中医药实验研究的专业设计精品文档PPT文件格式下载.ppt

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课题名称：

包括研究的主体、客体（和方法）。

研究内容：

如何得到研究结果。

二、实验观察的具体内容和方法对每一项具体的实验内容和方法从专业技术理论角度进行设计。

即是从专业技术理论角度考虑该实验或试验观察应该怎么做？

需要注意什么？

怎样才能排除干扰因素，使实验更为合理，结果更具说服力？

实验设计中的整体观念实验设计中的“整体观念”体现在考虑问题的全面性和严密性。

一一种种整整体体观观念念是是“大大呼呼隆隆”，选选了了大大量量的的指指标标，应应用用各各种种技技术术方方法法，前前人人已已做做过过的的都都要要重重复复再再现现，全面开花。

全面开花。

另一种是一项研究只深入解决一两个问题，但把有关各方影响因素尽可能都考虑到，逐一证实或排除，得到明确结论。

nucleuscytoplasmTGFTGF-RSmad2Smad3-Smad2-Smad3PPPSmad4GenetranscriptionRasRaf-1MEKNF-1SP-1Ras-MAPKPathwaySmadsPathwayMAPKPMARKERKJNKp38细胞核丹参酚酸丹参酚酸B（SA-B）B（SA-B）抑制抑制TGF-1TGF-1刺激的刺激的HSCHSC内内ERK1/2ERK1/2的磷酸化的磷酸化TGF-1（10ngml-1）SA-B（10-6ML-1）-+-+-p-ERK1-p-ERK2-ERK1ERKTGF-1受体PDGF受体细胞核Smades胶原酶中中药药胶原蛋白胶原蛋白TGF-1PDGF-BB肝星状细胞WalterKOLCH.WalterKOLCH.BiochemBiochem.J.（2000）351,289-305.J.（2000）351,289-305TGF-1TGF-1的的MAPKMAPK通路中的通路中的细胞外信号调节激酶细胞外信号调节激酶（extracellularextracellularsignal-regulatedsignal-regulatedkinasekinase，ERKERK）通路与纤维化发生密切相关。

通路与纤维化发生密切相关。

1、SA-B抑制抑制TGF-1刺激的刺激的HSC内内ERK1/2的磷酸化的磷酸化TGF-1（10ngml-1）SA-B（10-6ML-1）+-+-+-TGF-1（10ngml-1）SA-B（10-6ML-1）-+-+-+p-ERK1p-ERK2ERK12SA-B抑制抑制TGF-1刺激的刺激的HSC内内MEK的磷的磷酸化酸化TGF-1（10ngml-1）SA-B（10-6ML-1）-+-+-+MEK1-actinP-MEK-actin3、SA-B对对TGF-1刺刺激激的的HSC内内Raf的的磷磷酸酸化无明显影响化无明显影响TGF-1（10ngml-1）SA-B（10-6ML-1）-+-+-+Raf-1-actinP-Raf-actin实验观察对象医学研究的实验观察对象一般分为人、动物和组织细胞三类。

实验对象应具备两个基本条件：

对处理因素敏感；

对处理因素的反应必须稳定。

体内实验和体外实验体内实验（invivo）：

实验对象是正常的实验动物、已制作成类似于人类疾病的模型动物、天然基因缺陷或基因变异的动物、转基因或基因剔除的动物等。

体外实验（invitro）：

现在多指组织或细胞体外培养的一类实验，实验对象是培养的器官、组织、原代或传代培养的细胞或细胞株。

两种实验类型的特点和适用范围体内实验体内实验体外实验体外实验实验周期实验周期急性实验较短，急性实验较短，一般较短，但须重复。

一般较短，但须重复。

慢性实验较长。

实验设备实验设备较少需要。

较少需要。

需要细胞分离设备、超净需要细胞分离设备、超净和耗材和耗材工作台、培养箱和显微镜等，工作台、培养箱和显微镜等，用于培养的耗材量较大。

用于培养的耗材量较大。

实验条件实验条件受体内多系统的影响，受体内多系统的影响，可控性强。

可控性强。

较难控制。

组内差异组内差异存在个体差异，存在个体差异，同源细胞差异不明显，同源细胞差异不明显，样本例数需要较多。

样本例数需要较多。

样本例数需要少。

技术要求技术要求需动物实验技术，需动物实验技术，需细胞分离培养技术，需细胞分离培养技术，难度较低。

难度较低。

难度较高。

适用范围适用范围药效学研究、毒理学研究，药效学研究、毒理学研究，大通量药物筛选、大通量药物筛选、整体水平上形态和功能方面整体水平上形态和功能方面组织、细胞水平上发病机制、组织、细胞水平上发病机制、的分子生物学和药理学研究。

