测》讲师手册_重命名_2019-8-25-12-10-50Word文件下载.doc
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30分
讲解要点:
1、原理:
用乙醚和石油醚抽提样品的碱水解液,通过蒸馏或蒸发去除溶剂,测定溶于溶剂中的抽提物的质量。
2、适用范围:
适用于巧克力、乳和乳制品、油脂类、蛋制品、麦片基料023、天然奶油芝士(M型)、冷饮专用大豆粉4#等脂肪的测定。
3、试剂
酶活力≥1.5U/mg淀粉酶,质量分数25%以上的氨水,体积分数95%以上的乙醇,无过氧化物和抗氧化剂并满足试验要求的乙醚,沸程30℃~60℃石油醚,0.1mol/L碘溶液,10g/l刚果红,6mol/L盐酸.以上试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水。
各试剂作用:
1)氨水:
使牛乳中的酪蛋白钙盐成为可溶性的盐类,促进脂肪球乙醚的作用。
2)乙醇:
使能被酒精浸出的物质留在水相中。
3)乙醚:
提取脂肪。
4)石油醚:
使乙醚不被水饱和。
5)10g/l刚果红水溶液:
称取1g刚果红,溶于100ml蒸馏水中,混匀,其作用是使两项界面更加清晰。
注:
抽提所用的乙醚、石油醚要求无水、无醇、无过氧化物,因为水和醇会导致糖类和可溶性盐类物质溶出,使结果偏高;
过氧化物会导致脂肪被氧化,在烘干时还有爆炸的危险;
脂肪收集瓶因反复加热时,会因脂肪氧化而增重,质量增重时应以增重前的质量为恒重。
脂肪测定收集瓶不可放入干燥器中冷却,避免冷却不充分或冷却时间过长。
4、仪器设备
1)毛氏瓶、吸管、25ml量筒、抽脂瓶塞。
抽脂瓶塞:
软木、硅胶、聚四氟乙烯。
软木塞应先浸于乙醚中,后放入60℃或以上的水中保持至少15min,冷却后使用。
不用时泡在水中,每天换水。
2)150ml三角瓶放入102±
2℃的烘箱中烘至恒重,,取出冷却至室温,备用。
3)电子天平,称量(准至0.0001g)。
4)恒温干燥箱:
干燥样品(0-200℃)。
5)水浴锅:
加热蒸发、保温(0-100℃)。
6)离心机:
加热蒸发、保温(0-100℃)
7)离心机:
离心,沉淀分层。
5、检验过程
1)称取混匀试样适量于抽脂瓶中,加入2.0mL氨水,混合后放入65℃±
5℃的水浴中,加热15~20min,不时振荡,取出后冷至室温,静止30s。
2)第一步抽提:
缓慢加入10mL乙醇,边加边摇,因为高浓度乙醇加入太快时易使蛋白变性凝固,导致实验失败。
混匀后加两滴刚果红溶液。
加入25mL乙醚,塞上瓶塞,振荡1min,打开塞子,混合谜冲洗塞子和瓶颈,使冲洗液流入抽脂瓶。
加入25mL石油醚,塞上瓶塞,振荡30S,在500~600转/分离心5min。
打开瓶塞,混合谜冲洗塞子和瓶颈内壁,使冲洗液流入抽脂瓶。
将上层液尽可能地倒入已准备好的脂肪收集瓶中,避免倒出水层,用少量混合溶剂冲洗瓶颈外部,冲洗液收集在脂肪收集瓶中。
3)第二步抽提:
重复
(2)的操作,只是加5mL乙醇、15mL乙醚和15mL石油醚。
4)重复操作再进行第三次抽提,但只用15mL乙醚和15mL石油醚.
5)如果产品中脂肪的质量分数低于5%,可只进行两次抽提.
