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无机碳源：

有机碳源有机碳源COCO22、碳酸盐、碳酸盐自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物氮源（提氮源（提供氮元素的供氮元素的物质）物质）无机氮源：

无机氮源：

有机氮源：

（葡糖糖、蔗糖、淀粉、牛肉膏、蛋白胨等）（葡糖糖、蔗糖、淀粉、牛肉膏、蛋白胨等）牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等NHNH44、NONO33-N2（3）.（3）.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方（参考教材附录内容参考教材附录内容）（5）（5）另外还需要满足微生物生长对另外还需要满足微生物生长对pHpH、特殊营养物质特殊营养物质,例如例如:

生长因子生长因子（即细菌生长必需，而自身不能合成的即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶）以及以及氧氧气气等等的要求。

的要求。

（4）.不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳源碳源、氮源氮源、无无机盐机盐基本成分基本成分

（1）按培养基的）按培养基的物理形态分：

物理形态分：

液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基固体培养基固体培养基一一、培养基的种类、培养基的种类

（2）按培养基的）按培养基的功能分：

功能分：

基础（通用）培基础（通用）培养基养基选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基（3）按培养基的）按培养基的化学成分分：

化学成分分：

天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基二二、无菌技术无菌技术1.1.概念概念无菌技术又称无菌操作，泛指无菌技术又称无菌操作，泛指在培养微生物的操在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。

作中，所有防止杂菌污染的方法。

因此，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌因此，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵的入侵消毒消毒使用较为使用较为温和温和的物理或化学方法，杀死物体的物理或化学方法，杀死物体表面或内部表面或内部的的部分部分微生物微生物（不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子）。

2.2.消毒与灭菌消毒与灭菌灭菌灭菌使用使用强烈强烈的理化因素杀死物体内外的理化因素杀死物体内外所有所有的的微生物，包括微生物，包括芽孢和孢子芽孢和孢子。

理化因素的作用强度理化因素的作用强度理化因素的作用强度理化因素的作用强度消灭微生物的数量消灭微生物的数量消灭微生物的数量消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭芽孢和孢子能否被消灭芽孢和孢子能否被消灭芽孢和孢子能否被消灭

（1）

（1）定义定义煮沸消毒法：

煮沸消毒法：

100100煮沸煮沸5-6min5-6min。

巴氏消毒法：

70-7570-75下煮下煮30min30min或或8080下煮下煮15min15min。

化学药剂消毒法：

用化学药剂消毒法：

用75%75%酒酒精等精等进行皮进行皮肤消毒；

氯气消毒水源。

肤消毒；

紫外线消毒。

.消毒的方法：

消毒的方法：

2.2.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌：

干热灭菌：

160-170160-170下加下加热热1-2h1-2h。

高压蒸气灭菌：

100kPa100kPa、121121下维持下维持15-30min.15-30min.灭菌的方法：

灭菌的方法：

二、无菌技术二、无菌技术（11）对实验操作的）对实验操作的空间、操作者的衣着和手空间、操作者的衣着和手，进行，进行清洁和消清洁和消毒毒。

（22）将用于微生物培养的）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基器皿、接种用具和培养基等器具进等器具进行灭菌。

行灭菌。

（33）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯酒精灯火焰附近火焰附近进行。

进行。

（44）实验操作时应避免已经）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具灭菌处理的材料用具与周围的物与周围的物品相接触。

品相接触。

无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括以下几个方面思考：

思考：

1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？

被其他外来微生物污染外，还有什么目的？

2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。

如果需要，请选择合适的方法。

灭菌。

（11）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（22）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（33）实验操作者的双手实验操作者的双手无菌技术还能有效避免操作者自身被无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。

微生物感染。

（1）、（）、

（2）需要灭菌；

（）需要灭菌；

（3）需要消毒）需要消毒。

练习细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法，这精、火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌（些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌（）A.接种针、手、培养基接种针、手、培养基B.高压锅、手、接种针高压锅、手、接种针C.培养基、手、接种针培养基、手、接种针D.培养基、手、高压锅培养基、手、高压锅C变形题培养基、培养皿、接种环、实验操作者培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是（毒方法依次是（）化学消毒化学消毒灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌紫外线消毒紫外线消毒高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌巴氏消毒法巴氏消毒法A.B.C.D.A

