弓形虫风疹病毒巨细胞病毒单纯疱疹病毒抗体与G型免疫球蛋白抗体亲合力检测试剂技术审查指导原则Word文档格式.docx
《弓形虫风疹病毒巨细胞病毒单纯疱疹病毒抗体与G型免疫球蛋白抗体亲合力检测试剂技术审查指导原则Word文档格式.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《弓形虫风疹病毒巨细胞病毒单纯疱疹病毒抗体与G型免疫球蛋白抗体亲合力检测试剂技术审查指导原则Word文档格式.docx（18页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
本类试剂尚不用作产前筛查。
本指导原则适用于进行首次注册申报和相关许可事项变更的产品。
二、注册申报资料要求
（一）综述资料
综述资料主要包括产品临床适用症背景情况、预期用途、产品描述、有关生物安全性的说明、研究结果的总结评价以及同类产品上市情况介绍等内容，其中同类产品上市情况介绍部分应着重从方法学及临床适用范围等方面写明拟申报产品与目前市场上已获批准的同类产品之间的主要区别。
综述资料是注册申报资料的重要组成之一，其内容应符合《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》（以下简称《办法》）和《体外诊断试剂注册申报资料基本要求》（国食药监械〔2007〕609号）的相关要求，另外，建议申请人对以下几方面内容进行着重介绍：
1.特定病原体的生物学特性，包括形态与结构、抵抗力、感染过程等。
2.特定病原体感染的传播途径、潜伏期、不同人群感染的临床症状、流行病学以及易感人群的说明。
3.ToRCH特异性抗体及特异性IgG抗体亲合力动力学。
（二）产品说明书
说明书承载了产品预期用途、标本采集及处理、实验方法、检测结果解释以及注意事项等重要信息，是指导实验室工作人员正确操作、临床医生针对检验结果给出合理医学解释的重要依据，因此，产品说明书是体外诊断试剂注册申报最重要的文件之一。
产品说明书的格式应符合《体外诊断试剂说明书编写指导原则》的要求，境外试剂的中文说明书除格式要求外，其内容应尽量保持与原文说明书的一致性，翻译力求准确且符合中文表达习惯。
产品说明书的相应内容均应与申请人提交的注册申报资料中的相关研究结果保持一致，如某些内容引用自参考文献，则应以规范格式对此内容进行标注，并单独注明文献的相关信息。
结合《体外诊断试剂说明书编写指导原则》的要求，下面对ToRCH抗体和IgG抗体亲合力检测试剂说明书的重点内容进行详细说明，以指导注册申报人员更合理地完成说明书编制。
1．【预期用途】应至少包括以下几部分内容：
1.1试剂盒用于体外定性和/或半定量和/或定量，检测人血清和/或血浆样本中xx的特异性IgG或IgM抗体。
用于ToRCH病原体感染的辅助诊断及免疫状态的评估。
1.2试剂盒用于体外定性检测人体血清和/或血浆样本中xx的特异性IgG亲合力。
作为ToRCH抗体检测的一种补充，用于辅助判断感染时间，排除近期原发性感染。
1.3简单介绍病原体的特征，如特定病原体的生物学特征、流行病学、潜伏期、易感人群、不同人群感染后的临床表现等临床背景相关的信息介绍；
适用人群的介绍，如具有何种症状/体征的患者、相关的密切接触者、相关疾病流行情况、地域要求等。
1.4人群中ToRCH特异性抗体的阳性率、ToRCH特异性抗体的产生、持续时间、临床提示作用及与ToRCH核酸和抗体亲合力等其他检测指标的关联。
1.5ToRCH感染的临床或实验室诊断方法介绍。
1.6明确说明ToRCH特异性IgM抗体检测不得用于无症状人群的产前筛查；
不得将本试剂的检测结果单独作为终止妊娠的依据。
1.7特异性IgG抗体的亲合力检测试剂还应介绍亲合力动力学，亲合力高低与感染时间的关系，并明确不得将本试剂IgG抗体的低亲合力结果单独作为近期急性感染判断的依据。
1.8关于预期用途的几点考虑：
1.8.1ToRCH抗体检测试剂作为病原体抗体检测试剂，目前的临床意义仅限于抗体阴阳性及IgG抗体亲合力高低的判断和病原体特异性IgG抗体滴度变化趋势的观察。
