液相使用维护大全Word文档下载推荐.docx

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三微量注射器的使用及注意事项

1微量注射器是易碎器械，使用时应多加小心，不用时要洗净放入合内，不要随便玩弄，来回空抽，否则会严重磨损，损坏气密性，降低准确度。

2微量注射器在使用前后都须用丙酮等溶剂清洗。

3对10-100微升的注射器，如遇针尖堵塞，宜用直径为0.1mm的细钢丝耐心穿通,不能用火烧的方法。

4硅橡胶垫在几十次进样后，容易漏气，需及时更换。

5用微量注射器取液体试样，应先用少量试样洗涤多次，再慢慢抽入试样，并稍多于需要量。

如内有气泡则将针头朝上，使气泡上升排出，再将过量的试样排出，用泸纸吸去针尖外所沾试样。

注意切勿使针头内的试样流失。

6取好样后应立即进样，进样时，注射器应与进样口垂直，针尖刺穿硅橡胶垫圈，插到底后迅速注入试样，完成后立即拔出注射器，整个动作应进行得稳当，连贯，迅速。

针尖在进样器中的位置，插入速度，停留时间和拔出速度等都会影响进样的重复性，操作时应注意。

四热导池检测器的使用及注意事项

1开启热导电源前，必须先通载气，实验结束时，把桥电流调到最小值，再关闭热导电源，最后关闭载气。

2稳压阀，针形阀的调节须缓慢进行。

稳压阀不工作时，必须放松调节手柄。

针形阀不工作时，应将阀门处于“开”的状态。

3各室升温要缓慢，防止超温。

4更换汽化室密封垫片时，应将热导电源关闭。

若流量计浮子突然下落到底，也应首先关闭该电源。

5桥电流不得超过允许值。

五氢火焰检测器的使用及注意事项

1通氢气后，待管道中残余气体排出后，应及时点火，并保证火焰是点着的。

2使用FID时，离子室外罩须罩住，以保证良好的屏蔽和防止空气侵入。

如果离子室积木，可将端盖取下，待离子室温度较高时再盖上。

工作状态下，取下检测器罩盖，不能触及极化极，以防触电。

3离子室温度应大于100℃，待层析室温度稳定后，再点火，否则离子室易积水，影响电极绝缘而使基线不稳。

液相色谱仪的使用和维护注意事项

一、泵的使用和维护

1、防止固体微粒进入泵内。

因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞杆、密封环、缸体和单向阀。

泵的入口都应连接砂滤棒，输液棒的滤器经常清洗或更换。

2、流动相不应含有任何腐蚀性物质。

例如氯仿、丙酮、二氯甲烷等，这些溶剂将会Peek树脂部件变脆；

还有含有卤离子的流动相或能产生卤离子的流动相，如果使用了，分析结束后，应立即用去离子水清洗整个管路，因卤离子会腐蚀不锈钢部件或管路。

流动相含有缓冲盐不应停泵保留在泵内时间过长，由于蒸发甚至由于溶液的净置就可能析出晶体。

3、泵工作时要注意流动相不要被用完，否则空泵运转会加快磨损柱塞杆和密封圈。

输液泵的压力不要太高，否则会使密封圈变形，降低密封圈使用寿命。

4、在使用双泵过程中，如果不是梯度洗脱，尽量先混合。

如果一个是有机溶剂，一个是含盐溶液，在用双泵的时候，有可能会析出晶体。

5、在使用缓冲盐作流动相实验结束之前和结束后，都要用含10％甲醇水溶液冲洗管路，不能用纯水冲洗，因纯水会对柱子造成损坏。

进样阀要用适宜的溶剂进行清洗。

二、色谱柱的使用和维护

1、避免压力和温度的急剧变化以及机械震动。

在进样的时候，进样阀扳手不能转动太慢，更不能停留在中间，如停留在中间，泵内压力剧增，这时再转动到进样位置时，过高的压力会损坏色谱柱。

如出现机械震动（掉在地上）则会改变填料的充填状态。

2、在使用色谱柱过程中，不应直接从有机溶剂到水，反之，也不要从水直接改变到有机溶剂。

3、色谱柱一般不能反冲，除非生产者指明。

4、冲洗色谱柱时，每种溶剂至少冲洗50ml。

5、装在机子上的色谱柱，应每隔4～5天冲洗15分钟，可以避免长菌，保护色谱柱。

6、PH的调节尽量在2～9之间

7、保存色谱柱时，柱接头要拧紧。

三、输液泵产生故障及排除方法

1、没有流动相流出，又无压力显示。

原因可能是泵内有大量气体，这时打开排液阀，使泵在较大流量下运转，将气体排出，也可用一个针筒在泵出口处帮助抽出气体。

另一个原因使密封圈损坏。

2、压力和流量不稳。

原因①可能有气泡；

②单向阀污染，可卸下单向阀，浸入异丙醇内超声清洗；

③沙滤棒内有杂质或微生物堵塞，可将沙滤棒浸入流动相中超声清洗，也可将滤头放入4mol/l硝酸溶液中，迅速除去微生物。

也可能是盐堵塞，可放入水中清洗；

④在线过滤器堵塞⑤进样阀损坏；

⑥密封圈性能不好。

3、压力过高。

①管路堵塞；

②保护柱堵塞；

③检测池堵塞，发生情况立即停泵，否则会损坏流通池。

四、与检测器有关的故障及其排除

1、流通池内有气泡。

如果有气泡连续不断通过检测池，将其噪音增大。

如有较大气泡，则会在基线上出现许多线状“峰”，可加大流量排出气体。

如果检测池有停留的气泡，可采用突然增大流量的方法排除气体（不连接色谱柱）。

2、检测池被污染。

检测池被污染了，可能产生噪音，或基线漂移，可以使用适当溶剂清洗，如果污染严重，就可以用1mol/l硝酸溶液、水和新鲜溶剂进行清洗。

3、光源灯出现故障。

检测器的光远灯不能满足正常样品分析时，可能产生严重噪音污染，基线漂移，出现异常峰，甚至基线不回零。

4、出现倒峰。

如果流动相有紫外吸收的杂质，使用紫外检测器时，就会产生倒峰，必须用高纯度的溶剂作为流动相。

检测器的极性接反了，也会出现倒峰。

液相色谱仪色谱柱使用及维护

每天用足够的时间来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"

补偿"

，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！

------一定得做！

新的色谱柱在使用之前应该在您自己的

液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。

并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。

卡套柱的安装（不加预柱）1．将卡套架套入柱芯

2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夹套（见左图）

3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片

4．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧

5．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端

6．连接到

