实用HPLC方法的建立PPT文件格式下载.ppt

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所含化合物的数目；

化学结构（官能团）；

分子量；

UVUV光谱图；

光谱图；

被测组分在样品中的浓度范围；

样品的溶解度、沸点及其稳定性；

可能存在的干扰物质及样品的复杂程度等。

nn1111分析大分子、小分子还是生物分子分析大分子、小分子还是生物分子分析大分子、小分子还是生物分子分析大分子、小分子还是生物分子一般常规的一般常规的HPLCHPLC分析分子量分析分子量20002000以下，大分子一般采以下，大分子一般采用凝胶色谱用凝胶色谱（包括凝胶过滤包括凝胶过滤、离子交换离子交换、亲和层析亲和层析、疏疏水层析）水层析）、生物大分子采用不能变性的色谱体系。

生物大分子采用不能变性的色谱体系。

nn2222样品是混合物、天然物质还是基本是单一物质。

样品是混合物、天然物质还是基本是单一物质。

如果是天然物质，一般分离完全采用梯度体系。

混合如果是天然物质，一般分离完全采用梯度体系。

混合物中是否有结构类似的异构体，组分复杂的还是采用梯物中是否有结构类似的异构体，组分复杂的还是采用梯度，是否是系列反应的产物。

度，是否是系列反应的产物。

nn3333测定是主成分、还是少量成分或痕量成分。

测定是主成分、还是少量成分或痕量成分。

主含量的测定一般比较容易；

但少量要考虑分离完全主含量的测定一般比较容易；

但少量要考虑分离完全的问题；

痕量成分则要考虑检测器的类型，采用何种提的问题；

痕量成分则要考虑检测器的类型，采用何种提取方法和检测的灵敏度等。

取方法和检测的灵敏度等。

nn4444分离化合物是极性，弱极性、非极性还是离子化合物、两性分离化合物是极性，弱极性、非极性还是离子化合物、两性分离化合物是极性，弱极性、非极性还是离子化合物、两性分离化合物是极性，弱极性、非极性还是离子化合物、两性化合物。

化合物。

nn非极性化合物以正相体系较多，如果溶于反相体系的溶剂，可非极性化合物以正相体系较多，如果溶于反相体系的溶剂，可采用反相体系。

采用反相体系。

nn弱极性、极性化合物采用反相较为方便，可在流动相中添加改弱极性、极性化合物采用反相较为方便，可在流动相中添加改性剂，调节合适的性剂，调节合适的pHpH。

nn离子化合物可以采用离子交换，也可添加离子对试剂离子化合物可以采用离子交换，也可添加离子对试剂；

或者采或者采用反相调节用反相调节pHpH。

nn两性化合物中水溶性差的可采用反相；

但在反相出峰快的则考两性化合物中水溶性差的可采用反相；

但在反相出峰快的则考虑离子交换；

也可考虑衍生后测定。

虑离子交换；

nn对于极性的糖类物质，可用对于极性的糖类物质，可用NH2NH2柱，有条件的用聚合物的糖柱。

柱，有条件的用聚合物的糖柱。

多糖类的则要采用凝胶系统。

nn大分子的极性化合物、离子化合物，往往采用特定的色谱柱，大分子的极性化合物、离子化合物，往往采用特定的色谱柱，多为聚合物柱子。

多为聚合物柱子。

nn手性化合物，则要用手性流动相或者采用手性柱。

手性化合物，则要用手性流动相或者采用手性柱。

nn5555样品的溶解度、沸点样品的溶解度、沸点样品的溶解度、沸点样品的溶解度、沸点nn样品在不同溶剂中的溶解度，对色谱条件的选择非常重样品在不同溶剂中的溶解度，对色谱条件的选择非常重要，测定其溶解的性能，则可以判断其化合物可能的类要，测定其溶解的性能，则可以判断其化合物可能的类型型。

nn非极性样品不溶于水，但溶于有机溶剂。

如果只能溶于非极性样品不溶于水，但溶于有机溶剂。

如果只能溶于非极性溶剂，一般建议做正相。

溶于极性溶剂，以反相非极性溶剂，一般建议做正相。

溶于极性溶剂，以反相为上策。

极性化合物在水和极性溶剂中一般都有一定的为上策。

极性化合物在水和极性溶剂中一般都有一定的溶解度。

溶解度。

nn极性和离子化合物一般都溶于水，但在不同极性和离子化合物一般都溶于水，但在不同pHpH下区别可下区别可能很大。

能很大。

nn从溶解度可以判断出采用何种体系为佳。

从溶解度可以判断出采用何种体系为佳。

nn易挥发性的低沸点的物质在易挥发性的低沸点的物质在ELSDELSD中难以检测。

中难以检测。

nn6666样品的稳定性样品的稳定性样品的稳定性样品的稳定性nn如果样品存在水解、光解、醇解、氧化、分解则测定如果样品存在水解、光解、醇解、氧化、分解则测定时需注意。