1.8.2定量检测试剂可溯源至国家或国际标准品如WHO标准品等标准品。
鉴于现在国际标准品的情况和临床需求，建议ToRCHIgM检测试剂的预期用途定义为定性检测。
1.8.3如申报产品声称可用于疫苗免疫效果的评判，则必须以定量试剂盒的形式进行申报。
1.8.4抗体亲合力检测项目的确定，应建立在明确的临床意义和技术可行性基础上。
2.【主要组成成份】
2.1说明试剂盒包含组份的名称、数量、比例或浓度等信息；
质控品、校准品，应明确具体基质成份，由于可能含有人源组份，应提供灭活方法及无传染性确认的方法等。
另外，校准品应明确溯源性，质控品应提交靶值单。
2.2对检测中使用的抗原及抗体的信息进行简单介绍，包括抗原的性质（如重组抗原、纯化的天然抗原、病毒感染细胞的裂解物等）、所用病毒株或重组抗原的表达载体、抗体的动物源性、抗体的性质（单克隆或多克隆）。
2.3试剂盒中不包含但对该项检测必须的组份，企业应列出相关试剂的名称、货号及其他相关信息。
3.【储存条件及有效期】
详细介绍试剂盒的效期稳定性、开封稳定性、运输稳定性等信息。
4.【适用机型】
对于采用酶联免疫吸附法的检测试剂应明确适用酶标仪的波长要求，其他方法学检测试剂应明确具体的适用机型型号。
5.【样本要求】重点明确以下内容：
5.1样本采集前的要求：
如采集时间、采集顺序等，是否受临床症状、用药情况等因素的影响。
5.2样本采集：
说明采集方法及样本类型，如有血浆样本，应注明对抗凝剂的要求。
5.3干扰物的影响：
明确脂血、溶血、黄疸血等常见干扰物对实验结果是否产生影响，明确可接受的最大干扰物浓度。
明确生物污染、纤维蛋白等是否影响检测。
5.4样本处理及保存：
样本处理方法、保存条件（如冷藏、冷冻等）及不同保存条件下的保存时限和运输条件等。
冷藏、冷冻样本检测前是否需要恢复室温，冷冻样本的冻融次数限制。
经热处理样本是否可用、对储存样本的添加剂要求等。
5.5对于ToRCH病原体IgM抗体检测试剂，如果检测系统含有某种IgG抗体的去除技术（IgG吸附剂），如抗人IgG抗体等，则应包括IgG吸附剂使用相关的注意事项。
例如：
经IgG吸附剂处理的样本不能用于IgG类抗体的检测；
在检测IgM类抗体的同时，检测处理过的混合物中的IgG类抗体，以证实对IgG和类风湿因子（RF）等去除的有效性。
5.6对于IgG抗体亲合力检测试剂应明确适用的特异性IgG抗体阳性样本的浓度范围或信号值范围。
6.【检验方法】详细说明试验操作的各个步骤：
6.1实验环境：
检测试剂及样本的复温要求及相关注意事项。
冻存样本在复融后应经过充分的混匀再行检测。
6.2试剂配制方法、注意事项，试剂开封后使用方法及注意事项等。
6.3高浓度样本稀释的方法及注意事项。
6.4试验条件：
操作步骤、温度、时间、仪器波长以及试验过程中的注意事项等。
6.5定标（如适用）：
标准曲线的制定，对需要进行重新定标情况的说明及对定标周期的建议。
6.6质量控制：
操作步骤，质控结果的要求（试验有效性的判断），质控结果不符合要求的处理方式。
如果质控品和病人样本的使用方法不同，生产商应注明必要的指导和解释。
建议在质控品结果解释环节注明以下字样：
“如果质控结果与预期不符，实验室不应出具检测报告”。
7.【检验结果的解释】
详细描述检测结果的判定标准或计算方法。
对阴阳性及血清转换或亲合力高低临床意义的说明，对后续试验的建议。
例：
对于巨细胞病毒IgG抗体检测灰区样本，建议另外进行巨细胞病毒IgM抗体检测或于2周后进行重复检测；
对于IgG抗体亲合力灰区样本，应于2周后进行重复检测。
对于半定量和定量的特异性IgG抗体检测试剂，还应明确抗体滴度变化的意义。
由于ToRCHIgM假阳性结果可能造成不良后果，建议提示临床医生对所有ToRCHIgM阳性结果应结合临床病史及其他的检测结果综合判断，不得作为ToRCH急性感染诊断的唯一依据。
对于ToRCHIgG定量检测试剂，由于抗体的检测结果与检测方法及量值的溯源性相关，不同检测系统间的结果可能不一致。
建议企业给予相关提示。
对于IgG抗体亲合力检测试剂，还应明确指出应配合相应的ToRCHIgG和IgM抗体检测试剂结果进行分析。
