植物细胞工程复习资料12页word文档文档格式.docx

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细胞培养技术（包括组织培养、器官培养）；

细胞融合技术；

胚胎工程技术（核移植、胚胎分割等）；

克隆技术（单细胞系克隆、器官克隆、个体克隆）。

（2）植物细胞工程包括：

植物组织、器官培养技术；

细胞培养技术；

原生质体融合与培养技术；

亚细胞水平的操作技术等。

要练说，得练听。

听是说的前提，听得准确，才有条件正确模仿，才能不断地掌握高一级水平的语言。

我在教学中，注意听说结合，训练幼儿听的能力，课堂上，我特别重视教师的语言，我对幼儿说话，注意声音清楚，高低起伏，抑扬有致，富有吸引力，这样能引起幼儿的注意。

当我发现有的幼儿不专心听别人发言时，就随时表扬那些静听的幼儿，或是让他重复别人说过的内容，抓住教育时机，要求他们专心听，用心记。

平时我还通过各种趣味活动，培养幼儿边听边记，边听边想，边听边说的能力，如听词对词，听词句说意思，听句子辩正误，听故事讲述故事，听谜语猜谜底，听智力故事，动脑筋，出主意，听儿歌上句，接儿歌下句等，这样幼儿学得生动活泼，轻松愉快，既训练了听的能力，强化了记忆，又发展了思维，为说打下了基础。

根据实验操作对象可分为：

细胞与组织培养、细胞融合、细胞核移植、染色体操作、转基因生物等。

3、细胞融合：

又称细胞杂交（cellhybridization），是指两个或两个以上的细胞融合形成一个细胞的过程。

4、植物细胞工程：

植物细胞工程是一门以植物组织和细胞的离体操作为基础的实验性学科。

它是以植物组织细胞为基本单位，在离体条件下进行培养、繁殖或人为的精细操作，使细胞的某些生物学特性按人们的意愿发生改变，从而改良品种或创造新物种，或加速繁殖植物个体，或获得有用物质的过程统称为植物细胞工程。

5、植物细胞工程的发展历史：

A、探索阶段（1902-1929）细胞学说与细胞全能性学说的提出B、培养技术建立阶段（1930-1959）建立了两个与培养技术有关的重要模式，一是培养基模式，二是激素调控模式。

C、应用研究阶段（1960-）

（1）、原生质体培养和细胞融合。

（2）、微繁技术（3）、花药培养技术（4）、次生产物生产

第二章

1、细胞全能性：

一个细胞所具有的产生完整生物个体的固有能力称之为细胞的全能性。

1）细胞全能性的绝对性与相对性：

不是所有基因型的所有细胞在任何条件下都具有良好的培养反应;

即使对于植物细胞而言，细胞全能性也并不意味着任何细胞均可以直接产生植物个体;

