抗核抗体检测及临床应用优质PPT.pptx
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+SLE+-nRNP:
+Sm:
-SLE或MCTD-+结果不可靠无抗核抗体（ANA）荧光片判读与讲解ANA筛查筛查:
间接免疫荧光法间接免疫荧光法（IFT）抗原谱完整（细胞核、细胞浆）检测ANA的金标准，具有很高的敏感性和特异性基质组合:
HEp-2细胞+灵长类肝读片要点HEp-2细胞:
选取多个视野判断HEp-2细胞:
分裂间期与分裂期细胞综合看HEp-2与肝片综合看根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：
ANA细胞核细胞浆抗核抗体荧光模型分类核均质型：
dsDNA、组蛋白和核小体等核膜型：
板层素、gp210等核糖核蛋白：
Sm、nRNP、SS-A、SS-B核颗粒型细胞周期蛋白：
I型（PCNA）和II型Ku核仁型：
Scl-70、RNA多聚酶、PM-Scl和原纤维蛋白等核浆点型：
着丝点、核点等胞浆颗粒型：
线粒体、Jo-1、核糖体等胞浆纤维型：
波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等分裂期细胞：
纺垂体、中间体、中心粒等核均质型肝片HEP-2HEp-2：
间期细胞核呈均匀荧光，分裂期细分裂期细胞浓缩染色体荧光增胞浓缩染色体荧光增强强肝片：
肝细胞核阳性，呈均匀荧光。
荧光强度与HEp-2基本一致靶抗原：
dsDNA、核小体、组蛋白核粗颗粒型肝片HEP-2肝片：
肝细胞核呈颗粒样荧光。
核仁阴性；
荧光强度与HEp-2基本一致HEp-2：
间期细胞核呈颗粒样荧光，核仁阴性；
分裂期细胞浓缩染色体阴性，染色体周围呈颗粒样荧光靶抗原：
nRNP、Sm核细颗粒型肝片HEP-2肝片：
部分核仁阴性；
荧光强度明显弱于HEp-2HEp-2：
间期细胞核呈细颗粒样荧光，部分核仁阴性；
SS-A、SS-B着丝点型肝片HEP-2肝片：
肝细胞核内可观察到10-20个荧光点；
荧光强度明显弱于与HEp-2细胞HEp-2：
间期细胞核内出现大小数目相同、均匀分布的点状荧光；
分裂期分裂期细胞浓缩染色体处细胞浓缩染色体处出现浓缩点状荧光出现浓缩点状荧光靶抗原：
着丝点蛋白核点型肝片HEP-2肝片：
肝细胞核内出现大小、数目不均一的点状荧光；
间期细胞核内出现大小、数目、强度不均的点状荧光；
分裂期细胞浓缩染色体阴性。
周围可见点状荧光靶抗原：
Sp100核膜型肝片HEP-2肝片：
肝细胞核呈现特征性环状荧光HEp-2：
间期细胞核呈现均匀荧光，核周增强；
分裂期细胞浓缩染色体阴性靶抗原：
板层素、gp210核仁型肝片HEP-2肝片：
肝细胞核仁阳性；
间期细胞核仁阳性；
靶抗原：
Scl-70、PM-Scl、RNA多聚酶、原纤维蛋白核仁型的多种模型原纤维蛋白PM-SclRNA多聚酶Scl-70胞浆颗粒型：
抗核糖体P蛋白抗体肝片HEP-2肝片：
灵长类肝组织中可呈现特异的由几个肝细胞浆融合形成的岛状荧光HEp-2：
间期细胞浆中出现致密的细颗粒样荧光，并有空泡现象，部分核仁阳性；
核糖体P蛋白胞浆颗粒型：
抗线粒体抗体肝片HEP-2肝片：
肝细胞呈颗粒样荧光，整个视野呈细沙状荧光HEp-2：
细胞浆内粗颗粒样荧光靶抗原：
线粒体胞浆颗粒型：
抗Jo-1抗体肝片HEP-2肝片：
荧光模式不典型HEp-2：
间期细胞浆中出现颗粒到细块状荧光，细胞核有时也出现细颗粒荧光；
分裂期细胞浓缩染色体阴性，染色体周围区域呈致密的细颗粒荧光靶抗原：
Jo-1胞浆颗粒型：
抗溶酶体抗体肝片HEP-2肝片：
细胞浆中出现细小的、中等大小的、以及粗的滴状荧光颗粒靶抗原：
溶酶体胞浆颗粒型：
抗高尔基体抗体肝片HEP-2肝片：
间期细胞核一侧的高尔基体所在部位呈现网状的颗粒样荧光；
分裂期细胞无荧光。
高尔基体抗中心粒抗体肝片HEP-2肝片：
在细胞核内可见一或两个荧光点，分裂期细胞中荧光点位于细胞纵向对称的两极抗纺锤体纤维抗体肝片HEP-2肝片：
仅见于分裂期细胞，纺锤体部位出现特征性荧光。
抗中间体抗体肝片HEP-2肝片：
分裂中期细胞中间水平方向产生带状细颗粒荧光，半数间期细胞含有大量粗荧光点，其余细胞为阴性。
常规片特点经常出现混合核型经常出现不典型核型中低滴度常见、经常出现临界滴度实验操作、实验体系等因素，会给荧光结果的判读带来不利影响。
均质+核点核颗粒+核仁均质+核仁ANA可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织病的诊断、病情判断和疗效观察的指标在非结缔组织病中也可出现阳性。
正常人中（特别是老年人）也可出现阳性，但滴度低，并且常表现为IgM型高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病目前，ANA检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验。
ANA检测的临床意义检测的临床意义美国风湿学会美国风湿学会（ACR）立场声明立场声明HEp-2HEp-2细胞包含大约细胞包含大约100至至150种种自身抗原自身抗原其它初筛方法仅具有少量自身抗原其它初筛方法仅具有少量自身抗原（8-10）细细胞包含大约胞包含大约100至至150种自身抗原种自身抗原其它初筛方法仅具有少量自身抗原其它初筛方法仅具有少量自身抗原（8-10）大约大约35%SLE患者和患者和IFT-ANA阳性患者阳性患者在其它初筛实验中为阴性结果在其它初筛实验中为阴性结果建议：
建议：
IFT-ANA仍然为仍然为ANA检测的金标准检测的金标准!
