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宫颈上皮内瘤
The ExpressionandValueofp16INK4Aandbcl2inCervicalIntraepithelialNeoplasiaandCervicalSquamousCarcinoma
Abstract:
ObjectiveTostudytheexpressionandvalueofp16INK4Aandbcl2inCINandcervicalsquamous 39casesofCIN,24cervicalinvasivesquamouscarcinomaand20normalcervicaltissueswerestainedforp16INK4Aandbcl2byimmunohistochemistrymethod.Resultsp16INK4Aimmunoreactivitywasabsentinallnormalcervicaltissues,itspositiverateinCINⅠwasverylowtoo,butp16INK4AexpressedalmostinallofCINⅡ/Ⅲandinvasivecarcinoma.Bcl2immunoreactivityinnormalcervicaltissueswasonlyseenincellsofbasallayer.ItspositiverateinCINⅢandⅠ~Ⅱstageinvasivecarcinomawere%%respectively, which positivecellswerediffuseanditsstainingintensitywashigherthaninnormalcervicaltissues.ItspositiverateinⅢ~Ⅳstageinvasivecarcinomawasstrikingdecreased,whichpositivecellswerefocal.Conclusionp16INK4AoverexpressionmaybeseenasamarkerofCINⅡ/Ⅲandinvasivecarcinomawhichisusefulinpathologicaldiagnosis.
Keywords:
p16INK4Aprotn;
bcl2protn;
Cervicalsquamouscarcinoma;
CIN
0引言
绝大多数宫颈鳞癌由宫颈上皮内瘤 而来,及时、正确诊断和治疗CIN,特别是CINⅡ/Ⅲ,是降低宫颈鳞癌发病率和死亡率的有效措施。
对高级别CIN和典型的宫颈鳞癌不难做出正确的病理诊断,但如何准确鉴别CINⅠ和CINⅡ却存在着一定的困难,鳞状上皮化生与高级别CIN从形态上也有一定的相似性,有时也容易出现误判。
因此,寻求特异性分子标记物是客观、准确诊断CIN所必需。
研究表明p16INK4A特异性地表达于高级别CIN和宫颈鳞癌,并能间接地抑制bcl2表达,从而诱导宫颈癌的发生[13]。
本研究对正常宫颈、各级CIN和浸润性鳞癌组织进行了p16INK4A和bcl2免疫组化染色,以探讨p16INK4A和bcl2在宫颈鳞状上皮的表达状态及其意义。
1材料和方法
材料
收集三峡大学第二临床院病理科近10年宫颈手术或活检标本83例,其中,正常宫颈20例,CIN39例,浸润性宫颈鳞癌24例。
术前均未进行针对肿瘤的特殊治疗。
福尔马林固定,石蜡包埋,病理医师确诊。
浸润性宫颈鳞癌按1995年FIGO标准分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期。
试剂与方法
采用免疫组化SP法,即用型鼠抗人p16INK4A单抗、鼠抗人bcl2单抗及免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。
用已知染色阳性的宫颈组织切片作阳性对照,PBS代替一抗作阴性对照。
操作步骤严格按照试剂盒说明进行,DAB显色,苏木精复染,中性树胶封固。
结果判断
p16INK4A定位于细胞质和细胞核,bcl2定位于细胞质,以光镜下出现棕黄色颗粒为阳性染色。
结合阳性细胞数目和分布范围进行结果判定。
p16INK4A判定标准为:
观察5个高倍视野,阳性细胞数少于观察细胞总数的10%为阴性表达;
超过观察细胞总数的10%但局限于上皮下1/3层为阳性表达;
超过观察细胞总数的10%并分布范围超过上皮下1/3层为强阳性表达。
bcl2判定标准为:
超过观察细胞总数的10%为阳性表达。
学处理采用χ2检验。
2结果
p16INK4A在正常宫颈鳞状上皮不表达,13例CINⅠ仅有2例局灶表达,所有的CINⅡ/Ⅲ均表达p16INK4A,24例浸润癌仅1例无p16INK4A表达。
