第二章食用菌制种技术五次.docx

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第二章食用菌制种技术五次

第二章食用菌制种技术第一节食用菌菌种概述

教学要点：

培养基配制，消毒灭菌。

目标：

通过学习，使学生学会母种培养基的制备方法、灭菌过程。

参考书标本等。

组织教学:

检查出勤人数及假条（1分钟）

导入新课:

上次理论讲过菌种是食用菌生产的基础，共分三个级别。

（3分钟）

知识、能力培养目标：

了解培养基配制，消毒灭菌。

教学难点：

培养基配制，消毒灭菌。

（2分钟）

新课内容:

（82分钟）

布置作业：

（2分钟）

第二章食用菌制种技术

第一节食用菌菌种概述

一、菌种

食用菌菌种：

经人工培养用于繁殖的菌丝体或孢子。

根据来源、繁殖的代数及生产目的，将菌种分为母种、原种和栽培种三个级别。

也称一级种（母种）、

二级种（原种）、

三级种（栽培种）

1、一级种又称母种、试管种

是将经孢子分离法或组织分离法行到的纯培养物，移接到试管斜面培养基上培养而得到的纯种。

除单孢子分离外，一般获得的母种纯菌丝具有结实性

由于获得母种数量有限。

常将菌丝再次转接到新的斜面培养基上，可获得更多的母种，称为再生母种。

一支母种可转成10多支再生母种。

2、二级种又称原种

由母种转接到装有麦粒等固体培养基的菌种瓶中，经过培养后形成的菌。

原种可采用750ml菌种瓶或500ml罐头瓶作为培养容器。

一支母种可扩繁6-8瓶原种。

原种可用于扩繁成栽培种，也可直接用于生产。

3三级种又称栽培种

是由二级种进一步扩大繁殖而得的菌种。

栽培种的培养基与二级种相似更接近于栽培基质。

为固体培养基质，用聚乙烯塑料袋或玻璃瓶作培养容器。

一瓶原种可繁殖30-50袋栽培种。

4制种程序

培养材料准备—基质配备—分装—灭菌—接种—培养—检验—贮藏。

二、制作菌种常用仪器设备

配料设备、灭菌设备、接种设备、培养设备、菌种保藏设备。

（一）配料设备

切片机（1500kg/h）

粉碎机、搅拌机（100kg/h）

过筛机（200kg/h）

装瓶机（400瓶/h）

装袋机（500袋/h）

装瓶装袋两用机（300个/h）。

（二）灭菌设备

高压灭菌锅、常压灭菌灶、电热干燥箱

1、高压灭菌锅

加热使密闭锅内的水蒸气压力升高，从而使蒸气温度提到100℃以上达到灭菌效果（灭菌效果好）

类型：

手提式、立式、卧式。

手提式、卧式容积小，主要用于一级菌种制作。

立式容积大主要用于二级、三级菌种和栽培瓶袋的制作灭菌。

2常压灭菌灶

在自然压力下产生100℃蒸汽进行灭菌的炉灶，主要用于栽培料灭菌和三级菌种制作。

容积大，一次可装500kg以上栽培料。

3电热干燥箱

通过电热加温干燥灭菌，主要用于容器、培养皿、试管、三角瓶等灭菌。

（三）接种设备

无菌室、超净工作能、接种箱、半自动接种机、接种工具。

1、无菌室

用于大量接种的场所（室内设超净工作能或直接进行接种）。

内外两间，内间大为接种室，外间小为缓冲间，存放工作服、拖鞋、口罩、消毒药品。

门采用拉门，室内顶部设小型排气扇。

安装照明灯，紫外线钉杀菌灯。

2、超净工作台

通过鼓风机吹动空气，穿过二层过滤器，使尘埃和细菌、真菌滤掉，保持台内清洁无杂菌。

3、接种箱

用木材（铝合金）与玻璃制成的一种密闭箱。

有单人和双人两种类型，适于生产。

灭菌采用高锰酸钾与甲醛反应产生甲酸蒸汽。

四、培养设备

恒温箱、培养室

恒温箱：

用于培养一级菌种和少量二级菌种（可调温），容积小。

培养室：

有加温设备的房间，用于大量菌种的培养（三级）。

五、菌种保藏设备

电冰箱、保藏室（真空抽气机）干燥器。

作业：

食用菌常用的菌种有哪些？

第二节培养基制作与消毒灭菌

教学要点：

培养基配制，消毒灭菌。

目标：

通过学习，使学生学会母种培养基的制备方法、灭菌过程。

参考书标本等。

组织教学:

检查出勤人数及假条（1分钟）

导入新课:

上次理论讲过菌种是食用菌生产的基础，共分三个级别。

（3分钟）

知识、能力培养目标：

了解培养基配制，消毒灭菌。

教学难点：

培养基配制，消毒灭菌。

（2分钟）

新课内容:

（82分钟）

布置作业：

（2分钟）

第二节培养基制作与消毒灭菌

培养基：

采用人工方法，按照一定的比例配制各种营养物质，以供食用菌生长繁殖需要的基质。

按基质的物理性状可分为液体、固体、固化三种。

1、液体培养基

它是把食用菌生长发育所需的营养物质按一定的比例加水配制而成的培养基。

为液体状态。

2、固体培养基

以含纤维素、木质素、淀粉等各种碳源物质为主添加适量有机氮、无机盐等，再加入适量的水配制而成的培养基。

优点：

原料来源广泛，价格低廉，配制容易，营养丰富，是食用菌原种和栽培种的主要培养基。

3、固化培养基

它是将配好的营养液加入适量的凝固剂（2%琼脂）而成的固态培养基。

（加热60℃以上为液态，冷却到40℃以下为固态）。

主要用于母种的生产与保藏。

此外按照培养基中的主要原料又可分为：

1、马铃薯培养基

2、棉籽壳培养基

3、玉米芯培养基

4、木屑培养基

5、粪草培养基

6、麦粒培养基

7、枝条培养基等。

一、母种常用培养基

母种培养基一般制成斜面，所以又称斜面培养基，母种又称斜面试管种。

母种培养基常用的基本物质：

马铃薯、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂和维生素B等。

马铃薯：

营养丰富，主要有20%左右的淀粉，2-3%蛋白质，0.2%脂肪，还有多种无机盐、维生素及多种酶。

葡萄糖：

是食用菌菌丝最易吸收利用的碳源，也可用

蔗糖来代替。

琼脂：

是培养基中的凝固剂，常用浓度为1.5%-2%，低于1%不易凝固。

（不提供营养）

磷酸二氢钾：

一方面提供磷元素，另一方面作缓冲剂，防止培养基中PH值的急剧变化。

磷是核酸组成和能量代谢中的重要成分，缺少时C、N不能被充分吸收。

硫酸镁：

提供硫和镁。

常见母培养基：

二、原种和栽培种培养基及制作

母种—原种—栽培种

原种和栽培种的培养基与栽培料基本相同，均为固体培养基。

食用菌类型不同其二级菌种培养基最适材料也不同。

木腐菌类：

多采用木屑为主料，也可采用小麦粒或玉米粒做培养基。

（如平菇、凤尾菇、香菇、木耳猴头等）

草腐菌类：

多用铡碎的作物秸秆或厩肥（如马粪等做草菇的培养基）。

1木屑培养基硬杂木屑78%+麦麸（或米糠）20%+葡萄糖（或蔗糖）1%+石膏（或白灰）1%

2麦粒（玉米粒、高梁粒）培养基

新麦无破损→浸泡（12小时）→水煮（透而不破皮）→冲洗（2-3次）→控水→装瓶（齐肩）→封口→灭菌（1-1.5h1.5kg/cm2）→接种。

3稻草培养基

稻草85%+麦麸15%+水65%

切稻草（1厘米）→水浸→堆制（1-2天）→软化后+15%麦麸→装瓶灭菌→接种。

4粪草培养基

干粪60%+麦草40%+石膏1%+水65%

三、消毒灭菌

1灭菌采用物理或化学等方法杀死物体上一切微生物的方法，（包括芽孢子、孢子、菌等）

2消毒是指能杀死或消除物体上病原微生物的方法。

3防腐指防止抑制微生物的生长繁殖。

灭菌的方法：

1、热力灭菌

2、辐射来灭菌

3、药剂灭菌

4、过滤灭菌

5、渗透灭菌。

热力

灭菌

干热

灭菌

焚烧灭菌

烘烤灭菌

湿热

灭菌

高压蒸汽灭菌

常压蒸汽灭菌

间歇灭菌

煮沸灭菌

巴氏灭菌

辐射

灭菌

紫外辐射

电离辐射

药剂

消毒

重金属、氧化剂、还原剂、表面活性剂

过滤灭菌

渗透灭菌

作业：

菌种常用的培养基？

第三节菌种的培养与质量鉴定

教学要点：

培养基配制，菌种的培养。

目标：

通过学习，使学生学会母种培养基的制备方法、灭菌、菌种的培养与质量鉴定过程。

参考书标本等。

组织教学:

检查出勤人数及假条（1分钟）

导入新课:

上次理论讲过菌种是食用菌生产的基础，共分三个级别。

（3分钟）

知识、能力培养目标：

菌种的培养与质量鉴定。

教学难点：

菌种的培养与质量鉴定。

（2分钟）

新课内容:

（82分钟）

布置作业：

（2分钟）

第三节菌种培养与质量鉴定

一、菌种培养

1、温度

种类

培养温度

种类

培养温度

双孢菇

20-25℃

草菇

32-36℃

平菇

20-28℃

金针菇

22-25℃

香菇

24-27℃

黑木耳

23-24℃

灵芝

25-30℃

培菌期间环境的温度应比菌丝生长最适温度低2-3℃（因菌丝呼吸自身放出热量）

如果只有一间培养室要培养各种品种的菌种时，应控制在22-25℃。

2、光线

大多数食用菌的菌丝体都可以在完全黑暗的条件下正

常生长，散射光对菌的影响不大；光太强对菌丝体有抑制作用。

黑木耳制种时，为了有使子实体形成，培养室平时还需用黑布遮光。

3、培养时间

不同菌种的菌丝生长处于最佳期，所需时间不同，时间过长菌种易衰退，培养基中的养养分分减少，菌丝由强变弱。

二、菌种质量鉴定

（一）母种质量鉴定

1、母种菌丝形态观察

母种菌丝形态是否属于所需培养菌类。

（有锁状联合的菌类应看到锁状联合）。

2、菌丝耐干耐湿试验

若能在略多略少的培养基上正常生长，说明适应性强，可以用做扩大繁殖。

3、菌丝生长速度鉴定

快、齐、密、壮为优，慢、过快、不齐、乱为不良种。

4、耐高温检验

20-25℃1周→35℃24小时→适温下培养。

如恢复快、菌丝不发黄、不倒伏、正常生长为优种。

5、菌丝吃料能力鉴定

吃料快为优，慢为劣。

吃料可扩大繁殖

6、出菇试验

出菇快，子实体大为优，相反为劣。

（母种转管次数：

2-4次，最多不能超过4次，平菇可多转1-2次）

（二）原种和栽培种的质量鉴定（标准）

1、所用母种为转管4-5次以内

2、原种和栽培种，在20℃左右常温下保存3个月以内。

3、原种和栽培种的外观符合要求

（1）菌丝生长健壮，绒状菌丝多，整齐。

（2）菌丝已长满培养基（银耳的菌种在培养基上分化出子实体原基）

（3）菌丝色泽洁白或符合该菌的颜色。

（4）菌种瓶内无黄色汁液渗出。

（5）菌种培养基不能干劲缩。

三、菌种保藏

人为创造环境条件，使优良菌株稳定地保存。

作用：

保持优良菌株原有特性，使其不死亡，不受污染，能长期在生产上应用。

原理：

采用低温、缺氧、干燥等技术，使菌体生长繁殖受到抑制，延缓代谢速度，使生命活动处于休眠状态，以减少变异的发生，从而达到即保持菌种纯正，又延长保藏时间的目的。

保藏方法：

斜面冰箱保藏法、矿油保藏法、滤纸保藏法、自然基质保藏法、载体保藏法、液氮超低温保藏法。

1、斜面冰箱保藏法

将长满菌丝的斜面菌种放在4℃的冰箱中保藏试管棉塞要用硫酸低包扎（用无菌胶塞代替棉塞效果更佳）。

2、矿油保藏法

向长满菌丝的斜面菌种试管内注入石蜡油或液体石蜡油，以隔绝空气，抑制微生物（菌丝）代谢，活动，达到长期保存的目的。

3、滤纸保藏法

用无菌滤纸吸附食用菌孢子进行保藏的方法。

放到无菌培养箱中培养收集孢子，滤纸条放入试管中→干燥器（2-3天）吸水→无菌胶塞封口（可保存2-4年），使用时将纸条放入培养基上。

缺点：

易感染。

作业：

菌种培养的方法？

实验一一级菌种制作

教学要点：

培养基配制，菌种的培养。

目标：

通过学习，使学生学会母种培养基的制备方法、灭菌、菌种的培养与质量鉴定过程。

参考书标本等。

组织教学:

检查出勤人数及假条（1分钟）

导入新课:

上次理论讲过菌种是食用菌生产的基础，共分三个级别。

（3分钟）

知识、能力培养目标：

菌种的培养与质量鉴定。

教学难点：

菌种的培养与质量鉴定。

（2分钟）

新课内容:

（82分钟）

布置作业：

（2分钟）

实验一一级菌种制作

一、教学目的：

通过实验，使学生学会一级菌种培养基的制备方法、接种及一级菌种培养技术。

二、材料与用具

1．用具：

天平、高压锅、试管、漏斗、铝锅、棉花、恒温箱、冰箱、接种针、酒精灯。

2．材料：

马铃薯—200g琼脂—16g蔗糖—20g水—1000ml

三、试验方法

一级菌种制作

配制培养基→灭菌→接种→培养

（一）配制培养基

马铃薯洗净支皮称200g→切片→加水1000ml→煮沸15-30分钟→纱布过滤→放入铝锅→加入琼脂及其它营养

成分，继续加热→琼脂全部溶化→补水至1000ml→调PH值（6.0-6.5）→分装试管，塞棉塞。

（二）灭菌

1．加水适量，确保不干锅

2．装锅：

物品放入，立好→加盖拧紧。

3．加热排气：

水沸腾后排气0.5-1分钟，如果锅内物品过多可加长排气时间。

4．保温保村：

当压力升到1.5C温度121C保持压力30-40分钟，断电。

5．出锅：

当压力降至“0”时，打开排阀，排尽气后，拧开螺旋开盖取出灭菌物品。

6．做斜面：

将试管摆放成25-30度角，培养基成斜面。

7．放入冰箱保存待用。

（三）接种

1．贴标签：

注时菌名，接种日期，接种人姓名。

2．物品放入接种箱：

试管、母种、接种针、酒精灯、火柴。

3．灭菌：

接种葙内用高锰酸钾+甲醛熏蒸0.5小时。

4．接种：

酒精洗耳恭听手→伸入接种箱→点燃酒精灯→火烧接种针试管口→接种→盖棉塞。

（四）培养

接种后的试管按菌种类型及所要求的适宜温度分别放入不同温度的培养箱进行培养。

香菇：

24-27℃

平菇：

24-27℃

金针菇：

23-25℃

猴头：

22-28℃

四、作业：

一级菌种的制作方法？

作业：

实验报告

实验二二级菌种制作

教学要点：

培养基配制，菌种的培养。

目标：

通过学习，使学生学会母种培养基的制备方法、灭菌、菌种的培养与质量鉴定过程。

参考书标本等。

组织教学:

检查出勤人数及假条（1分钟）

导入新课:

上次理论讲过菌种是食用菌生产的基础，共分三个级别。

（3分钟）

知识、能力培养目标：

菌种的培养与质量鉴定。

教学难点：

菌种的培养与质量鉴定。

（2分钟）

新课内容:

（82分钟）

布置作业：

（2分钟）

实验二二级菌种制作

一、教学目的：

通过实验，使学生学会二级菌种培养基的制备方法、接种及二级菌种培养技术。

二、材料与用具

1．用具：

天平、高压锅、试管、漏斗、铝锅、棉花、恒温箱、冰箱、接种针、酒精灯。

2．材料：

小麦粒—87%石膏粉—3%牛粪—10%少许发酵过的稻草

三、试验方法

二级种制作

配制培养基→灭菌→接种→培养

（一）配制培养基

1浸泡：

小麦粒浸泡于水中，使其充分吸水浸16小时后捞出放入清水冲洗沥干。

2煮：

置于锅内，水没过麦粒，加热煮至无干心、无破皮，用清水冲洗，沥去多于水分（不沾手、表面潮湿）

3拌料：

加入石膏和发酵过牛粪（含水量60%）拌匀。

4装瓶：

装瓶量为瓶高的3/5，再加一层发酵过稻草（含水量60%）稍压实→压平清洗瓶口→塞棉塞。

（二）灭菌：

加水适量，确保不干锅

装锅：

物品放入，立好→加盖拧紧。

加热排气：

水沸腾后排气0.5-1分钟，如果锅内物品过多可加长排气时间。

保温保湿：

当压力升到1.5P温度121℃保持压力30-40分钟，断电。

出锅：

当压力降至“0”时，打开排阀，排尽气后，拧开螺旋开盖取出灭菌物品。

做斜面：

将试管摆放成25-30度角，培养基成斜面。

（三）接种

1．贴标签：

注时菌名，接种日期，接种人姓名。

2．物品放入接种箱：

菌种瓶、母种、接种钩、酒精灯、火柴。

3．灭菌：

接种葙内用高锰酸钾+甲醛熏蒸0.5小时。

4．接种：

酒精洗耳恭听手→伸入接种箱→点燃酒精灯→火烧接种钩、试管口、菌种瓶口→接种→盖棉塞。

（四）培养

接种后的试管按菌种类型及所要求的适宜温度分别放入不同温度的培养箱进行培养。

香菇：

24-27℃平菇：

24-27℃金针菇：

23-25℃猴头：

22-28℃

四、二级菌种的制作方法？

作业：

实验报告