医院或商业诊断所应用其它医院或商业诊断所应用其它ANA检测方法时，必须要求为临床大夫提供足够检测方法时，必须要求为临床大夫提供足够的数据证明其它的数据证明其它ANA检测方法与检测方法与IFT比较具有同样或更高的敏感度和特异性比较具有同样或更高的敏感度和特异性.实验室在实验室在ANA报告当中必须注明报告当中必须注明ANA检测方法检测方法.EUROIMMUNHEp-2:
筛查不同的自身抗体筛查不同的自身抗体ANAhomogenNucleardotsCentromereANAnucleolarScl-70Sm/RNPSS-A/SS-BNuclearmemb.RibosomesMitochondriaGolgiapparat.LysosomesActinVimentin欧蒙推荐的欧蒙推荐的ANA稀释方案稀释方案欧蒙欧蒙ANAANAIIFIIF稀释方案稀释方案欧蒙欧蒙ANA间接免疫荧光法检测系统的起始稀释度为间接免疫荧光法检测系统的起始稀释度为1:
1001:
100。
即该。
即该检测系统的正常参考范围为检测系统的正常参考范围为1:
梯度稀释时的稀释因子为。
梯度稀释时的稀释因子为1:
3.21:
3.2。
推荐每个标本至少平行做两个稀释度：
1:
100和和1:
10001:
1000。
由于不同厂家由于不同厂家ANA检测系统的起始稀释度和稀释因子不同，检测系统的起始稀释度和稀释因子不同，因因而不同厂家的而不同厂家的ANA滴度结果不能直接进行比较。
滴度结果不能直接进行比较。
欧蒙研究：
各风湿病欧蒙研究：
各风湿病ANA阳性率在不同阳性率在不同滴度水平的分布滴度水平的分布欧蒙实验室推荐的欧蒙实验室推荐的ANA稀释方案稀释方案起始稀释度：
起始稀释度：
1001:
1,000报告结果报告结果EUROIMMUN原因原因1:
高滴度抗体在低稀释倍数时可能被非特异性反应遮盖高滴度抗体在低稀释倍数时可能被非特异性反应遮盖抗Yo抗体（猴小脑）1:
101:
100抗表皮基底膜抗体（喉舌）1:
100AMA（鼠肾）1:
1000pANCA（人中性粒细胞）1:
11:
10推荐一个标本平行作两个稀释度推荐一个标本平行作两个稀释度1:
10001:
1000
（1）
（1）原因原因2：
在低稀释倍数时多种自身抗体可能相互掩盖在低稀释倍数时多种自身抗体可能相互掩盖1:
1000ANA核均质型和着丝点型1:
100ANA核均质型和核仁型推荐一个标本平行作两个稀释度推荐一个标本平行作两个稀释度1:
1000
（2）
（2）推荐一个标本平行作两个稀释度推荐一个标本平行作两个稀释度1:
1000（3）（3）两个滴度平行检测：
两个滴度平行检测：
1,000，通过一次实验，就可估计抗体的滴度，通过一次实验，就可估计抗体的滴度1:
1,000ANA均质型（滴度1:
10,000）1:
1,000）1:
100ANAANA结果报告结果报告报告报告ANA结果时，应包括如下几个方面：
结果时，应包括如下几个方面：
-定性结果：
阴性或阳性。
定性结果：
-荧光模型：
看到的所有模型均应报告。
荧光模型：
-每种荧光模型的滴度。
每种荧光模型的滴度。
-建议：
如下一步的确认实验等。
慢性炎症性结缔组织病慢性炎症性结缔组织病（CICTD）慢性炎症性结缔组织病慢性炎症性结缔组织病（CICTD）SystemischerLupusErythematodes（SLE）干燥综合征（SS）系统性硬化症（SSc）RheumatoideArthritis（RA）多肌炎/皮肌炎（PM/DM）夏普综合征（MCTD）系统性红斑狼疮（SLE）ANCA相关性血管炎dsDNAScl70andCenpBMyositisProfileSSAandSSBRNP系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮（SLE）l红斑狼疮的特点红斑狼疮的特点临床大夫临床大夫:
容易误诊的一类致死性疾病容易误诊的一类致死性疾病免疫学家免疫学家:
所有免疫系统的要件均参与致病机理产生过程所有免疫系统的要件均参与致病机理产生过程l临床发病特点临床发病特点发病率发病率:
40/100,000（北欧北欧）;
200/100,000（黑人黑人）;
250,000（美国美国）患者寿命患者寿命:
4年年/50%（1950）;
15/80%（当前当前）;
20岁诊断岁诊断/35岁死亡几率岁死亡几率1:
6系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮（SLE）高度特异性抗体;
70%患者阳性，0.5%正常人或RA患者阳性滴度与疾病活动性相关，但不适用于所有患者抗体滴度上升但临床症状不明显的患者，抗体检测后5年内80%患者进入活动期抗抗dsDNAdsDNA抗体与抗体与SLESLE核均质核均质:
抗核小体抗体抗核小体抗体（ANuA）靶抗原:
dsDNA-组蛋白-复合物的构象决定簇方法:
IIFAELISA,Blot临床意义:
SLE,阳性率50-9
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