CINⅢ和浸润癌阳性细胞均呈弥漫分布。
正常宫颈鳞状上皮基底细胞层都表达bcl2,而基底细胞层以外的鳞状上皮都不表达bcl2。
CINⅠ/Ⅱbcl2仍只表达于基底细胞层。
CINⅢ和Ⅰ~Ⅱ期浸润癌bcl2阳性表达率高而阳性细胞弥漫分布。
Ⅲ~Ⅳ期浸润癌bcl2阳性表达率下降而阳性细胞局灶分布,见表1。
表1宫颈组织p16INK4A和bcl2表达与临床病理因素的关系
3讨论
在科技迅猛发展的今天,病理诊断仍然是疾病诊断的金标准,发挥着指导治疗和判断预后的作用。
但是,病理诊断在很大程度上依赖于病理医生的阅片。
因此,经常出现病理医生之间诊断意见不一致的现象。
虽然病理医生对CIN和宫颈鳞癌的组织学特征很熟悉,但病理诊断的不一致率仍然很高。
Klaes等发现CINⅡ病理诊断一致率仅为35%,非典型增生以外的宫颈病变病理诊断一致率仅为3%。
可见,为了准确对宫颈组织切片和细胞涂片进行病理诊断,病理者必须寻找有效而客观的诊断指标。
肿瘤抑制基因p16INK4A编码蛋白是细胞周期素依赖激酶4抑制剂,与细胞周期蛋白D1竞争性地结合于CDK4,抑制细胞增殖。
多种肿瘤的发生与p16INK4A突变、丢失或甲基化有关,但宫颈非典型增生和宫颈鳞癌却以p16INK4A过表达为特征。
Klaes等 研究结果表明几乎100%的高级别CIN和浸润癌都表现为p16INK4A免疫组化染色强阳性,而其他的宫颈鳞状上皮则不能检测到p16INK4A,即p16INK4A免疫组化染色有助于在切片上分辨出非典型增生的细胞和癌细胞。
Murphy等也发现p16INK4A特异性表达于CINⅢ和宫颈浸润癌的胞质。
Kalof等研究证明p16INK4A免疫组化染色强度与CIN程度相关,虽然CINⅠ也可呈现p16INK4A阳性结果,但2/3层以上上皮弥漫阳性着色的结果几乎全部出现在CINⅡ/Ⅲ病例。
本研究也取得了相似的结果,正常鳞状上皮不表达p16INK4A,而CINⅡ/Ⅲ和浸润性鳞癌几乎都表达p16INK4A,并且阳性细胞均为弥漫分布。
说明p16INK4A异常过表达特异性地出现在高级别CIN和浸润性宫颈鳞癌。
因此,用免疫组化方法检测p16INK4A表达状态有助于诊断高级别CIN和宫颈鳞癌,特别有助于辨认微小CIN病灶及早期浸润癌,使CIN和宫颈鳞癌的病理诊断更加客观,避免对高级别CIN和微小浸润癌的漏诊,避免将良性宫颈病变误诊为宫颈鳞癌。
在上对怀疑有CIN或宫颈鳞癌者进行p16INK4A免疫组化检测有助于及时诊断高级别CIN和宫颈鳞癌病人,以免延误治疗。
p16INK4A表达状态不仅与CIN程度呈正相关,与高危型人乳头瘤病毒感染也呈正相关。
Kalof等发现100%CINⅡ/Ⅲ都可检测到与宿主DNA整合的HRHPV信号,而CINⅠ其整合率仅为%,HRHPV整合信号阳性的CIN组织p16INK4A染色强度显着增高。
Murphy等也证实p16INK4A表达强度与HRHPV感染密切相关。
Guimaraes等对65例低级别CIN进行研究,发现进展到高级别CIN者,p16INK4A过表达,并与HPV16/18检出之间显着相关,而维持于低级别CIN者p16INK4A表达状态与HPV16/18检出之间并无此相关性,说明HPV16/18感染可导致宿主细胞高表达p16INK4A,并使病变进一步演进。
关于HRHPV感染促使p16INK4A高表达的机制,可能是HRHPV序列整合到宿主细胞DNA,导致病毒E7蛋白过表达,而过表达的E7蛋白可削弱抑癌基因Rb功能,使细胞周期失调,并促进p16INK4A过表达。
bcl2蛋白为凋亡抑制基因bcl2表达产物,可抑制细胞凋亡,促进肿瘤发生。
不同的恶性肿瘤,其表达状态不同。
文献报道宫颈鳞癌bcl2阳性表达率从17%~54%不等。
多数研究[710]表明CINⅢbcl2阳性表达率明显高于CINⅠ/Ⅱ和浸润癌,而正常宫颈鳞状上皮阳性细胞仅限于基底细胞层[9,11]。
本研究结果显示正常宫颈和CINⅠ/Ⅱbcl2阳性表达均限于基底细胞层,而CINⅢbcl2阳性细胞范围扩大,基本与非典型增生范围一致,阳性表达率高达%,即bcl2在CINⅢ的表达状态与CINⅠ/Ⅱ有显着性差异。
5例Ⅰ期浸润性鳞癌有4例表达bcl2,阳性细胞弥漫分布,而Ⅲ~Ⅳ期浸润癌bcl2阳性表达率降至%且癌细胞局灶阳性。
可见,bcl2表达状态对筛选高级别CIN有一定的参考价值,但诊断浸润性鳞癌时,其参考价值不大。
bcl2表达于正常鳞状上皮基底层,可能与基底细胞分裂增生活跃有关。
CINⅢ和Ⅰ期浸润性鳞癌bcl2阳性细胞增多,阳性程度增强,导致恶性细胞抗凋亡能力增强,增大了病变进一步 的可能性。
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