动物细胞培养和核移植技术理科PPT推荐.ppt

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原代培养原代培养原代培养原代培养过程过程11图示图示原代原代原代原代培养培养培养培养细胞悬液细胞悬液CO2培培培培养箱养箱养箱养箱动物细胞生长动物细胞生长特点特点：

细胞贴壁：

悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。

称为细胞贴壁。

要求：

培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。

易于贴附。

细胞的接触抑制：

当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。

的接触抑制。

细胞贴壁过程那么什么是接触抑制？

那么什么是接触抑制？

接触抑制：

细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。

增加。

50代以后代以后失去接触抑制失去接触抑制接触抑制接触抑制动物细胞生长特性部分细胞突变，获部分细胞突变，获得不死性，向癌细得不死性，向癌细胞方向发展，糖蛋胞方向发展，糖蛋白减少。

白减少。

传代传代传代传代培养培养培养培养过程过程22定义定义定义定义：

贴满瓶壁贴满瓶壁贴满瓶壁贴满瓶壁的细胞需要重新的细胞需要重新的细胞需要重新的细胞需要重新用用用用胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶等处等处等处等处理，然后分瓶培理，然后分瓶培理，然后分瓶培理，然后分瓶培养，让细胞继续养，让细胞继续养，让细胞继续养，让细胞继续增殖。

称为传代增殖。

称为传代培养。

培养。

传传传传代培养代培养代培养代培养原代培养：

原代培养：

传代培养：

原代培养与传代培养的区别原代培养与传代培养的区别分装之前，分装之前，1010代以前代以前分装后继续培养，分装后继续培养，1010代以后代以后动物胚胎或幼龄动动物胚胎或幼龄动物的组织、器官物的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液10代细胞代细胞50代细胞代细胞传代培养传代培养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加培养液加培养液原代培养原代培养胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎细胞株细胞株细胞系细胞系遗传物质遗传物质未改变未改变遗传物质遗传物质已改变已改变细胞株：

细胞株：

原代细胞一般传至原代细胞一般传至1010代左右细胞代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到活到40504050代，这种传代细胞为细胞株。

代，这种传代细胞为细胞株。

细胞系：

细胞株传代至细胞株传代至5050代后又出现细胞代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。

种传代细胞为细胞系。

细胞株和细胞系的区别细胞株和细胞系的区别：

细胞系的遗传细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。

容易传代培养。

多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考并讨论中，根据你所学的内环境的知识，思考并讨论以下问题：

以下问题：

讨论讨论1.体外培养细胞时需要提供哪些物质体外培养细胞时需要提供哪些物质2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？

体外培养的细胞需要什么样的环境条件？

充足的营养供给、适宜的温度、适宜的充足的营养供给、适宜的温度、适宜的pH和气体环境和气体环境无菌、无毒的环境。

无菌、无毒的环境。

1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。

等。

）3、温度和、温度和PH36.5+0.5度；

PH为7.2-7.4。

4、气体环境：

、气体环境：

O2和和CO2（95%空气和空气和5%CO2）补充合成培养基补充合成培养基中缺乏的物质中缺乏的物质？

22、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？

做动物细胞培养材料？

11、较植物组培培养基有何独特之处？

、较植物组培培养基有何独特之处？

这些组织或器官上的这些组织或器官上的细胞分裂能力强细胞分裂能力强独特独特11、液体培养基、液体培养基之处之处22、成分中有动物血清等、成分中有动物血清等:

3、为什么培养前要将组织细胞、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？

分散成单个细胞？

防止细胞间接触抑制现象，防止细胞间接触抑制现象，使细胞与培养液更充分接触使细胞与培养液更充分接触4、动物细胞培养能否像绿色植物组织、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？

培养那样最终培养成新个体？

不能，动物细胞培养只能使细不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，而不能发育成个体胞数目增多，而不能发育成个体5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？

、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？

能，胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长能，胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，因此必须控制时间的作用也会消化细胞膜蛋白，因此必须控制好好胰蛋白酶的处理时间胰蛋白酶的处理时间。

