肝炎病毒核酸检测及临床诊疗最新进展PPT文档格式.ppt

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l欧洲肝病研究学会EASL2011指南指出：

丙肝患者治疗的目标需HCVRNA病毒载量低于50IU/ml。

（一）

（一）核苷核苷（酸酸）类似物治疗慢性乙肝路线图类似物治疗慢性乙肝路线图治疗第治疗第12周周评估原发性治疗失败评估原发性治疗失败HBV-DNA水平较基线水平下降幅度水平较基线水平下降幅度1log/ml开始治疗开始治疗HBV-DNA基线水平监测基线水平监测病毒学完全应答病毒学完全应答HBV-DNA2000IU/ml增加增加/更换有效的药物治疗更换有效的药物治疗监测监测HBV-DNA/6个月个月治疗第治疗第24周周评估抗病毒疗效的早期预测因子评估抗病毒疗效的早期预测因子60IU/ml如何检测？

国际治疗路线国际治疗路线*由美国坦福大学医学中心由美国坦福大学医学中心KeeffeKeeffe教授（专家组）提供教授（专家组）提供国内行业指导原则国内行业指导原则n国家SFDA技术审评中心“863”课题HBVDNA定量试剂技术审评指导原则中指出：

lHBVDNA建议最低检测限应30IU/mL。

lDNA提取纯化方法不建议采用煮沸法进行DNA提取。

国内行业标准国内行业标准内标全程参与！

核酸上样量20ul！

国内现状国内现状加热煮加热煮沸沸高速离高速离心心过柱吸过柱吸附附n陈旧的技术n繁琐的过程国内现状国内现状国内HBVDNA检测方法多为煮沸法，试剂灵敏度均为500IU/ml或1000IU/ml。

国内大部分HCVRNA检测方法多为柱提法，试剂灵敏度1000IU/ml。

n令人揪心的性能专家呼吁专家呼吁五种乙型肝炎病毒核酸荧光定量检测试剂盒的比较,中华传染病杂志，2009年第3期吴星,黄维金,周诚,庄辉等（中国药品生物制品检定所,北京大学医学部）国家“十一五”科技重大专项“乙型和丙型病毒性肝炎诊断及临床监测的研究”鲁凤民教授北京大学肝炎试剂研究中心n专家呼吁：

高精度，超敏感的核酸诊断试剂的开发是目前肝炎诊疗中的关键步骤！

何去何从何去何从面对当前肝病毒核酸检测技术的现状，我们真没有办法了吗？

解决方案解决方案Part1肝病PCR检测国内外需求及现状Part2肝病PCR检测最新解决方案Part3肝病PCR检测的发展趋势临床核酸提取技术的发展：

临床核酸提取技术的发展：

煮沸法煮沸法酚氯仿法酚氯仿法旋转离心柱法旋转离心柱法玻璃粉吸附法玻璃粉吸附法二氧化硅吸附法二氧化硅吸附法磁珠法磁珠法国内主流方法国内主流方法国际主流方法国际主流方法核酸检测发展要求核酸检测发展要求核酸检测发展要求核酸检测发展要求p高精度高精度p高品质高品质p高科技高科技磁珠法技术磁珠法技术磁珠（电子显微镜）磁珠分离器p磁珠法磁珠法-核酸诊断领域新方向。

核酸诊断领域新方向。

技术原理技术原理DNA磁珠与DNA的结合-通过超顺磁性颗粒富集通过超顺磁性颗粒富集核酸，实现样品高纯度、高核酸，实现样品高纯度、高灵敏度的检测。

灵敏度的检测。

p原理原理技术性能技术性能l磁珠法提取核酸效率高，纯度高，特异性好。

l采用最新一代的磁珠提取核酸技术，无需加热、无需高速离心、灵敏度极高，能够很好的满足临床诊疗的需求。

l抗干扰能力强，能胜任高血脂、强溶血以及药物治疗标本的检测，是临床疾病检测的有力手段。

l极易实现自动化。

灵敏度可达灵敏度可达10IU/ml，是国，是国产主流主流试剂的的50-100倍；

倍；

准确定量准确定量线性范性范围为20IU/ml2.0109IU/ml可可检测HBVA、B、C、D、E、F、G、H共共8个基因型。

个基因型。

设置了置了监控内控内标IC,有效避免假阴性。

有效避免假阴性。

设置内参比置内参比荧光光ROX，定量更准确。

，定量更准确。

u以湖南圣湘乙肝磁珠法为例临床验证和对比临床验证和对比临床验证和对比临床验证和对比u以湖南圣湘乙肝磁珠法为例*9例定值在1250IU/ml之间圣湘磁珠法技术在灵敏度方面存在明显优势，与进口试剂具有很好的一致圣湘磁珠法技术在灵敏度方面存在明显优势，与进口试剂具有很好的一致性，能够很好的胜任临床药物疗效的观察和治疗终点的确定。

性，能够很好的胜任临床药物疗效的观察和治疗终点的确定。

Sansure-HBV：

圣湘HBV磁珠法Roche-HBV：

罗氏AmpliPrep-CobasTaqManHBVTestX-HBV：

国内一家上市公司的HBV产品（浓缩煮沸法）发展趋势发展趋势Part1肝病PCR检测国内外需求及现状Part2肝病PCR检测最新解决方案Part3肝病PCR检测的发展趋势发展趋势发展趋势（2533+2883）15=？

n简单化的要求发展趋势发展趋势一步法技术：

最简便的PCR技术一步操作即可实现核酸提取。

发展趋势发展趋势一步法技术优势：

l快速，处理96个样本仅需30min。

l成本低，仅需一套移液器即可实现病毒检测。

l操作步骤少，减少误差发生率，提高准确性。

l极易掌握，对操作人员要求低，方便科室的人员安排。

发展趋势发展趋势n准确化的要求-内标监测系统，假阴性的克星。

内标的作用内标的作用内标参与核酸提取与扩增，通过检测内标是否正常来监测核酸提取和核酸扩增的有效性，试验结果是否有效，避免PCR假阴性。

FAM:

525nmHEX:

555nm目的基因目的基因内标内标真阴性真阴性HEX曲线曲线FAM曲线曲线设置了参比荧光ROX，用于校正枪的误差、耗材质量（如管盖厚度、透光性能不一致）所导致的光能损失、仪器孔间差异，使结果更准确。

没有经过ROX校正经过ROX校正注*：

2倍梯度稀释，5个样本各重复3次检测ROXROX的作用的作用发展趋势发展趋势n自动化的要求不管技术多么复杂或简单，PCR技术逐步向自动化、高通量的方向发展！