分析方法验证方案Word下载.docx
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分析测试
数据评估
质量部
审核批准
验证容:
-
序列号
确认测试项目
可接受标准
01
01.1
01.2
高效液相色谱仪的确认
天平的确认
符合仪器设备的确认要求
02
02.1
具体测试容
系统精密度
配置1份异烟肼工作标准溶液，连续进针6次，记录异烟肼峰面积、保留时间。
异烟肼峰面积RSD≤2.0%,保留时间RSD≤2.0%。
异烟肼理论塔板数大于4000，拖尾因子在0.9～1.4之间。
02.2
方法精密度
平行配制同一批样品的6份样品溶液，每份溶液进样2针，计算样品含量及其相对标准偏差。
样品含量的RSD≤2.0%。
02.3
线性和围
以异烟肼工作标准品溶液的浓度为100%，配制20%、60%、100%、140%、180%浓度的工作标准品溶液，每个浓度的标准品溶液进样1次，计算出回归方程和相关系数R。
R≥0.999
02.4
准确度
以异烟肼工作标准品溶液的浓度为100%，取同一批样品，配制浓度为80%、100%和120%的样品溶液各3份，每份进样2针。
计算其回收率。
该定量方法的回收率应为98.0%～102.0%。
02.5
耐用性
配制异烟酸和异烟肼混合溶液，按下列条件改变方法，稳定后按顺序进样，计算异烟肼的理论塔板数，混合溶液中异烟酸和异烟肼的相对保留时间RRT。
a.改变流速为0.9ml/min和1.1ml/min。
b.改变柱温为23℃和27℃。
c.改变流动相缓冲液与甲醇配比为83:
17和87:
13。
d.同一填料不同色谱柱。
理论塔板数大于4000，拖尾因子在0.9～1.4之间,分离度R＞1.5，相对保留时间RRT偏差绝对值不大于20％。
03
03.1
03.2
03.3
03.4
程序及文件
液相色谱仪校正规程
液相色谱仪操作规程
分析天平校正规程
分析天平操作规程
符合要求
验证前准备：
a）人员培训：
培训人
培训时间
培训容
b）仪器设备、标准品和试剂：
仪器设备
仪器名称
型号
编号
校验有效期
高效液相色谱仪
MODEL200
标准品和试剂
名称
级别
厂家
批号
c）样品
验证过程：
色谱条件
色谱柱：
agilentODS-2长度：
250cm，径：
4.6mm，填料C18，填料粒度：
5µ
m
检测波长：
262nm，带宽30
柱温：
25℃
进样量：
20µ
l
流速：
1.0ml/min
流动相A：
0.02mol/l磷酸氢二钠溶液（用磷酸调pH至6.0），流动相B：
甲醇
A:
B=85:
15
停止时间：
12min
1.系统精密度
1.1.溶液配制
系统精密度溶液：
取异烟肼10mg，置100ml容量瓶中，精密称量，用水溶解并稀释至刻度。
1.2验证过程及结果
系统精密度溶液连续进样6次，记录其异烟肼峰面积、保留时间。
可接受标准：
序号
保留时间（min）
峰面积
1
2
3
4
5
6
RSD%
结论：
2.重现性试验（方法精密度）
2.1.溶液配制
2.1.1.对照溶液：
取异烟肼工作标准品10mg，精密称量，置100ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。
2.1.2.方法精密度溶液：
取异烟肼样品10mg置100ml容量瓶中，精密称定，用水溶解并稀释至刻度。
用此方法配置同一批号的样品溶液6份。
2.2.验证程序及结果
工作标准品溶液进2针，样品溶液各进2针。
记录异烟肼峰面积，计算样品含量。
异烟肼含量的RSD≤2.0%。
样品批号：
称样量（mg）
含量％
RSD％
平均值
3.线性和围
3.1.溶液配制
3.1.1.a供试品溶液：
取异烟肼50mg，置100ml容量瓶中，精密称量，用水溶解并稀释至刻度，混匀，即得。
3.1.2.线性点溶液：
精密移取a供试品溶液5ml、2ml、1ml、分别置10ml容量瓶中，用水稀释至刻度，得到浓度约为50ug/ml（d供试品溶液）、100ug/ml（c供试品溶液）、250ug/ml（b供试品溶液）、500ug/ml（a供试品溶液）的线性点溶液，再精密移取1mlb供试品溶液1ml置100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，得到浓度约为2.5ug/ml（e供试品溶液）。
3.2.验证程序及结果
按色谱条件分别对线性点溶液进行分析，每个溶液进样1次。
以浓度为X轴，主峰峰面积平均值为Y轴，画出线性图，求出回归方程，计算线性相关系数R。
项目
（X1）
（X2）
（X3）
X4）
（X5）
线性点溶液浓度（ug/ml）
异烟肼峰面积
线性围（ug/ml）
线性回归方程
相关系数R
4.准确度
4.1.溶液配制
4.1.1.对照溶液：
取异烟肼10mg，置100ml容量瓶中，精密称量，用水溶解并稀释至刻度，混匀，即得。
4.1.2.准确度溶液：
以对照溶液浓度为100%，配置80%、100%和120%浓度的准确度溶液。
即分别取同一批异烟肼样品8mg、10mg、12mg至100ml容量瓶中，精密称量，用水溶解并稀释至刻度。
每个浓度的准确度溶液配制3份。
4.2.验证程序及结果
按照色谱条件分别对对照溶液和准确度溶液进行分析，每个溶液各进2针，按外标法计算准确度溶液中异烟肼含量，计算其回收率。
回收率RSD≤2.0%。
样品批号
相应含量
实测量（mg）
回收率％
80％
100％
120％
5.耐用性
5.1.溶液配制
5.1.1.混合溶液：
精密称取10mg异烟酸和10mg异烟肼样品置100ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，混匀，即得。
5.2.验证过程及结果
按下列条件改变方法，原条件溶液和改变色谱条件的顺序进样，计算异烟肼的理论塔板数,拖尾因子。
计算相对保留时间RRT偏差绝对值。
a.改变柱温为23℃和27℃
b.改变流速为0.9ml/min和1.1ml/min。
c.改变0.02mol/l磷酸氢二钠溶液（磷酸调pH至6.0）与甲醇配比为87:
13和83:
17。
d.选用同一填料的两个不同色谱柱比较
理论塔板数大于4000，拖尾因子在0.9～1.4之间。
分离度R＞1.5，相对保留时间RRT偏差绝对值不大于20％。
条件
异烟肼理论塔板数
异烟肼拖尾因子
原条件
a
0.9ml/min
1.1ml/min
b
23℃
27℃
c
87:
13
83:
17
d
色谱柱1
色谱柱2
异烟酸
RRT
偏差绝对值％
验证结论：
验证结果见表
验证项目
验证结果
判定
异烟肼的峰面积及保留时间的RSD％均不大于2.0％。
异烟肼理论塔板数大于4000。
RSD％不大于2.0％
线性回归系数R应大于0.999
回收率在98.0％-102.0%之间
分离度R大于1.5，相对保留时间RRT偏差绝对值不大于20％
偏差及处理：
分析方法验证过程中出现的所有偏差都要记录并有效评估和处理。
再验证
再验证周期为3年。
验证负责人/日期
审核人/日期
批准人/日期
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