的分子生物学和药理学研究。

分子生物学和药理学研究。

目前相当多的研究是两种实验研究互相交叉，例如应用克隆技术和转基因技术的应用。

利用体外实验的方法研究中药复方的药理作用。

从模型动物中分离细胞作体外研究。

不同的实验要解决的具体问题不同，须根据需要选择适当的实验类型。

有部分初学者认为体外实验的水平比体内实验要高，这种观点是没有根据的。

对大多数体内实验来说，需慎重选择实验动物的种类和品系。

应尽量选择那些机能代谢、结构和人类相似的实验动物。

要选择那些解剖、生理特点符合实验目的要求的实验动物。

选用不同种系实验动物的某些特殊反应，使之适合于不同研究目的的需要。

应选用对同一刺激反应大的品系动物。

实验动物的随机化分组随机化的特征：

不可预测性无人力干预不以人们的意志为转移独立于时间随机，随意，随便实验动物的随机化分组实验动物随机化的意义：

让每个动物均有平等的机会被选中。

随机化方法可以避免抓动物过程中产生的偏差，使每只动物都有均等的机会被选入任何组。

分配完毕，每个组都有老的少的，重的轻的。

表面上看起来乱哄哄，从总体看来却是相当均衡的。

这种以乱对乱的方法是达到均衡的手段。

实验动物的随机化分组提高显著性检验的灵敏度随机化分配的起始P值多为0.2-0.4，容易达到P0.05，即检验是敏感的。

系统化的起始P值靠近0.95，检验不灵敏。

以F检验为例：

F=组间方差/剩余方差也可写成F=组间方差/（总方差-组间方差）系统化：

组间方差小，剩余方差大，F不灵敏随机化：

组间方差大，剩余方差小，F较灵敏实验动物的随机化分组随机化随机化AABBCCDD0.5710.5710.9100.9100.4180.4180.1960.196组间方差：

组间方差：

0.035190.035190.3650.3650.7580.7580.1240.1240.8290.829剩余方差：

剩余方差：

0.094170.094170.3750.3750.0990.0990.8590.8590.4950.495F=0.37371F=0.373710.5110.5110.8150.8150.9800.9800.3550.355P=0.77354P=0.773541.8221.8222.5822.5822.3812.3811.8751.875=8.660=8.660=2新组间方差F值P值P+A0.512571.8143430.19742+B1.272574.5045130.024490.05+C1.719576.086760.00938650.05+B0.7792.524300.0613440.05+C0.7732.504850.1080070.05+D0.6932.245620.1346430.05人类疾病动物模型的选择按对象或材料可分为：

按对象或材料可分为：

动物模型、细胞模型、微动物模型、细胞模型、微生物模型、数学模型等；

生物模型、数学模型等；

按复制形式分：

有自发性疾病模型，实验诱发性有自发性疾病模型，实验诱发性模型等。

模型等。

按用途分：

有机制性疾病模型、疗效性疾病模型有机制性疾病模型、疗效性疾病模型等。

等。

能否作为人类疾病模型，必须具有三个条件：

必须反映现实原型的本质特征或关系；

能对能对所研究的问题进行定性、定量分析；

所研究的问题进行定性、定量分析；

在模型上在模型上得出的结果能用在原型中解决实际问题。

得出的结果能用在原型中解决实际问题。

人类疾病模型在医学科学研究中的主要用途

（1）探讨和揭示疾病的发病因素，发病机制、病理变化和病程转归。

（2）探讨或寻求新的诊断和治疗方法。

（3）筛选和研制新药。

证证候候模模型型一一直直是是中中医医学学界界关关注注的的问问题题，但但由由于于证证候候的的病病理理本本质质尚尚未未探探明明，即即缺缺乏乏证证候候原原型型的的本本质质特特征征的的参参比比，尚尚需需作作长长期期的的探探索索和和积积累累。

当当前前中中医医药药研研究究仍仍以以疾疾病病模模型型为为主主，进进行行药药效效学学观观察察或或以以药药（复方方剂复方方剂）测证。

测证。

人类疾病动物模型选择的基本原则（一一）尽尽可可能能选选择择与与人人类类疾疾病病相相近近相相似似的的模模型型。

自自发发性性疾疾病病模模型型和和转转基基因因动动物物模模型型较较理理想想。

但但品品种种有有限限，且较难获得，因而多需要人工诱发复制。

且较难获得，因而多需要人工诱发复制。

（二二）选选用用的的模模型型要要稳稳定定，具具有有良良好好的的可可重重复复性性。

不不同动物个体之间的差异越小，稳定性越好。

同动物个体之间的差异越小，稳定性越好。

（三三）注注意意适适用用性性和和可可控控性性。

选选用用动动物物必必须须适适合合于于某某种种模模型型的的制制备备要要求求，复复制制出出的的模模型型要要适适合合于于研研究究目目的；

所用动物及复制出的模型要易于控制。

的；

（四四）应尽可能采用国际认可的模型及造模方法。

应尽可能采用国际认可的模型及造模方法。

（五五）复复方方作作用用机机制制或或以以方方测测证证的的研研究究因因尽尽可可能能采采用用同一疾病不同发病机制的多种模型。

同一疾病不同发病机制的多种模型。

体外实验应根据细胞的特点来选择以满足于不同的实验要求。

原代培养的细胞原代培养的细胞可用于增殖实验，但不能传代的细胞一可用于增殖实验，但不能传代的细胞一般不宜用作细胞增殖实验，般不宜用作细胞增殖实验，细胞株细胞株因增殖率几近极限，也不因增殖率几近极限，也不能用于增殖实验。

能用于增殖实验。

原代培养的细胞原代培养的细胞的特性最接近体内生长环的特性最接近体内生长环境中的生物特性，但是要获得大量高纯度细胞，对分离技术境中的生物特性，但是要获得大量高纯度细胞，对分离技术要求高；

要求高；

传代培养的细胞传代培养的细胞数量多、纯度高，适宜作生长和功数量多、纯度高，适宜作生长和功能的抑制实验，但是此时细胞特性可能与其