉末棕黄色。
①纤维成束,壁厚,周围薄壁细胞常含草酸钙方晶,形成晶纤维。
②具缘纹孔导管较大,稀有网纹导管。
③木栓细胞红棕色,多角形。
3.理化鉴别
(1)本品粉末遇80%硫酸呈黄棕色,渐变橙黄色。
(甘草甜素反应)
【实验报告】绘甘草横切面简图;
绘甘草粉末特征图
实验八黄连的鉴定
稀甘油、甘油醋酸试液、水合氯醛试液、氢氧化钠试液、稀盐酸、含氯石灰、5%没食子酸乙醇溶液、硫酸、乙醇、30%硝酸。
甘草药材
【实验要求】掌握黄连的显微及理化鉴别特征。
掌握甘草的性状辨认。
1甘草的性状辨认
(1)黄连横切面
味连注意观察:
①木栓层细胞。
②皮层中石细胞单个或成群散在。
③中柱鞘纤维成束,或伴有少数石细胞,均显黄色。
④维管束外韧型,环列;
束间形成层不明显;
木质部黄色,均木化,木纤维较发达。
⑤髓部无石细胞。
雅连髓部有石细胞。
云连皮层、中柱鞘及髓部均无石细胞。
(2)味连粉末粉末黄棕色或黄色。
①石细胞黄色,壁厚,壁孔明显。
②中柱鞘纤维黄色,纺锤形或梭形,壁厚。
③木纤维较细长,壁较薄,有稀疏点状纹孔。
④鳞叶表皮细胞,绿黄色或黄棕色,细胞长方形或长多角形,壁微波状弯曲或连珠状增厚。
⑤导管为网纹或孔纹,短节状。
雅连与味连相似,但石细胞较多,金黄色,呈不规则条形或长椭圆形。
3.理化鉴别
(1)根茎断面置紫外光灯(365nm)下观察显金黄色荧光,木质部尤为显著。
(2)取本品粉末约1g,加乙醇10ml,加热至沸腾,放冷,滤过。
取滤液5滴,加稀盐酸1ml与含氯石灰少量,即显樱红色;
另取滤液5滴,加5%没食子酸乙醇溶液2~3滴,蒸干,趁热加硫酸数滴,即显深绿色。
(3)取本品粉末或薄切片置载玻片上,加95%乙醇1~2滴及30%硝酸1滴,加盖玻片,放置片刻,镜检,有黄色针状或针簇状硝酸小檗碱结晶析出。
【实验报告】绘黄连粉末特征图;
实验九天麻的鉴定
【实验时数】1-2学时
稀甘油、甘油醋酸试液、水合氯醛试液、碘试液、45%乙醇、硝酸汞试液天麻药材。
【实验要求】掌握天麻的粉末鉴别特征;
熟悉天麻的组织及理化特征。
掌握天麻性状鉴别
1天麻性状鉴别
天麻横切面:
①表皮有残留,下皮由2~3列切向延长的栓化细胞组成。
②有的皮层细胞中含草酸钙针晶束。
较老块茎皮层与下皮相接处有2~3列椭圆形厚壁细胞,纹孔明显。
③中柱中散列小型周韧维管束;
薄壁细胞亦含草酸钙针晶束。
④髓部细胞类圆形,具纹孔。
(1)取本品粉末1g,加水10ml,浸渍4h,时时振摇,加碘试液2~4滴,显紫红色至酒红色。
【实验报告】绘天麻粉末特征图;
记录理化实验
实验十党参桔梗的鉴别
【实验器具准备】显微镜、刀片、培养皿、毛笔、三角瓶、蒸发皿等;
稀甘油、水合氯醛试液、10%α-萘酚试液、浓硫酸、乙醚、醋酐、硫酸、45%乙醇。
党参桔梗药材。
【实验要求】掌握党参和桔梗的组织特征;
熟悉党参的理化特征。
掌握党参桔梗药材的鉴别
1党参桔梗药材的鉴别
2.党参显微鉴别
