液相基本术语及其实际操作Word格式文档下载.docx
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一般通过改变固定相和流动相的性质和组成或降低柱温,可增大选择因子;
(6)增大选择因子的最有效方法是选择合适的固定液。
对于液相色谱,改变流动相的组成,可以有效控制k;
2仪器的操作规程
2.1日立液相设备L-2000/2400操作规程
2.1.1使用环境
环境温度:
4℃—55℃;
相对湿度:
小于95%RH。
2.1.2使用前准备
检查所用溶液(如流动相,乙腈等)是否足够。
检查线路是否连接正常。
2.1.3设备操作方法
具体操作如下:
(1)依次开启泵开关,检测器开关,自动进样器开关,
柱温箱开关;
(2)打开软件,点击“i”按钮,出现联机界面,点击
“Iinitialize”[i'
niʃə.laiz]按钮,当文本框出现文字时,表示联机成功;
(3)检查所用方法是否符合要求。
如不符合,进行设置;
(4)开泵。
检测
(1)建立所需样品盒;
(2)点击检测按钮,选择刚建立的样品盒;
(3)首先进行走基线;
(4)当基线走平时,点击系列样品检测按钮,进行标样,
样品检测;
(5)当标样检测结果出来时,打开结果窗口,选择所需
标样结果,点击“Recalculate['
ri:
'
kæ
lkjuleit]
进行重新计算,然后点击“Calibration”[kæ
li'
breiʃən]进行定标;
(6)当样品结果出来时,打开结果窗口,选择所需样品
结果,点击“Recalculate”['
lkjuleit]进行重新计算,然后点击“ModifyReport”['
mɔdifai,
][ri'
pɔ:
t,]
此单词属于使用最频繁的3000个英文单词,是海词推荐用户应该学会的4星核心词汇。
出现结果报告,即可查看样品具体结果。
2.1.4更换流动相
(1)当流动相快不够时或异常时,及时更换流动相;
(2)先把泵关闭,将流动相入口放入新流动相中;
(3)将泵阀逆时针旋转,进行排气。
大约3分钟后,关闭
排气功能;
(4)排气完毕后,将泵阀顺时针旋转拧紧,开泵;
(5)走基线,当基线走平时,开始做标样,做样。
2.1.5关机
(1)先把泵关闭,将流动相入口更换为超纯水;
(2)将泵阀逆时针旋转,进行排气。
(3)排气完毕后,将泵阀顺时针旋转拧紧,开泵;
(4)用超纯水冲洗管路大约20分钟;
(5)把泵关闭,将超纯水更换为100%甲醇或100%乙腈;
(6)将泵阀逆时针旋转,进行排气。
(7)排气完毕后,将泵阀顺时针旋转拧紧,开泵;
(8)用100%甲醇或100%乙腈冲洗管路大约30分钟;
(9)关泵,关液相软件,关泵开关,检测器开关,自动
进样器开关,柱温箱开关。
2.1.6维护保养、注意事项
(1)进行旬维护检查工作,主要检查事项:
软件是否正常、温度、清洗、进样器、泵单元;
(2)每次测量前进行标样检测,斜率达到99.99%要求才能检测样品,测完样品及时清理。
(3)按要求进行每天2个小时以上的清洗。
2.2Waters高效液相色谱-2695/2489
2.2.1开机自检
(1)打开Alliance[ə'
laiəns]2695和2489的电源开关至ON
(1)的位置,仪器开始进行自检;
(2)仪器将进行大约5分钟的自检过程,待仪器自我测试完毕后,出现以下画面,画面上方的状态显示区会出现“Idle”['
aidl]状态,表示开机测试正常。
2.2.2流动相
有机溶剂要求用色谱纯(进口名牌最好),水或缓冲盐溶液要用超纯水(电阻率:
18.2MΩ),每48小时制备新鲜的水相流动相,尤其是100%含水流动相使用时间不超过两天。
6根管子都在液面以下。
溶剂的位置必须高于溶剂混合阀(GradientProportioningValve)。
['
greidiəntprə'
ʃəniŋvæ
lv]
清洗柱塞密封垫(SealWash)[si:
l][wɔʃ]的溶液:
含5%~10%甲醇的超纯水。
洗针液(NeedleWash)['
ni:
dəl][wɔʃ]:
50%甲醇:
50%水(该比例仅适用于反相试验)。
