唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文Word格式.docx
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淀粉淀粉酶紫色糊精淀粉酶暗褐糊精淀粉酶红色糊精淀粉酶麦芽糖+少量葡萄糖加碘后:
蓝色紫红色暗褐色红棕色
黄色
三、试剂与器材
篇二:
唾液淀粉酶活性的测定
影响唾液淀粉酶活性的研究
摘要:
讨论了不同条件下唾液淀粉酶的活性差异,实验结果说明,影响唾液淀粉
酶活性的因素很多,必须在适宜的条件下,才能发挥最正确催化作用;
淀粉酶具有
高度专一性,其活性受温度、pH值、激活剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多
种因素的影响;
每个人产生唾液淀粉酶的量不同,活性强弱也有差异。
关键词:
淀粉酶;
活性;
温度;
抑制剂;
激活剂;
专一性
2影响唾液淀粉酶的活性的因素
〔一〕实验目的
观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。
观察温度、pH、激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。
〔二〕实验原理
人唾液中淀粉酶为α-淀粉酶,在唾液腺细胞中合成。
在唾液淀粉酶的作用下,淀粉水解,经过一系列被称为糊精的中间产物,最后生成麦芽糖和葡萄糖。
变化过程如下:
淀粉→紫色糊精→红色糊精→麦芽糖、葡萄糖
淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色、麦芽糖和葡萄糖遇碘不变色。
淀粉与糊精无复原性,或复原性很弱,对班氏试剂呈阴性反响。
麦芽糖与葡萄糖是复原性糖,与班氏试剂共热后生成红棕色氧化亚铜的沉淀。
唾液淀粉酶的最适温度为37-40°
C,最适pH为6.8.偏离此最适环境时,酶的活性减弱。
低浓度的Cl-离子能增加淀粉酶的活性,是它的激活剂。
Cu2+等金属离子能降低该酶的活性,是它的抑制剂。
〔三〕器材及试剂
1、器材:
试管、酒精灯、烧杯、恒温水浴锅、量筒、冰浴、玻璃棒、试管夹、白磁板、试管架、铁三脚架、唾液淀粉酶
2、试剂:
1%淀粉溶液、碘液、班氏试剂、0.4%HCl溶液、0.1%的乳酸溶液、1%NaCl溶液、1%CuO4溶液、0.1%淀粉溶液
〔四〕操作步骤
1、淀粉酶活性的检测:
取一只试管,注入1%淀粉溶液5mL与稀释的唾液0.5-2mL。
混匀后插入1支玻璃棒,将试管连同玻璃棒置于37°
C水浴中。
不是的用玻璃棒从试管中取出1滴溶液,滴加在白磁板上,随即滴加1滴碘液,观察溶液呈现的颜色。
此实验延续至溶液仅表现碘被稀释后的微黄色为止。
记录淀粉在水解过程中,遇碘后溶液颜色的变化。
向上面的剩余溶液中加2mL班氏试剂,放入沸水中加热10分钟左右,观察现象
2、pH对酶活性的影响:
取4支试管,分别参加0.4%盐酸、0.1%乳酸、蒸馏水与1%碳酸钠各2mL,再向以上四支试管中各加2mL1%淀粉溶液及2mL淀粉酶试剂,在沸水浴中加热,根据生成红棕色沉淀的多少,说明淀粉水解的强弱。
3、温度对酶活性的影响:
取3支试管,各加3mL1%淀粉溶液;
另取3支试管,各加1mL淀粉酶液。
将此6支试管分为3组,每组中盛淀粉溶液与淀粉酶液的试管各1支,三组试管分别置于0°
C、37°
C与70°
C的水浴中。
5分钟后,将各组中的淀粉溶液倒入淀粉酶液中,继续维持原温度条件5min后,立即加2滴碘液,观察溶液颜色的变化。
根据观察结果说明温度对酶活性的影响。
4、激活剂与抑制剂对酶活性的影响:
取3支试管,按下表参加各种试剂。
混匀后,置于37°
C水浴中的保温。
从1号试管中用玻璃棒取出1滴溶液,置于白磁板上用碘液检查淀粉的水解程度。
待1号试管内的溶液遇碘不再变色后,立即取出所有的试管,各加碘液2滴,观察溶液颜色的变化,并解释之。
1.