应提示：
临床医生检测的低亲合力结果不得作为近期急性感染判断的依据。
8.【检验方法局限性】
综合产品的预期用途、临床背景、检测方法及适用范围等信息，对可能出现的局限性进行相关说明，主要包括以下描述，请申请人选择适用的条款在产品说明书中予以阐述。
8.1本产品检测结果仅供临床参考，不应作为临床诊治的唯一依据，对患者的临床诊断应结合其症状/体征、病史、流行病学、其他实验室检查（如病原学检测）等信息综合考虑。
8.2感染初期，ToRCH特异性抗体未产生或低于检测限，会导致阴性结果，如怀疑有病原体感染，应提示患者在一段时间内复查，如2周以上，抽取第二份样本，并在与第一份样本同条件下检测，以确定是否有初次感染的血清转化或ToRCH特异性IgM或IgG抗体明显升高。
（企业应注明第一份样本的保存条件，并提交相应的支持资料）
8.3ToRCH特异性IgG阴性，可能出现于疾病急性感染的早期，阴性结果应结合临床症状或病原接触情况，并结合其他诊断检测方法加以解释。
8.4对于采用间接法的ToRCHIgM抗体检测试剂，高滴度ToRCH特异性IgG抗体会与特异性IgM抗体竞争抗原结合部位，会使检测的敏感性降低，特异性IgM抗体结果可能会出现假性低值或阴性结果。
8.5由于孕妇ToRCHIgM抗体的实验室检查存在较高的假阳性风险，不能可靠地鉴定胎儿患病的风险，故不建议对无症状孕妇的ToRCHIgM抗体进行筛查。
8.6免疫功能受损或接受免疫抑制治疗的患者，如人类免疫缺陷病毒（HIV）感染患者或器官移植后接受免疫抑制治疗的患者，其抗体及抗体亲合力检测的参考价值有限，可能会导致错误的医学解释。
8.7在近几个月内接受过输血或其他血液制品治疗的人群，对其阳性检测结果的分析应慎重。
8.8部分ToRCH（如风疹病毒）特异性IgM抗体不仅出现于初次感染，当二次感染和复发感染时也可能出现。
个别个体的ToRCH特异性IgM抗体,在初次感染较长时间后仍能检出，因此对特异性IgM抗体阳性在判断初次感染时间的解释中应慎重。
8.9当处于低流行率地区的无症状人群或已接种过特定ToRCH疫苗的个体检出ToRCHIgM阳性结果时，应警惕可能出现的假阳性结果。
同时建议临床医生结合其症状/体征、病史、流行病学、其他实验室检查（如IgG抗体亲合力和病原学检测）进行判断。
建议对申报试剂临床研究中的病例人群特征进行说明，并对适用人群的年龄、地域等特征进行明示。
8.10人血清中的异嗜性抗体可能与试剂中的免疫球蛋白结合干扰试验结果，对于经常接触动物或动物血清制品的人群，应警惕可能出现的异常干扰结果。
8.11接受过小鼠单克隆抗体治疗的患者样本中，可能含有人抗小鼠抗体（humananti-mouseantibodies,HAMA）。
对于试剂盒组成成份中含有小鼠源性抗体的检测试剂，若待测样本中含有HAMA，会影响检测结果的准确性。
8.12体内存在的高浓度的链霉亲合素（亲合素）抗体和发光标志物抗体会影响检测结果。
8.13由于ToRCHIgG抗体亲合力成熟过程存在个体差异，个别个体在初次感染较长时间后仍呈现ToRCHIgG抗体低亲合力，因此不得将本试剂IgG抗体的低亲合力结果单独作为近期急性感染判断的依据。
9.【产品性能指标】详述以下性能指标：
9.1对相应国家参考品（如有）检测的符合情况。
9.2最低检测限：
说明试剂的最低检测浓度或滴度，简单介绍最低检测限的确定方法。
9.3企业内部阳性和阴性参考品符合率，简单介绍阳性参考品的来源、浓度梯度、阴性参考品的组成、来源以及浓度梯度设置等信息。
9.4精密度：
精密度参考品的组份、浓度及评价标准。
9.5分析特异性
9.5.1交叉反应：
对易产生交叉反应的其他病原体的高水平抗体、高浓度ToRCH特异性IgG抗体等的验证情况。
9.5.2干扰物质：
样本中常见干扰物质对检测结果的影响，如溶血、脂血、黄疸等干扰因子研究（结果应量化表示，禁用轻度、严重等模糊表述），有关高浓度总IgM和总IgG抗体、抗核抗体、类风湿因子、系统性红斑狼疮患者血等的干扰验证。
9.6钩状（HOOK）效应：
对高浓度ToRCH特异性抗体钩状效应的验证情况。
9.7对比试验研究（如有）：