注:
以上溶剂或溶液均需用0.45μm的膜过滤并超声脱气1分钟,用洁净的玻璃容器盛放,避免污染,同时玻璃容器应用超纯水来清洗而不能用自来水。
2.2.3灌注柱塞密封清洗
清洗操作步骤:
(1)回到Menu['
menju:
]画面,选择Diag;
(2)确定SealWash[si:
l][wɔʃ]的管路放在正确的位置;
(3)按PrimeSealWash[praim][si:
l][wɔʃ],再按Start,直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗废液管,按Halt;
[hɔ:
lt]
(4)按Close。
注意:
密封圈清洗(Sealwash)[si:
l][wɔʃ]溶剂,在反相液相色谱中可使用Water/MeOH[methylalcohol甲醇]=90/10或Water/Acetonitrile[æ
sitəu'
naitril乙腈]=95/5(根据实际需要使用不同溶剂)。
2.2.4灌注针头清洗
操作步骤:
回到Main[mein]的画面,选择Diag,选择Prime[praim]NdlWash。
设定值为30秒,若想要多清洗几次时,请按StartAgain。
清洗溶剂:
50%的甲醇溶液
若上述清洗溶剂无法避免进样时的交叉污染,使用较强的溶剂系统来进行清洗操作。
2.2.5打开真空脱气机
如液相仪管路干,可进行使用,如管路不干则按照以下步骤进行操作:
按“Menu/Status”['
steitəs]键,进入Status
(1)画面;
利用方向键将光标移至“Degasser”[di:
gæ
sə]位置,按Enter;
利用上下键选择模式为ON。
在开启除气装置时,要确认所有溶剂管路都充满溶剂;
若没有溶剂时请执行溶剂的DryPrime[drai][praim]操作。
2.2.6执行干灌注
确定流动相溶剂的管子放在正确的位置,检测器(Detector[di'
tektə])废液管及定量环(SampleLoop[lu:
p])的废液管是否放置于适当的废液容器中。
摇动溶剂瓶内的过滤器(SolventFilter)['
sɔlvənt]['
filtə],防止气泡附着在过滤器的外表面。
将空的针筒插入抽液阀(Prime/Ventvalue)中,以逆时针的方向旋转3圈。
steitəs]键,进入Status
(1)画面,按“DirectFunction”[di'
rekt'
fʌŋkʃən]功能键,选择DryPrime,按Enter。
按下面使用的溶剂开启阀门(例如:
OpenA),然后将针筒向外拉,抽出5~10mL溶剂并完全抽出溶剂管子内的气泡,完成后关闭Prime/Vent阀门。
在“Enteraduration”[dju'
reiʃən]中输入3分钟,按“Continue”键,泵即以3.0mL/min的流速进行清洗(Purge)。
可重复上两个步骤,将所要使用的流动相溶剂DryPrime。
2.2.7执行湿灌注
按“Menu/Status”键,进入Status
(1)画面,利用方向键将光标移至“Composition”[kɔmpə'
ziʃən]字段,将欲WetPrime的溶剂输入100%。
按“DirectFunction”[di'
fʌŋkʃən]功能键,选择WetPrime,按Enter。
WetPrime的原设定值,一般为FlowRate:
7.5mL/min,Time:
3.0min,然后按下“OK”键,泵即开始进行WetPrime操作。
重复上述的步骤直到所有溶剂WetPrime进行完毕。
2.2.8设定流动相平衡色谱柱
按“Menu/Status”键,进入Status
(1)画面,利用方向键将光标移至“Composition”[kɔmpə'
ziʃən]字段,利用仪器面板右侧的数字键设置试验要求的溶剂组成比例,此时会在原溶剂比例表的下方出现新编辑溶剂比例表(NewComposition)。
设定好新的溶剂组成比例后,按“ChangeComp”[tʃeindʒ[kɔmp]功能键(改变溶剂组成比例changecomposition),此设定的溶剂组成比例即为当前的比例。