参加班氏试剂后
2.PH值对酶活性影响:
1号深红色,2号为红棕色,3号为砖红色,4号为偏蓝。
因为PH=1时,超出了淀粉酶有效PH范围,使得酶完全失活,淀粉没有被分解。
2号是因为PH=5时,不是淀粉酶的最适范围。
3号是因为PH
=
7时,为淀粉酶分解的最适PH,淀粉被酶迅速分解生成麦芽糖和葡萄糖。
而4号那么是因为PH=9超出了淀粉酶的适宜PH,活性受到或者是局部失活,使淀粉分解较慢。
3.温度对酶的影响:
1号显紫红色,2号为淡黄色,3号为深蓝色。
当温度为0度时,蛋白质分子的热运动减慢,即酶分子的活性受到了抑制,使酶的活性降低了,淀粉分解减慢,生成紫红色的糊精;
2号处于37度,接近人体温度,酶的活化性能较高,淀粉被分解成麦芽糖和葡萄糖就越快,所以是淡黄色,而当温
度为70度时,由于酶是蛋白质,遇到高温时会失活,所以淀粉没有被分解。
4.激活剂和抑制剂对酶的影响:
3号作为对照实验组,显红棕色,1号显浅黄色,2号显深蓝色。
因为在1号溶液中,NaCl对酶的活性在增加作用,激活了淀粉酶,淀粉酶迅速把淀粉分解成麦芽糖和葡萄糖,滴加碘液时,溶液显浅黄色,而对照组显示红棕色,说明淀粉被分解成了糊精,在1号中,溶液中的淀粉没有被分解遇碘变蓝,通过比照1和3号,2和3号,由颜色的变化,判断淀粉水解程度为1<
3<
2,说明了NaCl具有激活作用,CuO4具有抑制作用。
结论:
酶催化特定化学反响的蛋白质、RNA或其复合体。
是生物催化剂,能通过降低化学反响的活化能加快反响速率,
但不改变反响的平衡点。
绝大多数酶的化
篇三:
淀粉酶活性测定实验报告
淀粉酶活性的测定
一、研究背景及目的
酶是高效催化有机体新陈代谢各步反响的活性蛋白,几乎所有的生化反响都离不开酶的催化,所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色,因此对酶的研究有着非常重要的意义。
酶的活力是酶的重要参数,反映的是酶的催化能力,因此测定酶活力是研究酶的根底。
酶活力由酶活力单位表征,通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到
淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称,按照其水解淀粉的作用方式,可分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。
α-淀粉酶和β-淀粉酶是其中最主要的两种,存在于禾谷类的种子中。
β-淀粉酶存在于休眠的种子中,而α-淀粉酶是在种子萌发过程中形成的。
α-淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标,α-淀粉酶活性低的品种抗穗发芽,反之那么易穗发芽。
目前,关于α-淀粉酶活性的测定方法很多种,活力单位的定义也各不相同,国内外测定α-淀粉酶活性的方法常用的有凝胶扩散法、3,5-二硝基水杨酸比色法和降落值法这3种方法所用的材料分别是新鲜种子、萌动种子和面粉,获得的α-淀粉酶活性应该分别是延
二、实验原理
萌发的种子中存在两种淀粉酶,分别是α-淀粉酶和β-淀粉酶,β-淀粉酶不耐热,在高温下易钝化,而α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6下那么发生钝化。
本实验的设计利用β-淀粉酶不耐热的特性,在高温下〔70℃〕下处理使得β-淀粉酶钝化而测定α-淀粉酶的酶活性。
酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的,淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖,可用3,5-二硝基水杨酸试剂测定,由于麦芽糖能将后者复原生成硝基氨基水杨酸的显色基团,将其颜色的深浅与糖的含量成正比,故可求出麦芽糖的含量。
常用单位时间内生成麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。