简要介绍对比试剂（方法）的信息、所采用的统计学方法及统计分析结果。
9.8抗体滴度变化（适用于半定量和/或定量检测试剂）和诊断灵敏度：
介绍血清转换盘的来源，将检测结果以图或表的形式列出。
9.9稀释线性（适用于半定量和/或定量检测试剂）：
简要介绍评价方法，将评价结果以表格的形式明示。
9.10检测范围（适用于半定量和/或定量检测试剂）：
简要介绍检测范围确定的方法及超出检测范围样本的处理方法。
10.【注意事项】应至少包括以下内容：
10.1有关试剂盒内人源组份（如有）生物安全性的警告。
如：
试剂盒内对照品（质控品）或其他可能含有人源物质的组份，虽已经通过了乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）、人类免疫缺陷病毒1/2型抗体（HIV1/2-Ab）、丙型肝炎病毒抗体（HCV-Ab）等项目的检测，但截至目前，没有任何一项检测可以确保绝对安全，故仍应将这些组份作为潜在传染源对待。
10.2有关实验操作、样本保存及处理等其他注意事项。
（三）拟定产品标准及编制说明
拟定产品标准应符合《办法》和《体外诊断试剂注册申报资料基本要求》的相关规定。
另外，对于国产试剂，应参考《中国生物制品规程》（2000年版），将拟申报产品的主要原材料、生产工艺及半成品检定等内容作为附录附于标准正文后，并在正文的“产品分类”项中引出该附录内容。
ToRCH抗体定性检测试剂的注册检测应主要包括以下性能指标：
物理性状、阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、精密度、最低检测限（分析灵敏度）等。
半定量和/或定量抗体检测试剂除上述性能指标外，还应包含线性和准确性指标。
阳性参考品主要考察对不同滴度情况下的检测符合性。
阴性参考品则是对分析特异性（交叉反应）的验证，应主要包括易发生交叉反应的其他病原体特异性抗体和常见干扰物质的假阳性情况的考核。
ToRCHIgG抗体亲合力检测试剂，应包含符合率及精密度等要求。
如果拟申报试剂已有相应的国家/行业标准发布，则企业标准的要求不得低于上述标准要求。
（四）注册检测
根据《办法》要求，首次申请注册的第三类产品应该在国家食品药品监督管理总局认可的、具有相应承检范围的医疗器械检测机构进行连续三个生产批次样品的注册检测。
对于已经有国家参考品的项目，在注册检测时应采用相应的国家参考品进行,对于目前尚无国家参考品的项目，生产企业应自行建立稳定的质控体系并提供相应的内部参考品。
（五）主要原材料研究资料
1．试剂盒所用病原体抗原的制备、筛选、纯化以及鉴定等详细试验资料，主要包括以下两方面：
1.1企业自制抗原
如为天然抗原，则应对病原体毒株选择、病原体培养、抗原提取及纯化、鉴定等实验过程予以详述；
如为重组抗原，则应提交有关特定基因选择、基因序列、质粒转化、抗原表达及抗原纯化、鉴定等详细内容。
1.2企业外购抗原，则应详述抗原的名称及生物学来源，外购方名称，提交外购方出具的抗原性能指标及检验证书，详述申请人对该抗原技术指标的要求以及申请人确定该抗原作为主要原材料的依据。
供货商应相对固定，不得随意更换。
2．试剂盒所用抗体的制备、筛选、纯化以及鉴定等详细试验资料，主要包括以下两方面：
2.1企业自制抗体
如使用天然抗原作为免疫原则应明确该天然抗原的来源；
如使用重组抗原或其他人工合成抗原作为免疫原，应提供相应的核酸组分及重组抗原的序列信息。
申请人对所选抗体的技术指标要求（如外观、纯度、蛋白浓度、效价等），确定该抗体作为主要原材料的依据。
2.2企业外购抗体，应详述抗体的名称及生物学来源，外购方名称，提交外购方出具的抗体性能指标及检验证书，详述申请人对该抗体技术指标的要求以及申请人确定该抗体作为主要原材料的依据。
3.其他主要原辅料的选择及验证资料，如固相载体、化学发光剂、反应缓冲液等，该类原辅料一般均为外购，应详述每一原辅料的外购方名称，提交外购方出具的每一原辅料性能指标及检验证书，详述申请人对每一原辅料技术指标的要求以及申请人确定该原辅料作为主要原辅料的依据。
4.试剂盒质控品和/或校准品的制备、定值和/或溯源及相关的实验验证资料。