横切面:
①木栓细胞外侧有石细胞,单个或成群。
②韧皮部散有淡黄色乳管群,并常与筛管群交互排列。
③木质部导管单个散在或数个相聚,呈放射状排列。
④薄壁细胞含菊糖。
1.取党参粉末0.5g,加水10ml,水浴加热10min,放冷,倾取上清液,置试管中,用力振摇,产生持久性蜂窝状泡沫。
桔梗显微鉴别
4桔梗的横切面①未去外皮者可见木栓细胞多列,黄棕色,细胞中含草酸钙小棱晶。
②皮层窄,常见裂隙。
③韧皮部宽广,乳管群散在,壁略厚,内含细小颗粒状黄棕色物,乳管群常与筛管细胞伴生。
④形成层成环。
⑤木质部导管单个散在或数个相聚,呈放射状排列。
薄壁细胞含菊糖
【实验报告】绘党参桔梗组织结构详图或简图
实验十一当归的鉴别
【实验器具准备】显微镜、培养皿、三角瓶;
稀甘油、水合氯醛试液当归药材
【实验要求】掌握当归的组织特征。
辨别当归药材
1、原药材:
观察当归原药材,注意其形、色、气味。
2、主根横切面①木栓层由4~7列细胞组成。
②皮层窄,为数列切向延长的细胞。
③韧皮部较宽广,散在多数类圆形油室,直径25~160μm,周围的分泌细胞6~9个,近形成层处油室较小。
④形成层呈环状。
⑤木质部射线宽3~5列细胞,导管单个或2~3个成群。
⑥薄壁细胞含淀粉粒。
本品侧根横切面木质部较小;
根头部横切面有髓2)观察当归粉末,找出油室或碎片、纺锤形韧皮薄壁细胞、木栓细胞、导管,辨析其特征,油室多破碎少见。
【实验报告】绘制当归根的组织横切面简图
实验十二黄芪的鉴别
稀甘油、水合氯醛试液黄芪药材
【实验要求】掌握黄芪的组织特征。
辨别黄芪药材,熟悉黄芪的理化特征
1药材:
观察黄芪原药材,总结黄芪原药材的性状五个特点,观察“金井玉栏”的部位。
2.横切面①木栓层细胞数列,栓内层为3~5列厚角细胞,切向延长。
②韧皮部有纤维束,与筛管群交互排列;
近栓内层处有时可见石细胞及纵向管状木栓组织;
韧皮射线外侧常弯曲,有裂隙。
④木质部导管单个散在或2~3个成群,有木纤维束,木射线明显。
⑤薄壁细胞含淀粉粒。
【实验报告】绘制黄芪根的组织横切面简图
实验十三中药的理化鉴别
【实验器具准备】紫外分析仪、水浴锅、柄皿、试管等;
氢氧化钠试液、乙醇、乙醚、硼酸饱和溶液、氨试液、硫酸。
【实验要求】掌握延胡索、板蓝根、苦参、白芷等药材的理化鉴别特征。
1.延胡索取本品切面或粉末,置紫外光灯(365nm)下观察,有亮黄色荧光。
2.板蓝根取本品水煎液,置紫外光灯(365nm)下观察,显蓝色荧光。
3.苦参取本品横切片,加氢氧化钠试液数滴,栓皮即呈橙红色,渐变为血红色,久置不消失。
木质部不呈现颜色反应。
4.白芷取本品粉末0.5g,加水3ml,振摇,滤过。
取滤液2滴,点于滤纸上,置紫外光灯(365nm)下观察,显蓝色荧光。
5.柴胡取本品粉末0.5g,加水10ml,用力振摇,产生持久性泡沫。
6.麦冬取本品薄片,置紫外光灯(365nm)下观察,显浅蓝色荧光。