6)挥发:
合并所有提取液,于水浴锅挥发溶剂。
蒸馏前用少量混合溶剂冲洗瓶颈内部。
7)烘干:
将脂肪收集瓶放入102℃±
2℃的烘箱中加热1h,取出脂肪收集瓶,冷却至室温,称量,重复操作,直到脂肪收集瓶两次连续称量差值不超过0.5mg,记录脂肪收集瓶和抽提物的最低质量。
8)空白与样品检验同时进行,使用相同步骤和相同试剂,但用10mL水代替试样。
加完氨水后应将实验一直做完,不得停顿和延误;
倾倒醚层时避免将红色液体部分倒入脂肪收集瓶中。
6、结果表述
X脂肪=(m1-m瓶-m脂肪空白)/m样品质量×
100
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。
7、精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果之差应符合:
脂肪含量≥15%,≤0.3g/100g;
脂肪含量5~15%,≤0.2g/100g;
脂肪含量≤5%,≤0.1g/100g。
8、注意事项
空白试验与样品测定同时进行,在理想的条件下(试剂空白值低,天平室温度相同,脂肪收集瓶充分冷却),该值通常小于0.5mg。
在常规测定中,可忽略不计。
如果全部试剂空白残余物大于0.5mg,则分别蒸馏100mL乙醚和石油醚,测定溶剂残余物的含量。
用空的控制瓶测得的量和每种溶剂的残余物的含量都不应超过0.5mg。
否则应更换不合格的试剂或对试剂进行提纯。
9、乙醚中过氧化物的检验
取一只玻璃小量筒,用乙醚冲洗,然后加入10mL乙醚,再加入1mL新制备的100g/L的碘化钾溶剂,振荡后静置1min,两相中均不得有黄色。
二、冷冻饮品行标SB/T10009-2008
23-33
1、原理与GB5413.3-2010相同
2、所用设备、器皿与GB5413.3-2010相同
3、行标要求抽提2次,实际操作抽提3次
4、所用试剂与GB5313.3-2010相同,只是多加氯化钠溶液。
2%氯化钠:
称取2gNaCl,溶于98ml蒸馏水中,混匀。
作用:
促进溶解,防止乳化。
5、所用设备、器皿与GB5413.3-2010相同
6、检验过程:
1)称样(使抽提出的脂肪量为0.3g-0.6g)于抽脂瓶中,加50℃的水使总体积为10-11mL,混匀冷却,10ml水替代样品做空白。
2)在样品中加入2ml2%的氯化钠溶液,边加边摇。
3)往抽脂瓶中加2ml氨水混匀。
4)于65±
5℃水浴加热15~20分,取出后冷至室温,静止30S。
5)加10mL乙醇,边加边摇,如有结块应重新做。
加2滴刚果红,混匀。
6)用量筒量取25ml乙醚加入,盖好塞子振荡毛氏瓶1min,振摇过程力度不要过度,避免形成持久乳化液。
7)小心地打开塞子用混合醚(乙醚:
石油醚=1:
1)冲洗塞子和瓶颈。
8)用量筒量取25ml石油醚加入,盖好塞子,振荡毛氏瓶30S,振摇过程中力度不要过度,避免形成持久乳化液。
9)将加塞的抽脂瓶对称放入离心机中,在500-600r/min下离心5分,小心地打开塞子用混合醚冲洗塞子和瓶颈。
10)持抽脂瓶的小球部,小心地将上层液尽可能地倒入已称重的脂肪收集瓶中。
11)在通风橱内将收集瓶置于70-80℃水浴锅上,挥发有机溶剂。
温度不宜过高,严禁明火。
12)按上述条件进行第二次抽提,但只用5mL乙醇、15mL乙醚和15mL石油醚。
13)按上述条件进行第三次抽提,但只用15mL乙醚和15mL石油醚。
14)当挥发致不再有溶剂气味时,将脂肪收集瓶放入102±
2℃的干燥箱中2h,取出、冷却1h、称重。