校准品应溯源至现行的国家或国际参考品（如有），质控品应至少包含阴性和阳性两个水平。
校准品和质控品基质应与待测样本相同或相似。
5.企业内部参考品的原料选择、制备、定值、统计学分析及相关的实验验证资料。
应提供对参考品性质确认的方法或试剂（建议采用国内已上市的、临床上普遍认为质量较好的同类试剂）的相关信息。
阴性参考品除正常血清样本外，还应包含可能产生干扰的溶血、脂血、黄疸及自身免疫性疾病患者血和其他易混淆、交叉的感染性疾病患者血的特异性血清样本。
（六）主要生产工艺及反应体系的研究资料
1.主要生产工艺介绍，可用流程图方式表示，并简要说明主要生产工艺的确定依据。
2.产品基本反应原理介绍。
3.包被工艺研究，申请人应考虑如包被液量、浓度、时间等指标对产品性能的影响，通过试验确定上述指标的最佳组合。
4.显色（发光）系统、酶作用底物等的介绍。
5.实验体系反应条件确定：
申请人应考虑反应时间、反应温度、洗涤次数等条件对产品性能的影响，通过试验确定上述条件的最佳组合。
6.酶催化底物（发光或变色）的最适条件研究。
7.体系中样品加样方式及加样量确定：
申请人应考虑样品加样方式、加样量对产品检测结果的影响，通过实验确定最佳的加样方式及加样量。
如样本需采取稀释或其他必要的方法进行处理后方可用于最终检测，申请人还应对可用于样本稀释的基质或处理方法进行研究，通过试验确定最终选择的用于样本稀释的基质或处理方法。
（七）分析性能评估资料
企业应提交在产品研制或成品验证阶段对试剂盒进行的所有性能验证的研究资料，包括具体研究方法、内控标准、试验数据、统计分析等详细资料。
对于本类产品建议着重对以下分析性能进行研究。
1.最低检测限
选取特定滴度的ToRCH特异性抗体样本，做系列倍比稀释，将检测结果的阳性率在90%以上（n≥20）的最大稀释倍数作为试剂盒的最低检测限。
对于有国际或国家定量参考品的检测项目，（目前仅限于TOXOIgG和RVIgG）和半定量IgG检测项目，最低检测限的确定可采用在一次运行中将空白样本重复测定20次，计算20次结果的均值与标准差（SD），以空白均值加两倍标准差的方法，或其他合理的方法。
2.抗体滴度变化（适用于半定量和/或定量检测试剂）和诊断灵敏度
2.1ToRCH抗体检测试剂：
介绍血清转换盘的组成和来源。
检测血清转换盘，用于评价检测试剂的诊断灵敏度及监测抗体滴度变化趋势的能力。
对于TOXO、RV等已有商业化血清转换盘的检测项目，应选用商业化血清转换盘进行研究；
对于部分无商业化血清转换盘的检测项目，可选择合理的方法,如将标化的血清样本稀释等，对抗体滴度变化及诊断灵敏度进行评价。
2.2ToRCHIgG抗体亲合力检测试剂：
对急性感染（3～4个月内）和既往感染样本进行研究，样本可来自于血清转化盘或基于临床诊断的临床样本，以评价临床诊断灵敏度。
3.分析特异性
3.1交叉反应
3.1.1对抗原结构相近或临床症状相似的其他病原体（见表1）感染病人的高水平特异性抗体血清进行交叉反应研究，其中用于交叉反应研究用的抗体类型应与待测目的抗体类型相同，如检测ToRCHIgG抗体，则应研究其与相关病原体特异性IgG抗体的交叉反应。
3.1.2高浓度病原体特异性IgG抗体与特异性IgM抗体的交叉反应验证。
3.1.3如果检测试剂采用基因重组抗原，应增加对重组基因导入微生物特异性抗体的交叉反应评价。
例如，如果采用大肠杆菌作为宿主菌，采用原核载体作为表达载体，建议考虑大肠杆菌宿主自身蛋白以及载体骨架编码的蛋白与被测物之间可能产生的交叉反应。
申请人应提交所有用于交叉反应验证的病原体来源信息、对于有国家或国际参考品的交叉反应物质还应提供浓度确认等相关信息。
建议申请人将有关交叉反应验证的信息以列表的方式在产品说明书的【产品性能指标】项中列出。
表1用于交叉反应研究的病原体（推荐）
微生物
其他ToRCH病原体*
E-B病毒*
细小病毒B19
乙型肝炎病毒*
甲型肝炎病毒*
水痘-带状疱疹病毒*
甲型流感病毒
乙型流感病毒
副流感病毒
肺炎支原体*
注：
*标注的为必做项目。
3.2干扰实验
3.2.1内源性干扰
对样本
升级会员 