66、能够用胃蛋白酶代替胰蛋、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？

为什么白酶吗？

为什么？

不能，因为两者的最适不能，因为两者的最适PHPH不不同，而正常组织细胞的生存环同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适境与胰蛋白酶的最适PHPH较接近较接近细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体或组织植物体或组织培养结果培养结果获得细胞获得细胞或细胞分泌产物或细胞分泌产物快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、动物血清葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）干扰素、单克隆抗体）培养作为基因工程中的受体细胞培养作为基因工程中的受体细胞培养的动物细胞可以用于检测有毒物培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性质，判断某种物质的毒性为治疗和预防癌症及其他疾病提供理为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据论依据例：

下图是动物细胞培养的基本过程例：

下图是动物细胞培养的基本过程示意图。

请据此回答：

示意图。

11）容器）容器AA中放置的是动物器官或组中放置的是动物器官或组织。

它一般取自织。

它一般取自_。

（22）容器）容器AA中的动物器官或组织首中的动物器官或组织首先要进行的处理是先要进行的处理是，然，然后用后用酶处理，这是酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的为了使细胞分散开来，这样做的目的是目的是。

动物胚胎或幼龄动物动物胚胎或幼龄动物剪碎剪碎胰蛋白胰蛋白防止细胞间接触抑制现象，防止细胞间接触抑制现象，使细胞与培养液充分接触，使细胞与培养液充分接触，便于培养便于培养（33）培养首先在）培养首先在BB瓶中进行，瓶中瓶中进行，瓶中的培养基特有成分有的培养基特有成分有_。

在此瓶中培养一段时间后，有许多在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到细胞衰老死亡，这是培养到第第代，到这时的培养称为代，到这时的培养称为__。

（44）为了把）为了把BB瓶中的细胞分装到瓶中的细胞分装到CC瓶瓶中，用中，用处理，然后配置处理，然后配置成成，再分装。

，再分装。

动物血清动物血清10原代培养原代培养胰蛋白酶胰蛋白酶细胞悬液细胞悬液二二.动物细胞核移植技术和克隆动物动物细胞核移植技术和克隆动物将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）。

分分类类胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植：

体细胞核移植体细胞核移植：

细胞分化程度低，细胞分化程度低，恢复全能性容易；

恢复全能性容易；

细胞分化程度高，细胞分化程度高，恢复全能性不容易恢复全能性不容易1.1.动物细胞核移植概念：

动物细胞核移植概念：

2.2.体细胞核移植的过程：

体细胞核移植的过程：

（难度高难度高）去去核核注注核核重组细胞重组细胞取供体细胞取供体细胞取供体细胞取供体细胞传代培养传代培养传代培养传代培养10101010代代代代以内的细胞以内的细胞以内的细胞以内的细胞.为什么？

用的是去用的是去用的是去用的是去核的减数核的减数核的减数核的减数第二次分第二次分第二次分第二次分裂中期细裂中期细裂中期细裂中期细胞（胞（胞（胞（MMMM中中中中期期期期）为什）为什）为什）为什么？

么？

激活方法：

激活目的：

促融方法：

电刺激电刺激电刺激电刺激胚胎移植至胚胎移植至胚胎移植至胚胎移植至代孕受体内代孕受体内代孕受体内代孕受体内妊娠、分娩妊娠、分娩妊娠、分娩妊娠、分娩供体：

优质高产奶牛供体：

优质高产奶牛受体：

普通奶牛（卵受体：

普通奶牛（卵母细胞的采集与培养）母细胞的采集与培养）母细胞的采集与培养）母细胞的采集与培养）1.1.1.1.体积大，易操体积大，易操体积大，易操体积大，易操作。

作。

2.2.2.2.含有促使含有促使含有促使含有促使细胞核表达全能细胞核表达全能细胞核表达全能细胞核表达全能性的物质和营养性的物质和营养性的物质和营养性的物质和营养条件。

条件