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本次课题的主要目的为验证新型血沉仪的测量准确性和提出如何修正与提升新型血沉仪测量准确性的问题。

通过具体实验后可以表述为1、验证南方血沉仪的测量准确性和可行性。

2、从实际应用层次找到办法使南方血沉仪提高其测量准确性。

3、从方法学的角度看是否能找到方法使血沉快速准确测量变为现实,是否能够应用于新型血沉仪。

主要应用倾倾斜法,改变倾斜角度,看是否在倾斜一定角度的时候与魏氏法测量保持良好相关性。

4、验证全自动魏氏血沉仪的测量准确性和分析其可行性。

通过以上四点,提出最有实现价值和具有可行性的方法,以求改进目前国内血沉仪测量现状。

第2章血沉及血沉检测方法

在很久以前血沉的这个现象就已经被发现了,在一个多世纪以前,德国学者德国的RobinFahraeus对这个现象进行了大量的研究之后,发现在人体生病的情况下,血沉会有所改变,并认为血沉可以应用于临床,但是当时并没有提出测量血沉的方法。

在1921年,Westergern提出了一种可以检测血沉的方法,被后人称之为魏氏法,也叫传统魏氏法。

近一个世纪以来,人们对魏氏法基本没有提出什么改进办法,只是将抗凝剂从肝素钠变为了枸橼酸钠,也称为改良魏氏法[28]。

人们为了改进测量血沉的方法,做了很多努力,也有一系列如下文所说的办法产生,不过目前为止,国际血液委员会所推荐的测量血沉的方法仍是魏氏法。

血沉简介

血液的组成与功能

血液是流动在人的血管和心脏中的一种红色不透明的粘稠液体,血液的主要成分为血浆、血红细胞,其中红细胞占比达到血液的45%,具体组成如图所示。

血液的功能主要有运输、防御、调节人体温度、调节渗透压和人体酸碱平衡四个,除此以外血液还携带着大量人体健康信息,这也是为什么我们体检都会查血验血的原因。

血沉的过程

血沉就是红细胞沉降率的简称,它的本意是指人体血液中红细胞在一定条件下沉降的速度,而目前通常是指将加入了抗凝剂的全血放入血沉管中垂直静止一个小时后后,红细胞下沉的毫米数,单位是mm/h。

血沉的过程是一个非线性的过程,它会受到力学和流变学等多方面因素的相互影响和作用,但是我们一般将血沉的过程划分为三个阶段:

钱串期:

血沉的前期,在此阶段血液中的红细胞会重叠粘合,进而形成滣线红细胞,一般此阶段的时间为血沉开始前10分钟。

快速沉降期:

血沉的中期,在此阶段红细胞会快速进行沉降,在血沉前期形成的滣线红细胞会快速下降,一般此阶段的时间为40分钟。

聚集期:

血沉的后期,在此阶段红细胞会缓慢沉降聚集,最后堆积在血沉管底部,也叫细胞堆积期。

影响血沉的因素

血沉是多种因素相互作用得到的结果,是一个非常复杂的过程,影响血沉的因素很多,目前已知的影响血沉的外部原因有:

1、血沉管倾斜程度:

测量血沉时所用的测量管相对于水平面的倾斜角度会很大程度的影响到红细胞沉降的快慢。

原因是当管子与水平面成90°

时红细胞受到的阻力比较大,沉降的速度就会比较慢,当管子倾斜一定角度时红细胞就会沿着一侧下降,此时血浆会沿着另一侧上升,红细胞沉降时受到的阻力将会减少[20],所以理论上说将管子倾斜一定角度会大大减少测量血沉所需要的时间,不失为快速检测血沉的可能性方法之一。

2、血沉管直径:

测量血沉时所用的测量管内径的大小会直接影响到红细胞沉降的速度,当测量管内径为到3mm之间时,管子的内径越大红细胞沉降的速度会越慢,内径越小红细胞沉降的速度会越快[21]。