利用方向键将光标移至“Flow”[fləu]字段,利用仪器面板右侧的数字键设定流速,此时仪器即设定的溶剂组成比例和流速来平衡色谱柱。
特别提示:
对于常规的反相色谱试验至少要用30倍柱体积来平衡,而对于离子对色谱的平衡可能需要多达500柱体积的流动相来平衡。
2.2.9冲洗进样器
溶剂管理系统的前处理(Primethesolventmanagementsystem)要求如下:
(1)改变溶剂;
(2)发现注射针头内有气泡;
(3)每天开机的时候。
冲洗进样器执行步骤:
(1)按“Menu/Status”键,进入Status
(1)画面,在设定溶剂的画面中设定适当的流速与溶剂比例;
(2)按“DirectFunction”[di'
fʌŋkʃən]键,选择PurgeInjector[pə:
dʒ][in'
dʒektə],按Enter;
(3)输入SampleLoop体积清洗的倍数(原定值为6倍),按Enter;
(4)压缩测试(CompressionCheck)请先不需要测试,设定完成后按OK。
2.2.10放入样品盘
打开计算机,运行Empower[im'
pauə]软件,选择存放数据文件的Project,运行RunSamples;
按DevelopMethods[di'
veləp]['
meθəd]按钮,建立方法;
按Monitor['
mɔnitə]按钮,观察基线,待基线平稳,可准备进样。
2.2.11关机
首先关闭检测器电源;
在2695溶剂槽中换上适当的清洗溶剂,清洗系统约60分钟(针对离子对试验,建议50%乙腈:
50%水1mL/min流速冲洗色谱柱2小时以上);
按2695面板Diag键,选择PrimeSealWash,清洗泵头约1分钟;
再选择PrimeNdlWash,清洗进样针1~2次;
按Menu/Status键进入手动控制模式,按DirectFunction[di'
dʒektə],冲洗进样器(针对离子对试验,建议设定50%乙腈:
50%水的溶剂来冲洗进样器);
降低流速至0,待系统压力回零后,关闭2695电源,关闭计算机及显示器电源。
2.3岛津LC-20AT液相色谱仪操作规程
2.3.1准备工作
在开机之前,根据所做样品的方法要求,准备好所用流动相,标样及样品。
流动相抽滤后超声脱气15分钟,标样和样品0.45um膜过滤。
打开LC-20A×
2SETS,CTO-10ASvp,SPD-M20A(或RF-10AXL)电源,待自检通过。
打开SCL-10Avp电源,检查开机屏幕应显示各单元,如果某单元没有显示,则不能控制该单元,需按f2键取消屏幕Fixed标志即可显示并控制该单元。
否则检查通讯设置。
打开计算机电源或重新启动计算机,待正常进入WINXP操作系统。
排空操作:
打开LC-20AT泵排空阀(逆时针180度以上),按Purge键,泵开始排空运行。
检查流动相入口Teflon管路没有气泡后,再按Purge键停止排空。
压力调零:
如果purge时,压力不为零,需要进行压力调零,按LC-20ATvp泵Func键选择CONTROL项,按FUNC键直至屏幕显示***mlZEROADJ项,按Enter键,再按CE键,即完成调零。
然后关紧排空阀(顺时针旋紧)。
在计算机中双击LCSOLUTION图标,进入工作站。
再双击Operation∈Analysis1~4进入实时分析窗口(根据不同的检测器选择)。
在开机画面中,UserID选中Admin,不需输入Password,点击OK(可听到峰鸣一声),在下面操作中A∈B表示在A菜单下选择B,以此类推。
选中□表示在□中打√号。
在左侧助手栏给出了引导顺序操作的图标,自上而下顺序执行即可(可以跳过执行):
(1)Systemconfiguration系统配置(第一次安装或更换检测器时配置,通常跳过不操作);
(2)SystemCheck编辑仪器检查参数:
并且RUN运行检查。
通常不操作(跳过);
(3)点击Dataacquisition进入采集数据编辑方法界面
点击InstrumentParameter进入仪器参数设置界面:
——选中Normal(通用简单)或Advanced(高级详细)项,分别设定Pumps泵参数,Oven柱箱参数,Detecter检测器参数,Controller系统控制器参数,TimeProgram时间程序参数等。
仪器配置不同,控制单元项的数目多少不同;
——Pumps泵参数:
Mode控制方式,Flow流速,B,C,DConc各项浓度,PMax最大压力;
——Oven柱箱参数:
Oven设定温度,TMax最大保护温度;
——Detecter检测器参数:
Cell设定池温。
Wavelength设定波长;
——Controller系统控制器参数;
——Dataacquisition选中AcquisitionTime□后,设置分析时间,等等;
——LCTimeProg时间程序参数:
编辑泵梯度洗脱程序,也可以控制柱箱,检测器等等;
(4)点击Method∈DataAnalysisParameter编辑积分参数:
设置Width峰宽,Slope斜率,MinArea最小峰面积等等。
新建方法推荐使缺省值,待分析完样品后再设置此项参数,得到优化的色谱数据结果后,将参数保存在当前方法中;
(5)保存方法:
点击File∈SaveMethodas如图:
起文件名*****保存后,该方法即作为当前运行的方法;
(6)下载方法:
点击DownLoad键,向仪器传送参数。
2.3.2运行方法
点击如图图标(InstrumentOn/Off系统开/关)系统开始运行,检查各单元参数应与方法设定一致。
等待系统平衡。
一般情况下,由于流动相不同,交换平衡时间不定。
可以观察Detecter检测器吸收变化,如果吸收值稳定不变,即认为接近平衡,可以调零等待,确认不变后,准备进样分析。
可以通过改变衰减或予览基线观察基线变化,待基线平稳(初始化显示时与横轴平行),准备进样操作。
2.3.4进样
分析如下:
(1)单针进样分析:
如图点击SingleStart图标:
出现如下采样对话框;
(2)编辑样品参数:
SampleID样品信息,MethodName方法文件名,DataPath数据存储路径,DataName数据文件名,Vial样品瓶号(无),Tray#架号(无),Injection进样量等;
(3)点击OK后,开始进样操作(★重复单针进样,重复执行第7步骤即可★);
(4)每个样到时间分析结束,根据方法中的积分参数,所有色谱数据会自动进行积分处理。
2.3.5报告予览和打印
⊙点击Top返回上级引导操作栏。
点击PostRunAnalysis进入数据后处理界面:
点击report进入报告界面:
点击reportformat进入格式界面:
调入报告格式文件也可以自己编辑报告格式,然后点击Data打开数据文件,将左侧数据文件拖入右侧报告栏即可。
关于报告格式,可以通过内容选择图标,在报告中确定位置后,添加即可。
右键功能很强大,用户可以参考说明书灵活使用。
选择快捷图标的预览或打印图标执行报告预览或打印。
2.3.6关机
步骤如下:
(1)更换洗液清洗流路系统(如用缓冲液,先用水清洗1小时,再用有机溶剂清洗30分钟以上),最后用有机溶剂封存;
(2)清洗结束后,停止系统运行,在LCSOLUTION工作站中,按Instrumenton/off键即停止所有单元工作;
(3)退出LCSOLUTION(可听到峰鸣一声),再完全退出;
(4)关系统控制器SCL-10Avp电源开关;
(5)关主机SPD-M20A(或RF-10AXL)检测器,LC-20AT泵,CTO-10ASvp柱箱电源开关。
2.3.7清洗流路系统要求
如果使用缓冲液,先用水更换缓冲液,清洗1小时,然后更换甲醇清洗40分钟;
如果使用有机溶剂(水),直接更换甲醇清洗40分钟即可。
2.4安捷伦高效液相色谱操作规程
2.4.1开机
打开计算机,进入WindowsXP(或Windows2000)画面,并运行BootpServer程序。
打开1100/1200LC各模块电源。
待各模块自检完成后,双击Instrument1Online图标,化学工作站自动与1100LC/1200LC。
