3130XL简明使用手册23页精选文档.docx

3130XL简明使用手册23页精选文档.docx

《3130XL简明使用手册23页精选文档.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《3130XL简明使用手册23页精选文档.docx（28页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

3130XL简明使用手册23页精选文档

AppliedBiosystems3130/3130XL

这个工作可让学生分组负责收集整理,登在小黑板上,每周一换。

要求学生抽空抄录并且阅读成诵。

其目的在于扩大学生的知识面,引导学生关注社会,热爱生活,所以内容要尽量广泛一些,可以分为人生、价值、理想、学习、成长、责任、友谊、爱心、探索、环保等多方面。

如此下去,除假期外,一年便可以积累40多则材料。

如果学生的脑海里有了众多的鲜活生动的材料,写起文章来还用乱翻参考书吗?

简明使用手册

语文课本中的文章都是精选的比较优秀的文章,还有不少名家名篇。

如果有选择循序渐进地让学生背诵一些优秀篇目、精彩段落,对提高学生的水平会大有裨益。

现在,不少语文教师在分析课文时,把文章解体的支离破碎,总在文章的技巧方面下功夫。

结果教师费劲,学生头疼。

分析完之后,学生收效甚微,没过几天便忘的一干二净。

造成这种事倍功半的尴尬局面的关键就是对文章读的不熟。

常言道“书读百遍,其义自见”,如果有目的、有计划地引导学生反复阅读课文,或细读、默读、跳读,或听读、范读、轮读、分角色朗读,学生便可以在读中自然领悟文章的思想内容和写作技巧,可以在读中自然加强语感,增强语言的感受力。

久而久之,这种思想内容、写作技巧和语感就会自然渗透到学生的语言意识之中,就会在写作中自觉不自觉地加以运用、创造和发展。

DATACOLLECTIONV3.0

与当今“教师”一称最接近的“老师”概念，最早也要追溯至宋元时期。

金代元好问《示侄孙伯安》诗云：

“伯安入小学，颖悟非凡貌，属句有夙性，说字惊老师。

”于是看，宋元时期小学教师被称为“老师”有案可稽。

清代称主考官也为“老师”，而一般学堂里的先生则称为“教师”或“教习”。

可见，“教师”一说是比较晚的事了。

如今体会，“教师”的含义比之“老师”一说，具有资历和学识程度上较低一些的差别。

辛亥革命后，教师与其他官员一样依法令任命，故又称“教师”为“教员”。

美国应用生物系统公司中国公司

一．DNA测序或片段分析的流程：

1.样品制备：

样品制备即是在DNA片断上用化学的方法标记荧光素。

标记上荧光素后就可以对DNA片断进行检测和确认了，一般每一DNA分子标记一个荧光素分子，最多有五种荧光素可用于DNA样品的标记。

不同的样品制备方法选用不同的荧光素和试剂的组合，样品制备可在96孔或384孔板进行

2.软件设置：

操作人员根据所使用的标记方法、电泳的毛细管长度、电泳胶的种类等，在数据采集（DataCollection）软件中选择正确的运行模块和分析模块。

3.开始运行：

操作人员把样品板放到仪器上并开始运行，仪器便会根据设定好的顺序，用相应的电泳程序分析样品板上的样品。

4.电泳：

用“电进样”的方法将带电的样品分子加到灌好电泳胶的毛细管的进样端（负极），然后在毛细管两端加上直流电压，样品中不同大小的DNA片段开始从负极向正极移动，移动的速度受到片段自身大小影响，片断越短移动得越快。