液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；

若为不锈钢接头应使用专用扳手

注意：

使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。

不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。

卡套柱的安装（加预柱）

1．将卡套架套入柱芯

2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯（见左图）

4．将"

子弹头"

预柱放入卡套片内

5．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧

6．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端

7．连接到

若为不锈钢接头应使用专用扳手

更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片（同时可以修补色谱柱）

在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前，应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗，而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。

1．将修补工具中的2套入柱芯的顶端

2．将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中，并顺时针方向旋转到旋紧

3．一手握柱芯，另一只手轻轻地向外拉3，取出柱芯顶端的滤网

4．用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料

5．将新的填料用甲醇润湿，然后填入挖去的部位，压平

6．照（左图）装上新的玻璃棉滤网，并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端

7．柱芯顶端套上2，然后参照（左图）将滤网放入

8．压紧，然后取下2，再用4将滤网的边缘压平

平衡色谱柱　反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。

请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。

由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；

如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"

过渡"

。

硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。

如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡

如何平衡色谱柱？

平衡过程中，将流速缓慢地提高

用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡）

色谱柱的再生　　进行色谱柱再生时，应使用一个谦价的泵，我们建议最好不使用您的高效

液相色谱仪上的泵。

表1　建议用来冲洗的溶剂体积

色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积

125-41.6ml30ml

250-43.2ml60ml

250-10-20ml400ml

请根据下表选择您的再生方法：

极性固定相（如Si，NH2，DIOL基色谱填料）的再生：

正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水

非极性固定相（如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等）的再生：

水→乙腈→氯仿（或异丙醇）→乙腈→水

0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱

在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。

如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。

色谱柱的维护

1．使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度）

2．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围

3．避免流动相组成及极性的剧烈变化

4．流动相使用前必须经脱气和过滤处理

5．如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存大乙腈中

6．压力升高是需要更换预柱的信号

高效液相色谱仪的几个使用问题

色谱柱中的流动相会排干吗？

不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：

不慎未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。

如此情况是否会损坏色谱柱？

泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了？

色谱柱还能使用吗？

事实上，如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。

即使泵中充满了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。

因为泵只能输送液体，而不能输送空气。

相比之下，另一个更可能发生的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。

同样，整个色谱柱干涸的情况不太容易发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉所有溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。

即使色谱柱真的变干了，也不一定就不可救药了。

可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂（如经氦气脱气的甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。