然后利用同样的原理测得两种淀粉酶的总活性。
实验中为了消除非酶促反响引起的麦芽糖的生成带来的误差,每组实验都做了相应的对照实验,在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。
在实验中要严格控制温度及时间,以减小误差。
并且在酶的作用过程中,四支测定管及空白管不要混淆。
三、材料、试剂与仪器
实验材料:
萌发的小麦种子〔芽长1厘米左右〕仪器:
容量瓶:
50ml某1,100ml某1小台秤研钵
具塞刻度试管:
15ml某6试管:
8支移液器烧杯试剂:
①1%淀粉溶液〔称取1克可溶性淀粉,参加80ml蒸馏水,加热熔解,冷却后定容至100ml〕;
②pH5.6的柠檬缓冲液:
A液〔称取柠檬酸20.01克,溶解后定容至1L〕B液〔称取柠檬酸钠29.41克,溶解后定容至1L〕
取A液5.5ml、B液14.5ml混匀即为pH5.5柠檬酸缓冲液;
③3,5-二硝基水杨酸溶液〔称取3,5-二硝基水杨酸1.00克,溶于20ml1M氢氧化钠中,参加50ml蒸馏水,再参加30克酒石酸钠,待溶解后,用蒸馏水稀释至100ml,盖紧瓶盖保存〕;
④麦芽糖标准液〔称取0.100克麦芽糖,溶于少量蒸馏水中,小心移入100ml容量瓶中定容〕;
⑤0.4MNaOH
四、实验步骤
1.酶液的制备
称取2克萌发的小麦种子与研钵中,加少量石英砂,研磨至匀浆,转移到50ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度,混匀后在室温下放置,每隔数分钟振荡一次,提取15-20分钟,于3500转/别离心20分钟,取上清液备用。
2.α-淀粉酶活性的测定
①取4支管,注明2支为对照管,另2支为测定管
②于每管中各加酶提取液液1ml,在70℃恒温水浴中〔水浴温度的变化不应超过±
0.5℃〕准确加热15min,在此期间β-淀粉酶钝化,取出后迅速在冰浴中彻底冷却。
③在试管中各参加1ml柠檬酸缓冲液
④向两支对照管中各参加4ml0.4MNaOH,以钝化酶的活性
⑤将测定管和对照管置于40℃〔±
0.5℃〕恒温水浴中准确保温15min再向各管分别参加40℃下预热的淀粉溶液2ml,摇匀,立即放入40℃水浴中准确保温5min后取出,向两支测定管分别迅速参加4ml0.4MNaOH,以终止酶的活性,然后准备下步糖的测定。
3.两种淀粉酶总活性的测定
取上述酶液5ml于100ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度〔稀释倍数视样品酶活性大小而定,一般为20倍〕。
混合均匀后,取4支管,注明2支为对照管,另2支为测定管,各管参加1ml稀释后的酶液及pH5.6柠檬酸缓冲液1ml,以下步骤重复α-淀粉酶测定的第④及第⑤的操作。
4.麦芽糖的测定⑴标准曲线的制作
五、数据整理及计算
上表中前4行数据为实验的原始数据。
以表中前两行数据绘制标准曲线〔见下页〕,计算上表中第4行数据〔各样品的OD值〕均值,填入上第5行中,根据标准曲线的方程,计算第5行OD值所对应的麦芽糖浓度,填入最后一行,如上表。
根据以上的数据整理的结果,结合以下公式计算两种淀粉酶的活性:
淀粉酶活性〔毫克麦芽糖克·
1鲜重分钟·
1〕
〔A-A'
〕样品稀释总体积
样品重〔g〕5
〔B-B'
淀粉酶活性〔毫克麦芽糖克1鲜重分钟1〕
A——α-淀粉酶测定管中的麦芽糖浓度
A’——α-淀粉酶对照管中的淀粉酶的浓度
B——(α-+β-)淀粉酶总活性测定管中的麦芽糖浓度B’——(α-+β-)淀粉酶总活性对照管中的麦芽糖浓度计算结果如下:
α-淀粉酶活性〔毫克麦芽糖克-1鲜重分钟-1〕
(α-+β-)淀粉酶活性〔毫克麦芽糖克-1鲜重分钟-1〕β-淀粉酶活性-1鲜重分钟-1〕
六、结果分析
七、思考题
1、酶活力测定实验的总体设计思路是什么?
实验设计的关键你认为是什么?
为什么?
答:
利用酶的专一性或酶活力的影响因素抑制除待测酶以外的其它酶活性,通过测酶促反响的产率推算酶活力大小。
关键在于抑制其它酶的活力而不影响测定酶,这样可以减小或防止其它酶产物给测定结果