电泳的结果是使长度不同的带电DNA片断互相分离，并且按片段的长短的顺序通过检测窗口，产生信号，短片段先到达检测窗口。

5.激发和检测：

当标记有荧光素的DNA片断移动到检测窗口时，荧光素受到激光束的激发而产生荧光信号，此荧光信号被CCD检测器所检测并被转化为电信号传递到计算机。

6.数据采集和处理：

CCD检测器把检测到的荧光信号转换为电信号，并把它传送给安装了DataCollection软件的计算机工站。

工作站接收到信号后，用预先设置好的方式进行初步处理，并把这些数据存贮在计算机的数据库里。

7.自动数据提取和分析：

接着，工作站会自动地从数据库中提取这些数据，并根据不同的运行模式，完成对样品DNA的碱基序列或片断信息的分析，然后把分析完成后的结果数据以样品文件的形式保存于计算机的硬盘中。

8.结果：

分析好的样品文件可以用序列分析软件或片断分析软件来打开查看结果，如有必要，这些数据可以改用不同的分析参数进行重新分析。

电泳信号图的X轴表示时间，Y轴表示相对荧光强度，图上不同颜色的信号线代表了样品制备时所使用的不同的荧光素（对于测序结果，每种颜色代表一种碱基），图中的每个峰代表一个DNA片断。

测序样品的结果图

片断分析的结果图

二．仪器硬件结构：

1.仪器前视图：

泵胶块

胶管

胶瓶

阳极缓冲液杯

胶泵（PDP）

连接管.

下胶块

2.各部件功能：

●电源开关：

打开或关闭仪器电源；

●照明灯开关：

打开或关闭仪器内部的照明灯；

●阳极缓冲液杯：

内装1X缓冲液，电泳时作为阳极介质；

●Buffer杯：

装1X缓冲液，电泳时作为阴极介质；

●水杯：

装去离子水，清洗毛细管用或放废胶；

●泵胶块：

泵入胶并将其灌入毛细管；

●下胶块：

上装有阳极，阳极缓冲液杯装在此处；

●恒温加热炉：

保证电泳时，毛细管处于一个均一、稳定的温度环境中；

3.仪器后视图：

注意：

请保持激光冷却风扇的出口通畅！

三．实验操作：

1.仪器准备：

开机：

开机的顺序一定是先开电脑再开仪器。

●开启UPS电源，确保UPS处于电池供电状态，稳定5分钟；

●打开显示器和电脑的电源开关，登录到WINXP桌面；

●检查确保仪器的加热炉门和仪器左右前门；

●打开仪器电源开关，仪器进行一系列的初始化后，绿色状态灯亮，仪器启动完成。

仪器的状态指示灯的不同状态显示了仪器处于不同的工作状态，具体请参考下表：

状态

指示灯

操作

●仪器已就绪

●关门状态下进行向导

操作

绿灯长亮

●继续实验

●程序运行中

绿灯闪烁

●仪器与电脑无法联机

黄灯长亮

●确认已进入WINXP界面

●确认网线连接正确

●确认前门关闭

●仪器下载firmware

●仪器自检

●加热炉门打开

●前门打开

●开门状态下进行向导

操作

黄灯闪烁

●确认前门，加热炉门已关闭

●故障

红灯长亮

●关机后等待30秒后开机

●若上一步无效则打开DC3.0软件，进入以

下界面GAInstruments>ga3130>

instrumentname>InstrumentStatus>

EventLog.查看日志中最后一条信息，

根据相应错误代码来解决问题

●若依然无法解决问题，联系ABI工程师

打开DataCollection3.0软件：

●选择Start>Programs>AppliedBiosystems>DataCollection>RunDataCollectionv3.0.或双击桌面快捷方式。

●等待ServiceConsole窗口中的指示灯全部变成绿色后，DC软件的界面打开，过程如下：

冲洗WaterSeal：

1、在20ml的注射器里装上20ml去离子水（水温40ºC以下），将注射器装到右图中2号的位置；

2、将1号和2号位上的螺母都放松1/2圈；

3、用烧杯在1号口底下接收流出来的水，然后慢慢地压注射器，使水通过WaterSeal后从1号口流出，要求使用水的体积在10ml以上；

4、拧紧2号位上的螺母，再拧紧2号位上的螺母；

5、取下20ml注射器，冲洗步骤完成。

安装毛细管：

●在DC软件中，选择

GAInstruments>ga3130>

instrumentname>.