较低的表面张力有助于浸润填料表面；

已脱气的溶剂应该能够溶解并去除滞留在填料中的气体。

色谱柱大约需要（以1mL/min的流速）冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。

2.使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接头需要注意什么问题？

如果经常需要改变流路或更换不同品牌的色谱柱，使用PEEK材料制成的管路和接头会非常方便。

PEEK管路容易连接；

PEEK接头不仅无需工具，手拧即可固定，而且容易调节锥箍之外的管路长度，方便与不同品牌或规格的色谱柱相连接。

使用此类材料的管路需要注意的是：

PEEK对卤代烷烃和四氢呋喃的兼容性不好。

虽然未观察到上述溶剂溶解PEEK材料的明显迹象，但PEEK遇到上述溶剂会变脆。

另一个需要考虑的因素是压力限。

不锈钢管可耐受6000psi的压力，但PEEK管只能耐受近4000psi（但多数HPLC应用系统压力不会超过3000psi）。

使用PEEK接头时则无需担心接头耐溶剂性能，因为接头几乎或很少与溶剂直接接触。

但手拧固定的PEEK接头压力限低于不锈钢管，因而压力太高时，可能会使接头在管路上滑动而产生死体积或漏液。

3.如何预防液相泵的故障

要保持泵的良好操作性能，必须维护系统的清洁，保证溶剂和试剂的质量，对流动相进行过滤和脱气。

下面列出预防泵故障的几项措施：

1）、用高质量试剂和HPLC级溶剂；

2）、过滤流动相和溶剂；

3）、脱气；

4）、每天开始使用时放空排气，工作结束后从泵中洗去缓冲液；

5）、不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中；

6）、定期更换垫圈；

7）、需要时加润滑油；

8）、查阅有关泵操作手册中的其它建议。

处于良好操作状态的泵，应该是：

色谱图上的基线平稳；

保留时间的重复性好；

在等度洗脱时压力波动小于2%；

梯度洗脱时压力变化应是缓慢和平稳的。

为了使故障发生后尽快排除，平时应常备密封、单向阀（入口与出口）、泵头装置、各式接头、保险丝等部件，以及更换工具。

色谱常见问题问答

■ 

问：

用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在?

如何解决?

答：

关于漂移问题：

1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定 

2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题1、流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

3、流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合

色质联用中毛细柱的选择应注意什么问题?

1、柱效要高2、热稳定性好3、化学惰性强具体选择应注意：

1、柱极性。

根据分析样品选择不同极性的柱子进行分析2、柱子内径。

内径大小决定柱容量3、液膜厚度。

分析样品温度一不一样，对膜厚有不同要求，温度高液膜要厚，温度低液膜要薄4、柱长度。

柱越长，柱效越高，分离效果越好，但也存在吸附问题，柱子过长，分析时间长，因此要根据样品考虑柱子长度5、外涂层（柱体）的选择6、另外还有仪器型号、分析对象等因素问：

液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?

答：

1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子

从那些方面可以简单判别毛细管柱子的热稳定性好坏?

1、分配容量（或容量因子）K，好的柱子在高温运行后，分配容量K不应有明显的下降，否则，说明柱子的热稳定性不好。

2、理论塔板数n，热稳定性好的柱子经受高温后，理论塔板数应基本保持恒定3、柱子的极性。

热稳定性好的柱子，高温前后极性变化不大，具体表现为保留指数I值没有大的变化。

4、噪声。

热稳定性好的柱子在高温下使用后，噪声不能增加.5、柱子的去活层，毛细管柱子涂固定液前内部一般要用去活性试剂去活以增加惰性。

质量好的毛细管柱子高温后，去活层不应该变化，表现在对强极性样品或酸碱性样品的吸附性不能增加。

为什么进样器内的玻璃衬套会对色谱行为造成影响?

进样器内的玻璃衬套主要有下列作用：

1、提供一个温度均匀的汽化室，防止局部过热。

2、玻璃的惰性不如不锈钢好，减少了在汽化期间样品分解的可能性。

3、易于拆换清洗，以保持清洁的汽化室表面，一些痕量非挥发性组分会逐渐积累残存于汽化室，高温下会慢慢分解，使基流增加，噪声增大，通过清洗玻璃衬套可以消除这种影响。

4、可根据需要选择管壁厚度及内径适宜的玻璃衬套，以改变汽化室的体积，而不用更换整个进样加热块。

从以上几个方面可以知道玻璃衬套对色谱行为造成影响的原因。

毛细管色谱分流进样时，非线性分流的主要原因是什么?