（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.计算：

（根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的比例，计算配制计算：

（根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的比例，计算配制100ML100ML的培养基的培养基时，各种的成分的用量）时，各种的成分的用量）物质物质牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨NaClNaCl琼脂琼脂水水重量重量5g5g10g10g5g5g20g20g定溶至定溶至1000mL1000mL2.2.称量称量三、实验操作三、实验操作思考：

该培养基从物理性质分属于哪种？

原因？

含有几种基本思考：

含有几种基本营养成分？

牛肉膏提供上述哪几种成分？

营养成分？

准确称取各种成分，注意事项：

牛肉膏要放在准确称取各种成分，注意事项：

牛肉膏要放在称量纸上称量纸上称称量，牛肉膏、蛋白胨都易量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮吸潮，称取时，称取时动作要迅速，称后动作要迅速，称后及时盖上瓶盖及时盖上瓶盖。

3.3.溶化：

溶化：

4.4.灭菌：

灭菌：

5.5.倒平板：

待培养基冷却到倒平板：

待培养基冷却到5050OOCC左右时，在酒精左右时，在酒精火焰附近倒平板。

火焰附近倒平板。

注意：

溶化后应该调节注意：

溶化后应该调节PH（在灭菌前）（在灭菌前）思考思考3溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热热?

加琼脂的目的是什么加琼脂的目的是什么?

可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水中溶于水中,减少误差减少误差作为凝固剂作为凝固剂思考思考4在灭菌在灭菌前前,用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的是什么？

的锥形瓶的目的是什么？

在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞；

在取出培养基锥形瓶时也能起到隔绝空气中杂在取出培养基锥形瓶时也能起到隔绝空气中杂菌污染的作用菌污染的作用倒平板倒平板:

1）.1）.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到5050左右时，左右时，才能用来倒平板。

你用什么办法来估计培养基的才能用来倒平板。

你用什么办法来估计培养基的温度？

温度？

答：

可以用手触摸盛有培养基的锥形可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。

时，就可以进行倒平板了。

2）.2）.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物答：

通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。

污染培养基。

3）.3）.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

4）.4）.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？

为什么？

来培养微生物吗？

平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固答：

平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

空气中的微生物可能在皿盖与皿底之答：

空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。

培养微生物。

四四、纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌微生物接种方法常见的有微生物接种方法常见的有平板划线法和稀释涂平板划线法和稀释涂布平板法。

布平板法。

（11）.平板划线法平板划线法通过通过接种环接种环在琼脂固体培养基表面在琼脂固体培养基表面连续划线连续划线的操作的操作，将，将聚集的菌种逐步稀释分散聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的到培养基的表面。

表面。

在数次划线后可以分离到在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称菌落来的肉眼可见的子细胞群体称菌落。

学科网学科网将接种环放在火将接种环放在火焰上灼烧，直到焰上灼烧，直到接种环接种环_在在_旁冷旁冷却接种环，并却接种环，并打开棉塞打开棉塞将试管口通过火焰将试管口通过火焰.将已将已_的接种环伸的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液入菌液中蘸取一环菌液左手将皿盖打开一条缝隙，右手左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，板内，划划_条平行线，条平行线，盖上皿盖。

盖上皿盖。

注意不要划破培养基注意不要划破培养基。

.将试管通过火将试管通过火焰，并塞上棉塞焰，并塞上棉塞火焰火焰冷却冷却三至五三至五灼烧接种环，待其冷却后，从灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的第一区域划线的_开始开始往第二区域内划线。

重复以上往第二区域内划线。

重复以上操作，在三、四、五区域内划操作，在三、四、五区域内划线。

线。

注意不要将最后一区的划注意不要将最后一区的划线与第一区相连。

线与第一区相连。

末端末端烧红烧红将平板将平板_放放入培养箱中培养。

入培养箱中培养。

倒置倒置思考：

11、为什么在操作的第一步要灼烧接种环？

、为什么在操作的第一步要灼烧接种环？

操作的第一步灼烧接种环是为了操作的第一步