7.姜黄取本品粉末少量,置滤纸上,滴加乙醇与乙醚各1滴,待干,除去粉末,滤纸染成黄色,加热硼酸饱和溶液1滴,则渐变为橙红色,再加氨试液1滴,则变为蓝黑色,后渐变为褐色,久置,则又变为橙红色。
8.知母取本品粗粉2g,加乙醇10ml,振摇后放置20min,吸取上清液1ml,蒸干,残渣加硫酸1滴,初显黄色,继变红色、紫堇色,最后显棕色。
【实验报告】记录理化实验结果。
实验十四中药的理化鉴别
【实验要求】掌握栀子、木香、黄芪、桔梗等药材的理化鉴别特征。
栀子:
取粉末0.2g,加水5ml,水浴加热3分钟滤过,滤液数滴蒸发皿中蒸干,加硫酸1滴显蓝绿色迅变褐色,继续为紫褐色(季尼平甙)
红花:
取本品1g,加稀乙醇10ml振摇浸渍1小时,倾取上清液,于浸出液中悬挂1滤纸条,5分钟后把滤纸条放入水中,片刻取出滤纸条上部显淡黄色,下部淡红色。
木香:
取木香粉末0.5g,加10ml乙醇,水浴热约1分钟滤过,取滤液1ml置试管中,加浓硫酸0.5ml显浓紫色(脱氢木香内酯的显色反应)
丁香:
1)取粉末0.8g置试管中,加氯仿2ml浸渍约5分钟,吸取氯仿液2~3滴于载玻片,加30%NaOH的氯化钠饱和液1滴加盖玻片,放置片刻镜检,可见针簇状结晶。
2)取萼筒横切片,直加NaOH液,加盖玻片镜检,油室内有细针状丁香酚钠结晶产生。
黄芪:
取粉末3g,加水300ml浸渍过夜,滤液1ml,加0.2%茚三酮2滴,沸水加热5分钟冷后呈紫色(氨基酸、多肽)
柴胡:
粉末0.5g,加水10ml用力振药,产生持久性泡沫。
桔梗:
取粉末1g,加甲醇10ml,水浴回流30分钟,滤液置蒸发皿中蒸干(水浴),加醋酸2ml于水浴加热2分钟,过滤,滤液1ml于试管中,沿管壁加入浓硫酸1ml,接触面呈棕红色环,上层呈蓝色至紫色。
苏木:
取粉末10g置带塞试管中,加水50ml,密塞,反复振药后放置约4小时,滤过,滤液显橘红色,置紫外灯下观察显黄绿色荧光,取滤液加NaOH2滴显猩红色,置紫外灯下观察,退蓝色荧光,再加HCl使成酸性后,溶液变成橙色,紫外灯下观察显黄绿色荧光(巴西苏木素反应)
厚朴:
取粗粉3g,加氯仿30ml回流30分钟滤过,取15ml氯仿提取液蒸去氯仿残渣,加10ml乙醇溶解滤过,取滤液各1ml,分别加5%三氯化铁的甲醇溶液(1:
1)显踪黑色或蓝黑色,加米作试液1滴显棕色沉淀,加间苯三酚的盐酸5滴,可见红色。
黄柏:
1)取粉末1g,加乙醚10ml振摇后,分取倾出液蒸出乙醚残渣,加冰醋酸使溶解,再加浓硫酸1滴放置,溶液显棕紫色。
2)取粉末0.1g,加乙醇10ml振摇数分钟后,滤液加硫酸1ml,沿管壁加氯仿试液,在两接界面处显红色环。
实验十五草乌的鉴别
【实验时数】1学时
稀甘油、水合氯醛试液
【实验要求】掌握草乌的组织特征。
辨别草乌药材
1)观察比较川、草乌原药材的性状异同
2横切面:
①后生皮层为棕色木栓化细胞。
②皮层细胞切向延长;
偶有石细胞,单个散在或数个成群,类长方形、方形