动、植物细胞全能性的表现程度存在明显的差异。

2、细胞全能性学说的主要内容：

3、外植体：

植物组织培养中用来进行无菌培养的离体材料，可以是器官、组织、细胞和原生质体等。

4、愈伤组织：

脱分化后的细胞，经过细胞分裂，产生无组织结构、无明显极性的、松散的细胞团。

5、注意：

1、并不是所有的细胞脱分化的结果都必然形成愈伤组织。

有些植物体的细胞脱分化以后直接形成胚性细胞，进而形成体细胞胚。

2、多数愈伤组织内的细胞并不都是未分化的细胞，即同一愈伤组织内的细胞之间其状态存在一定的差异。

6、细胞分化：

指导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。

分化也可以说是相同基因型的细胞所具有的各个不同的表现型。

1）时间上的分化：

一个细胞在不同的发育阶段上可以有不同的形态结构和功能；

2）空间上的分化：

对于多细胞生物来讲，同一细胞后代，由于所处的环境不同而可以有相异的形态结构和功能。

7、极性：

指植物的器官、组织、甚至单个细胞在不同的轴向上存在的某种形态结构以及生理生化上的梯度差异。

8、器官发生方式：

第一种方式是先芽后根；

如小麦，芦荟、苹果。

第二种方式为先根后芽；

如枸杞、苜蓿等。

第三种方式是在愈伤组织的不同部位形成芽和根，再通过维管组织的联系形成完整植株。

如胡萝卜、石刁柏

9、器官分化的过程：

离体条件下，经过愈伤组织再分化器官一般要经过三个生长阶段1）外植体经过诱导形成愈伤组织。

2）生长中心的形成。

当把愈伤组织转移到有利于有序生长的条件下以后，首先在若干部位成丛出现类似形成层的细胞群，称之为生长中心或拟分生组织，它们是愈伤组织形成器官的部位。

3）器官原基及器官形成。

生长中心形成后，按照其已确立的极性，某些细胞开始分化形成管状细胞，进而形成微管组织，开始形成不同的器官原基，进而分化出相应的组织和器官。

10、影响器官分化的因素（了解）：

1）外植体-位置、状态及组织类型（芦荟、小麦）2）生长调节剂3）光照4）温度

11、影响离体培养细胞遗传变异的因子：

1）供体植株2）培养基及培养方式3）继代培养的次数

12、四.体细胞无性系变异的诱导

（1）物理诱变剂：

X射线、ã

射线、中子、β粒子、α粒子和紫外线等。

（2）化学诱变剂：

烷化剂、碱基类似物、移码诱变剂和某些抗生素类等。

第三章

1、细胞工程实验室它必须满足三个基本的需要，即：

实验准备，包括培养基配制，洗涤与灭菌等；

无菌操作；

控制培养。

2、灭菌方法

（1）干热灭菌：

适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。

操作方法：

150℃、40min或120℃、120min，如果发现芽孢杆菌，160℃、90~120min

（2）湿热灭菌：

适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。

121℃维持20~30min注意点：

加足水、排尽气、气压降到0时，才能开盖

（3）过滤灭菌：

培养基的灭菌一般用高压高温处理，但如果培养基中某些成分遇到高温分解（如某些生长调节剂GA3、玉米素等），就需要过滤灭菌。

另外酶、血清等也需要过滤灭菌。

灭菌方法：

将生长调节剂或酶配成一定浓度，用注射器注入微孔滤膜虑，滤膜孔径0.22-0.45微米。

制培养基时，现将培养基高压灭菌，待降至50℃左右时，加入适量的激素，然后分装

3、几种常用消毒剂的效果比较

消毒剂使用浓度（％）消毒时间（分）效果残液去除难易

次氯酸钙105～30好易

次氯酸钠2～55～30好易

新洁尔灭10～205～30好易

氯化汞0.1～12～10最好最难

过氧化氢10～125～15较好最易

抗菌素4～50mgl-130～60较好较难

（1）实验器皿、操作表面、皮肤一般用70~75%酒精

（2）升汞为剧毒药品，一则使用时注意别溅到皮肤上，二则使用后要进行处理，不能直接导入下水道。

升汞处理方法：

升汞＋Na2S—絮状沉淀（至絮状沉淀不再产生为止）—＋FeSO4（中和过多的Na2S）

4、培养室或接种室要进行熏蒸方法：

甲醛、高锰酸钾熏蒸。

甲醛的用量通常按每立方米空间2-6毫升计算，高锰酸钾的用量是甲醛的一半。