时需注意。

nn对光敏感物质，用棕色瓶避光保存，不宜存放过久，对光敏感物质，用棕色瓶避光保存，不宜存放过久，随配随做。

随配随做。

nn易水解的物质，、要选择合适的溶解溶剂。

易水解的物质，、要选择合适的溶解溶剂。

nn有些样品可能存在醇解，流动相不能用甲醇，而要用有些样品可能存在醇解，流动相不能用甲醇，而要用乙腈。

乙腈。

nn易氧化的物质，溶解时可考虑加抗氧剂，调节易氧化的物质，溶解时可考虑加抗氧剂，调节pHpH，如如PAPPAP（对氨基苯丙酮）的测定。

胺类化合物。

对氨基苯丙酮）的测定。

nn产品不稳定的化合物，分析越快越好。

产品不稳定的化合物，分析越快越好。

nn7777化合物的化学结构化合物的化学结构化合物的化学结构化合物的化学结构（官能团）（官能团）nn常见的基本结构是苯环、杂环、多环芳烃。

基团有常见的基本结构是苯环、杂环、多环芳烃。

基团有COOHCOOH、OHOH、NH2NH2、SO3HSO3H、ClCl（BrBr）、）、CHOCHO、COCO、CH3CH3、C2H5C2H5、N=NHN=NH、SOSO、SO2SO2、-O-O-等。

等。

nn亲水性的基团在反相中出峰时间前移，疏水性的基团亲水性的基团在反相中出峰时间前移，疏水性的基团出峰后移。

出峰后移。

nn从存在的结构可以判断出其在溶剂中的溶解度。

从存在的结构可以判断出其在溶剂中的溶解度。

nn88化合物的化合物的pKpK值值nn知道知道pKpK值，有助于方法的建立，尤其流动相值，有助于方法的建立，尤其流动相pHpH的选择。

的选择。

nnpKpK的差异是官能团造成的。

的差异是官能团造成的。

nn9UV9UV光谱图光谱图nn知道其吸收波长的曲线有助于检测，如果有知道其吸收波长的曲线有助于检测，如果有DADDAD则则关系不大。

多组分的样品，宜多选几个波长。

关系不大。

nn同一样品在不同的流动相及同一样品在不同的流动相及pHpH最大波长可能不一最大波长可能不一致。

致。

nn有双键共轭的结构紫外吸收较大，单键的则在低有双键共轭的结构紫外吸收较大，单键的则在低紫外区有一定的吸收紫外区有一定的吸收nn1010样品的复杂层度样品的复杂层度nn梯度方法分析梯度方法分析nn预处理预处理,分成几个部分分析分成几个部分分析nn痕量物质的富集痕量物质的富集nn总之，充分了解了被分离样品的性质，将可能提总之，充分了解了被分离样品的性质，将可能提供一个参考的分析条件，缩短分析时间和分析难供一个参考的分析条件，缩短分析时间和分析难度。

度。

2.22.2明确分析目的明确分析目的nn11定量分析？

检出某种物质？

未知物的确定？

纯化制备定量分析？

纯化制备？

光谱鉴定？

nn22是否将所有组分分开，定性？

一种条件有困难？

分组是否将所有组分分开，定性？

分组分析？

分析？

nn33定量分析的准确度和精密度？

（主成分在定量分析的准确度和精密度？

（主成分在1122）nn44不同样品基质对分离的影响（如原料药、粗品、精品、不同样品基质对分离的影响（如原料药、粗品、精品、残留、环境样品等）残留、环境样品等）nn55分析的工作量，少数还是大量？

时间和效率与分离的分析的工作量，少数还是大量？

时间和效率与分离的选择。

选择。

nn66实验室的条件，如实验室的条件，如HPLCHPLC仪器的配置和档次；

色谱柱系仪器的配置和档次；

色谱柱系统；

是否有恒温；

是否可以做梯度；

分析成本；

实验室统；

实验室人员的操作技能；

方法的移植等等。

人员的操作技能；

2.32.3样品的预处理与检测样品的预处理与检测nn样品来源的形式样品来源的形式nn11可直接进样的溶液（注意是否与流动相匹配）可直接进样的溶液（注意是否与流动相匹配）nn22需稀释、需稀释、pHpH缓冲、加内标或