●在工具栏中，选择

Wizards>

InstallArrayWizard.

●按照向导提示操作

●安装好毛细管以后运行毛细管空间定位程序spatialcalibration

注意：

●不要拉扯毛细管

●使用原包装来储存使用过的毛细管，其末端分别放在缓冲液槽和小玻璃瓶中

●安装毛细管时要戴无粉手套

更换新的胶：

●在DC软件中，选择GAInstruments>ga3130>

instrumentname>.

●在工具栏中，选择Wizards,然后选择ReplenishPolymerWizard进行同种类型的胶的更换，选择ChangePolymerTypeWizard进行不同类型的胶的更换。

●按照向导提示操作

注意：

●每天都要检查胶块和连接管中有无气泡；

●确保有足够量的胶－每轮消耗约50-80ul；

●每星期都要更换胶；

●使用过期的胶可能会影响数据质量；

●请戴无粉手套操作。

准备缓冲液：

●把5ml10X缓冲液与45mlMilliQ水混合成1X缓冲液；

●按下Tray按钮，待自动进样器停止移动后开门；

●取下缓冲液槽，水槽和废液槽，拆开并用水清洗；

●晾干，在各槽中加入相应的溶液；

●擦干各槽后将其放回仪器相应的位置上；

●取下阳极缓冲液杯，倒空后先用水淋洗再用1X缓冲液洗；

●加入缓冲液；

●将阳极缓冲液杯装回原处。

注意：

●溶液槽组装好后，请仔细检查，橡胶垫是否平整；

●1X缓冲液在2～8度可放置1个月，室温可放置1星期；

●请每24小时更换仪器上在使用的缓冲液；

●如果有胶冲入阳极缓冲液杯中请更换缓冲液。

2.毛细管空间定位（SpatialCalibration）:

什么是毛细管空间定位？

毛细管空间定位程序把每道毛细管的荧光信号落在CCD上的位置标记出来，从而使DC软件能够找到这些信号。

何时作毛细管空间定位？

1．安装新毛细管或用过的毛细管后；

2．移除或调节了毛细管检测窗口的位置；

3．移动仪器后。

如何作毛细管空间定位？

●选择GAInstruments>ga3130>instrumentname>SpatialRunScheduler.

●若毛细管中充满了新胶，选择Protocol>SpatialNoFill_1，

否则选择

Protocol>SpatialFill_1

●点击Start按钮

●评估定位结果，各道的信号高度应该相差不大，间隔13至16之间，确认所有毛细管都有信号，如图：

●若接受定位结果，按Accept按钮，否则按

Reject按钮

若空间定位失败

●重复以上过程进行定位

●若无效，观察系统中有无气泡，去除气泡后再进行空间定位

●若无效，重新安装毛细管的检测窗口，进行空间定位

●若无效，取下毛细管，用枪吸取无水甲醇冲洗毛细管检测窗口上的凹槽，如图

●待甲醇晾干后将毛细管装回，进行空间定位

检测窗口的前表面

●若无效，更换毛细管

3.光谱校正（spectralcalibration）：

什么是光谱校正？

从下图可以看到，四（或五）色荧光检测系统的本质是检测四（或五）种荧光素在其中心发射波长处的信号。

由于每一种荧光素的发射光谱不是锐线光谱，而是一种有一定宽度分布的光谱带。

所以一个纯荧光除在它自己光谱的中心波长处能采集到信号N1外，在其他荧光信号光谱的中心波长处亦能检测到信号而产生信号重叠。

为了校准信号重叠，需知道一种荧光信号在其他荧光信号处产生的重叠系数。

所以，我们用四（或五）条不同长度的ＤＮＡ片断分别标记上不同的荧光素来计算这些系数。

最后得到一个４ｘ４（或５ｘ５）的数据矩阵。

何时作光谱校正？

●使用新的荧光染料

●激光或CCD被调节或更换后

●不同颜色的荧光间出现干扰（有拔起或下压峰）