1、进样器温度太低，样品汽化不完全，发生分级分流。

2、进样器温度太高，某些组分可能发生热分解，也有的样品可能发生催化分解，或样品部分地被吸附在进样器内表面上。

3、在分流点以前样品没有混合均匀或混合不充分。

4、系统的进样垫，柱接头等地方漏气。

HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法

1、样品量不足：

解决办法为增加样品量2、样品未从柱子中流出：

可根据样品的化学性质改变流动相或柱子3、样品与检测器不匹配：

根据样品化学性质调整波长或改换检测器4、检测器衰减太多：

调整衰减即可。

5、检测器时间常数太大：

解决办法为降低时间参数6、检测器池窗污染：

解决办法为清洗池窗。

7、检测池中有气泡：

解决办法为排气。

8、记录仪测压范围不当：

调整电压范围即可。

9、流动相流量不合适：

调整流速即可。

10、检测器与记录仪超出校正曲线：

解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。

问：

做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在?

原因可能有：

1、泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理；

2、比例阀失效，更换比例阀即可。

3、泵密封垫损坏，更换密封垫即可。

4、溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法；

5、系统检漏，找出漏点，密封即可。

6、梯度洗脱，这时压力波动是正常的。

做PGS／MS分析时，如何防止焦油状污染物进入毛细柱?

聚合物，尤其是一些含氮、硫及卤素的高分子裂解时，常有焦油状物质产生。

为防止这种焦油状物质进入毛细柱造成污染而使柱性能下降，可采用保护预柱，即在裂解器与毛细柱之间接一填充预柱，通过控制预柱温度而使焦油状物质滞留在预柱内，预注可置于GC气化室内，这样既容易控制温度，又减少系统的死体积，当然，预柱填料需经常更换。

我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么?

这是因为被分析物可能具有形成氢健的能力。

尽管过去几年来，填料的制造技术有了极大的提高，但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓度不同。

正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。

因此，同一被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。

在流动相中加入少量竞争物，如三乙基胺（TEA），将会使硅醇基的成键能力饱和，从而保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。

我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么?

柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。

其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。

1、拆去保护柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；

2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查。

3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动性）。

这时，如果柱压仍不下降，再检查；

4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明你的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。

若柱压还高，请与厂商联系。

一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。

高温毛细柱的使用寿命一般为多长?

毛细柱寿命除决定于柱子本身的性能外，在很大程度上取决于使用情况，比如使用温度、样品状态，进样量等，如果在其使用温度范围内，样品干净，色谱柱不被污染的情况下，柱子寿命一般在2—3年之间。

如毛细管柱被污染，柱效和分辨率降低，有何方法使它恢复?

是否可通过老化来解决?

根据柱污染程度可采取不同的方法来解决，如果污染不严重，污染物沸点不是太高，可通过老化来解决，但老化温度不可超过柱子的最高使用温度，且一般要较长时间（8—30小时），如果污染较严重，或通过老化仍不能使柱性能恢复，那就必须采用溶剂清洗，通常是用5倍柱容积的溶剂（如正戊烷，二氯甲烷等）通过色谱柱。

当然，清洗溶剂用的越多，对柱性能的损坏越大，清洗完后，在通载气老化一定时间，如果柱性能恢复，便可继续使用。

必须指出：

只有交联柱才能清洗，对于非交联柱，清洗柱会彻底失效，因为固定液被洗掉了，至于清洗用溶剂的选择，可参考说明书。

气相色谱如何安装调试

`色谱仪的安装

1．对色谱仪分析室的要求

（1）分析室周围不得有强磁场，易燃及强腐蚀性气体。

（2）室内环境温度应在5~35度范围内，湿度小于等于85%（相对湿度），且室内应保持空气流通。

有条件的厂最好安装空调。

（3）准备好能承受整套仪器，宽高适中，便于操作的工作平台。

一般工厂以水泥平台较佳（高0.6~0.8米），平台不能紧靠墙，应离墙0.5~1.0米，便于接线及检修用。

（4）供仪器使用的动力线路容量应在3KVA左右，而且仪器使用电源应尽可能不与大功率耗电量设备或经常大幅度变化的用电设备公用一条线。

电源必须接地良好，一般在潮湿地面（或食盐溶液灌注）钉入长约0.5~1.0米的铁棒（丝），然后将电源接地点与之相连，总之要求接地电阻小于10欧姆即可。

（注：

建议电源和外