3、血沉管清洁程度:

使用魏氏法测量血沉时,魏氏管并不是一次性的,在测量完成以后需要人工清洗。

由于管子内径小等问题,人工清洗时不能够保证魏氏管内壁的清洁,当魏氏管内壁不洁净有蛋白质粘附等问题时均会导致红细胞沉降速度减慢。

4、血沉管中添加抗凝剂的不同:

利用魏氏法测量血沉时,所用的抗凝剂应该为109mmol/L的枸橼酸钠,并且保证抗凝剂和血液的比例保持在1:

4的比例[18]。

当使用不同的抗凝剂作为添加剂时,有的添加剂中的成分会与血液中某些成分进行化学作用,从而影响到红细胞沉降的快慢。

5、温度:

环境温度也会对血沉测量有一定的影响,有研究证明,同一病人在环境温度不同的时所测得的血沉值大小有所不同[6]。

温度升高时,红细胞沉降率也会升高,当环境温度平均变化10℃时,血沉值会增加20个mm[6],所以一般来说在测量血沉时也会涉及到温度补偿。

内部原因有:

1、红细胞[20]:

在一般情况下,红细胞的沉降能力和血浆的回流阻力处于平衡状态。

但某些情况导致红细胞总面积减少,承受血浆的阻力也会将会减少,红细胞沉降率会加速,相反地,当红细胞增多时沉降率会降低。

另外当红细胞直径越大,厚度越小的时候,沉降率会越快,而相反的球形红细胞不容易形成滣线型红细胞,沉降率会有所下降。

2、血浆[21]:

在一般正常情况下,红细胞膜表现的唾液酸带有负电荷,可以形成zate电位,它会使红细胞相互排斥从而保持其悬浮稳定性,红细胞沉降率会因此变慢。

当血浆蛋白和球蛋白增多,会使zate电位降低,红细胞间的相互排斥力会降低,沉降率会加快。

与此相反,当白蛋白和糖蛋白增多时,阻力加大沉降率会降低[1]。

综上所述,影响红细胞沉降率的因素有很多,其内因通常导致其个体差异以及病理性体现,而影响其测量准确性最主要的原因是管子直径、管子倾斜度以及管子清洁程度三个。

血沉检测方法简介

传统血沉测量方法

1、魏氏法:

魏氏法(图)是传统测量血沉方法,也是国际血液学标准化委员会推荐的测量血沉的唯一标准方法。

下文以及此处所提到的魏氏法均表示[18]:

将109mmol/L枸橼酸钠作为抗凝剂和血液按照1:

4比例手工混匀十次后,吸入魏氏管(长度为300mm,内径为,刻度为200)0刻度线处,静置一小时后,读取凹液面的差值,得到血沉值的方法。

这种方法测量需要一个小时,并且需要人工操作、人工读数,会带来很大的人工误差。

另外魏氏法是一个开放环境,安全性相对较低,人工清洗等步骤耗时多都是无法忽视的缺点,这也是人们不断尝试研究全自动血沉仪的原因。

2、库氏法:

测量血沉用的管子长为70mm,内径为5mm。

也是手动翻转摇匀十次静置一小时后读取差值,得到血沉的结果。

3、温氏法:

温氏法测量血沉时所用的管子长为120mm,内径为,相对于血沉,他更多的利用于血流变实验中。

它提出了贫血在测量血沉时的校正曲线,修正了因为贫血所带来的血沉测量结果偏差。

快速检测法

1、“血沉架法”[26]:

血沉架法(图)改变了血沉管的长度和直径,利用长度为120mm、外径为9mm的抗凝管,加入适量血液,手动翻转混匀十次以后放在水平调节过后的血沉架上,静置三十分钟后所得的结果即为血沉值。

这种方法在1992年由周正荣[26]先生提出并申请专利,最初的目的是为了方便偏远山区进行血沉的测量,在最近十年广泛应用于国内血沉仪的生产和制造,成为目前国内全自动血沉仪主要的设计原理。