恒重时将脂肪收集瓶放入102±
2℃的干燥箱中加热1h,取出冷却称重,重复此加热,加热时间为30min,冷却并称重,直到脂
收集瓶两次连续称量不超过0.5mg。
15)样品中脂肪的含量:
X(g/100g)={(m1-m2)-(m3-m4)}*100/m0
m0—样品的质量,g;
m1—脂肪收集瓶和抽提物的质量,g;
m2—脂肪收集瓶的质量,g;
m3—空白试验中,脂肪收集瓶和抽提物的质量,g;
m4—空白试验中脂肪收集瓶的质量,g。
16)以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术
平均值表示,结果保留三位有效数字。
三、索氏抽提法GB/T5009.6-2003
34-39
20分
1、适用于粮食类粗脂肪的检测,不适用于乳与乳制品。
2、测定过程:
1)称取2g-5g原料,全部移入滤纸筒内,将滤纸筒放入脂肪抽提器的抽提筒内,上下加脱脂棉(防止空气中水分进入;
避免乙醚挥发)。
2)由抽提器冷凝管上端加入乙醚至瓶内容积三分之二处,于水浴加热6-12小时后,取下接收瓶。
3)在通风橱内水浴蒸干后于100±
5℃干燥2h,取出冷却1h后称重。
4)结果:
X=(m1-m0)*100/m2
X—试样中粗脂肪的含量,(g/100g);
m1—接收瓶和粗脂肪的质量,(g);
m0—接收瓶的质量,(g);
m2—试样的质量,(g)。
结果表示到小数点后一位。
5)精密度:
重复条件下两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均的10%。
3、注意事项:
1)该法测定用样品、抽提器、抽提用有机溶剂都需要进行脱水处理,因为:
抽提体系中有水,会使样品中的水溶性物质溶出,导致测定结果偏高;
抽提体系中有水,则抽提溶剂易被水饱和(尤其是乙醚,可饱和约2%的水),从而影响抽提效率;
样品中有水,抽提溶剂不易渗入细胞组织内部,结果不易将脂肪抽提干净。
2)样品放入滤纸筒的高度不要超过回流弯管,否则超过弯管的样品脂肪不能提净,造成误差。
3)索氏抽提的水浴温度不可太高,控制在80d/min,回流速度以6-12次/h为佳。
4)试样粗细度适当,过粗不易抽净;
过细,试样透过滤纸筒孔隙,使结果偏高。
5)检查抽提是否完全:
取抽提管内乙醚1滴于滤纸上,乙醚挥发后纸上无油迹则为抽提完全。
四、索氏抽提法GB/T5512-2008
40-44
讲解要点
1、测定原理:
试样用无水乙醚抽提后,蒸去溶剂所得物质为粗脂肪(除游离脂肪外,还含有色素及挥发油、蜡、树脂等物)
同GB/T5009.6-2003
3、测定过程:
1)称2-5克样,105℃烘30分,趁热倒入研钵中,加2克脱脂细砂研磨。
将样品和细砂研磨到出油状完全转入滤纸筒内。
2)加乙醚至虹吸管高度以上,待乙醚流净后,再加乙醚至虹吸管高度的三分之二处。
用一小块脱脂棉轻轻塞入冷凝管上口,打开冷凝管进水管,开始加热抽提,速度120-150d/min,回流7次/h以上
3)在通风橱内水浴蒸干。
4)100±
4、结果:
结果表示到小数点后一位。
5、精密度:
6、注意:
1)样品放入滤纸筒的高度不超过回流弯管,否则超过弯管的样品脂肪不能提净,造成误差。
2)索氏抽提的水浴温度不可太高,抽提时间须视试样含油量而定,一般在8h以上,抽提至抽提管内的乙醚用玻璃片检查(点滴实验)无油迹为止
3)本法不能用石油醚代替乙醚,因为它不能溶解全部的植物脂类物质。
五、酸水解法
GB/T5009.6
45-48
样品与盐酸一起加