甲醛熏蒸接种室应至少在使用前24小时进行，熏蒸后密闭保持4小时以上再进入室内工作。

对有材料的培养室，也可以采用乙二醇加热熏蒸的

5、离体培养中光周期的调节：

最常用的周期是16h的光照，8h的黑暗。

愈伤组织诱导阶段，一般采用三种做法：

全暗、周期性光照、散射性光照。

依据植物种类不同做法不同，多数植物适合全暗或周期性光照。

器官发生阶段：

一般给予周期性光照比较好。

6、组织培养中湿度的影响有两个方面：

一是培养容器内的湿度条件，容器内主要受培养基水分含量和封口材料的影响；

一是环境的湿度条件。

环境的相对湿度一般要求70～80%。

常用加湿器或经常洒水的方法来调节湿度

7、PH值：

大多在5.5-6.5左右，一般培养基皆要求5.8，高温灭菌会降低PH值（约0.2-0.3个PH值），因此在配制时常提高PH值0.2-0.3单位。

8、渗透压调节物质：

培养基各种物质中，糖对培养基渗透压起决定性作用。

因此调节渗透压往往从调节糖浓度着手。

9糖类的作用：

既可作为C源，又可维持培养基的渗透压，为细胞的呼吸代谢提供底物和能量。

植物组织培养中常使用蔗糖，在某些特殊培养类型中，亦使用麦芽糖、葡萄糖、果糖、纤维二糖、甘露糖等。

10、琼脂：

作为凝固剂和支撑作用用量：

0.6%~1.0%（6-10g/L）

11、活性炭：

吸收有毒害物质用量：

0.5%

12、

（1）生长素类1）吲哚类：

IAA（吲哚乙酸）、IBA（吲哚丁酸）、IPA（吲哚丙酸）2）萘酸类：

NAA（萘乙酸）3）苯氧羧酸类：

2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、2,4,5-T（2,4,5-三氯苯氧乙酸）、2,4,5-TP（2,4,5-三氯苯氧丙酸）等。

作用：

1、促进细胞生长和细胞分裂；

2、诱导受伤组织表面细胞恢复分裂能力；

3、形成愈伤组织，促进生根；

4、与一定量的细胞分裂素配合共同诱导不定芽的分化、侧芽的萌发与生长、胚状体的诱导。

（2）细胞分裂素：

主要有激动素（6-糠基氨基嘌呤KT）、6-苄基氨基嘌呤（6-BA）和玉米素（ZT）等。

其中最常用的是6—苄基氨基嘌呤。

功能：

1、促进细胞的分裂和分化；

2、诱导芽的分化；

3、促进侧芽的萌发和生长；

4、抑制衰老

（3）赤霉素（GA3）生理作用：

1、诱导茎的细胞伸长，对矮生型植物恢复成高生型特别有效，对根无效；

2、对形成层的细胞分化有影响，往往同生长素有协同作用。

IAA/GA比值高有利于木质部的分化，比值低有利于韧皮部的分化；

3、破除种子、鳞茎、块茎休眠，使之提前萌发；

4、对生长素和细胞分裂素的活性有增效作用

（4）脱落酸（ABA）生理作用：

1、抑制蛋白质的合成；

2、抵消和抑制生长素、细胞分裂素、GA的作用；

3、诱导休眠、促进衰老和脱落

注：

分裂素/生长素的比例是控制芽和根形成的一个重要条件比例高时——产生芽,比例低时——产生根，比例平衡时——产生愈伤组织。

13、A、培养基种类：

根据无机盐浓度分

（1）富盐平衡培养基优点：

无机盐浓度高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，在培养过程中可维持较好的稳定性；

营养丰富，在一般培养中，无需加入复杂的有机成分；

微量元素种类全，浓度高。

这类培养基是目前使用最广泛的培养基。

钾盐、铵盐及硝酸盐含量较高，微量元素种类齐全，比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，养分数量及比例比较合适，广泛用于植物的器官、花药、细胞及原生质体的培养。

（2）高硝态氮培养基特点：

硝酸钾的含量高，氨态氮的含量低，含有较高的盐酸硫胺素。

硝酸钾含量高，氨态氮的含量低，含有较高的VB1。

主要适合与木本植物、十字花科植物和单子叶植物的组织和花药培养。

主要有B5、N6、SH培养基。

（3）中盐培养基（H、Nitsch、Miller、Blaydes）特点：

大量元素无机盐约为MS培养基的一半，微量元素种类减少而含量增高，维生素种类比MS多；

适合于花药培养。

（4）低盐培养基（White、WS、HE、Nitsch、HB）特点：

无机盐含量