在实用价值上,这种方法减少了测量时间,避免了血液污染的问题,并且其和魏氏法测量的相关性也较高。

2、倾斜法:

倾斜法就是将管子,倾斜一定角度。

在上文影响血沉的因素时已经提到将血沉管倾斜一定角度,会加快血沉速度。

所以,在考虑如何加快血沉测量并且保持其准确性的时候,倾斜法是值得考虑和实践的方法之一。

通过阅读文献,发现选择的角度应在15°

到18°

之间,相关研究表示,不同的倾斜角度在不同的时间内测得的血沉值结果和魏氏法有一定的相关性。

3、离心法:

离心法是将要测量的血液进行离心处理。

将血液混匀之后,旋转试管两分钟后通过吸样针吸取适量血液,添加到毛细管中后还需要将毛细管离心处理,通过波长为950nm的红外线测微光度计进行测量,并将单位时间内的测量脉冲信号变化秒回成函数,再通过线性回归将检测到的信号下降均值记为中位信号后,将信号积分后的平凡根就可以换算成血沉值。

随着时间的推移,人们为了准确快速的测量血沉,使其能够更好的应用于临床,研究创造了许多仪器用以测量血沉。

目前国内外几乎都是以全自动血沉仪为主,以下将以国内为主,简述国内外全自动血沉仪的研究发展现状。

国内血沉仪研究发展现状

近十年来,全自动化血沉仪得到了极大的发展。

目前的国内的全自动血沉仪都能实现自动读数,能够自动进行温度校正,大多以20个孔位或者40个孔位为主。

大部分仪器不能实现每分钟读数的功能。

以越华和普朗医疗公司生产的全自动血沉仪为例,两者都有良好的测量准确性,越华为20孔位,普朗医疗为40孔位,能自动进行温差校正,普朗医疗可以实现每分钟读数。

其中测量血沉的规定温度为18℃到25℃之间[29],全自动血沉仪能在测量温度为15℃到30℃时,将温度修正到魏氏法测量血沉时的标准温度℃[7]。

全自动血沉仪的方法学原理

就国内而言,现大多数是利用的“血沉架法(见上文)”。

在测量中,使用长度为120mm,外径为9mm的抗凝管,将抗凝管手动翻转混匀十次以后放入全自动血沉仪中,半小时之后就能自动读取下降值,但是这并不是最终结果。

虽然周先生申请的血沉架专利是直接读取结果作为血沉值,但是其实血沉架是经过处理的,血沉架读数间隔有所不同,由于血沉架本身是经过修正的,所以才能直接读数。

而我们的仪器读取的数值,就是红细胞沉降的数值,故而需要对机器读取的值进行公式修正,得到的才是最终的血沉值。

在本次课题中所涉及到的两种不同型号的全自动血沉仪都是使用的这种基础方法进行创造设计的。

全自动血沉仪测量原理

利用人工读数和测量,难免存在很多人为误差,为了避免人工误差,血沉仪的设计都会有自动读数的模块,目前血沉仪测量方式大多选用红外线障碍法[27]。

利用红外线具有可见光的一般特性外还具有穿透某些物质或被某些物质吸收、反射的特点,红外线障碍法成为了自动检测血沉的最佳办法。

如下图所示,在长度为h这一段中,一般情况下有成对的红外线发射--接收按照每分钟一次的频率运行,当发射器从上往下运行时,由于血沉管中c段区域有大量的红细胞,红外线由于无法穿透红细胞而不能通过,但是当红细胞开始沉降,沉降的这一段长度中只有血浆的存在,红外线能够穿透血浆而被接受,这样经过接收器接受后可以记录到步进马达此时的位置,也就是可以得到这段长度的值,而这个值也就是相应的时间内的血沉值。

国外全自动血沉仪研究发展现状

国外的全自动血沉仪发展就相对较为多样化,意大利的仪器相对比较先进。

目前意大利DISSE

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