从“View”菜单中选择“MethodandRuncontrol”画面,单击”View”菜单中的“ShowTopToolbar”,“Showstatustoolbar”,“Systemdiagram”,”Samplingdiagram”,使其命令前有“√”标志,来调用所需的界面。
把流动相放入溶剂瓶中。
打开Purge阀。
单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Setuppump选项,进入泵编辑画面。
设Flow:
5ml/min,单击OK。
单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Pumpcontrol选项,选中On,单击OK,则系统开始Purge,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,切换通道继续Purge,直到所有要用通道无气泡为止。
单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击PumpControl选项,选中Off,单击Ok关泵,关闭Purgevalve。
单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Setuppump选项,进入Pump编辑画面,设Flow:
1.0mL/min。
单击泵下面的瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积,也可输入停泵的体积,单击Ok。
2.4.2关机
关机前,用100%的水冲洗系统20分钟,然后用有机溶剂冲洗系统10分钟(如ACN),然后关泵(适于反相色谱柱,正相色谱柱用适当的溶剂冲洗)。
退出化学工作站,及其它窗口,关闭计算机(用shutdown关)。
关掉Agilent1100/1200电源开关
2.5C8柱修复操作规程
2.5.1目的
为节约检测成本,同时统一操作方法,特制定本作业指导书。
2.5.2适用范围
本标准适用于爱杰尔、天津兰博生产的C8柱修复方法(其它厂家可以尝试使用)。
C8柱使用一段时间后,会出现柱压高、峰变形问题,大部分的原因为C8柱污染,通过对污染C8柱柱头过滤网进行超声清洗,然后再生,解决问题。
2.5.3工具、试剂
2个扳手,1把钝剪刀。
乙腈(色谱纯)、异丙醇(色谱纯)。
2.5.4修复过程
(1)将故障C8柱柱头处拧开
用2个扳手将C8柱两柱头拧开,取下两端柱头。
用钝的剪刀夹住塑料封口,取下塑料封口,过滤网就在封口处。
观察C8柱内填料是否有污染,如有污染,用干净的滤纸轻轻擦掉污染物。
只能擦去表面一层填料,不能太多,否则会损坏柱子。
图1:
C8柱
图2:
C8柱内部塑料封口,内有过滤网
(2)对两端柱头进行超声清洗(或者对另一支旧C8柱的后端柱头进行清洗,并代替此C8柱前端柱头)
准备小烧杯,倒入10%乙腈,然后将第一步取出的两端柱头(包括过滤网)放入烧杯,超声半小时;
然后将10%乙腈更换为100%乙腈超声半小时;
最后将100%乙腈更换为超纯水,超声半小时。
或者将以前用过的旧C8柱的后端柱头卸下,进行清洗,并代替此C8柱的前端柱头。
图3:
对端口,塑料封口,过滤网进行超声清洗
(3)安装柱子
将过滤网放入塑料封口处,安装塑料封口,用扳手拧紧柱子。
(4)连接柱子,进行再生
然后将C8柱装到液相色谱仪,等基线走平后,进标品。
观察峰形、柱压等是否正常,如果正常则可以不进行此步骤,否则进行再生:
(1)用10%乙腈冲洗30分钟,流速为0.6ml/min。
(2)用100%乙腈冲洗2小时。
流速为1.0mlmin。
(3)用100%异丙醇冲洗2小时。
流速为0.5mlmin。
(4)用100%乙腈冲洗2小时。
(5)用10%乙腈冲洗30分钟,流速为0.6ml/min,然后换上流动相,然后走流动相,等基线走平后,进标品。
(5)验证修复效果
验证方法
(1)观察柱压,柱压正常。
(2)观察标品出峰情况,峰形良好。
(3)进行回收率验证,回收率达到85%-105%。
通过以上方面,说明修复成功,此C8柱可以继续进行使用。
(6)注意事项
拆装C8柱注意事项
清洗手,防止污染柱子内部。
拆装柱子时,防止柱头部螺纹变形。