大学生创新创业训练项目申请书-羊肚菌菌种制备与栽培技术的研究_精品文档Word文档格式.doc

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1、本申请书所列各项内容均须实事求是，认真填写，表达严谨，简明扼要。

2、申请人可以是个人，也可也是创新团队，“项目编号”不填。

3、本申请书为A4纸双面打印，左侧装订成册。

可网上下载、自行复印或加页，但格式、内容、大小均须与原件一致。

空缺项要填“无”

4、主持人所在学院认真审核,经初评和答辩，签署意见后，由学院统一将申请书（一式3份）报送教务处。

申请者承诺

我保证填报内容的真实性，不存在知识产权争议。

如果获得资助，我与本项目组成员将严格遵守学校的有关规定，并按计划认真开展研究工作，在项目研究过程中或结束时，接受学校对本项目的中期检查和结题验收，并按时提交工作总结和结题报告。

申请者（签名）：

成员（签名）：

年月日

一、基本情况

项目

名称

羊肚菌菌种制备与栽培技术的研究

所属

学科

生物学

起止年月

XX年XX月至XX年XX月

主持人

姓名

性别

男

民族

汉

出生年月

XX年X月

学号

XXXX

联系

电话

XXXXX

指导

教师

XXXX

主持人曾经参与科研的情况

无

指导教师承担科研课题情况

XXXX。

指导教师对本项目的支持情况

为学生项目实施提供技术指导、实验场所和实验器材。

组

主要

成

员

姓名

所在学院

专业班级

联系电话

邮箱

XXX

二、项目研究的目的和主要研究内容

1、研究目的

由于羊肚菌营养价值高，在食品和医药领域具有广阔的市场需求，其主要来源于野生资源，远不能满足市场需求，而目前羊肚菌人工栽培技术没有一个有效的突破，成为羊肚菌人工种植的一个技术瓶颈。

本研究将以野生羊肚菌为原料，对其进行菌种的制备，筛选出优良的菌种，并进一步进行栽培技术的研究，以期在温室中完成从菌种制备到栽培技术的这个难题。

2、研究内容

本课题的研究内容主要包括羊肚菌菌种的分离、羊肚菌人工栽培技术的研究以及如何提高栽培的成功率。

2.1羊肚菌的菌种分离

菌种的分离方法主要是通过对子实体的组织分离，可以对菌柄或者菌盖进行分离；

然后在进行一系列的消毒措施，可以用0.2%的升汞溶液或者75%的乙醇溶液进行浸泡消毒，之后再用无菌水漂洗数次，其中在升汞或乙醇溶液中的浸泡时间要控制，不能对子实体的活性造成影响；

最后接种于PDA培养基中，在25℃下恒温培养，并定期观察菌丝生长情况。

为了探索上述科学问题，申请者将对野生的羊肚菌进行不同部位的分离，经消毒、漂洗等一系列的措施后，进行恒温培养，并定期观察，对出现的问题进行分析，进一步研究菌种分离的新技术。

2.2羊肚菌的栽培

羊肚菌是一种低温型菌类，适宜温度较低的地区栽培，气温在22℃以下15℃以上即可栽培，多数在10月份是栽培的好时间，适宜菌丝生长发育，遇低温季节有利羊肚菌的生理变化。

翌年3份气温逐渐回升，子实体开始大量形成。

为了探索上述科学问题，申请者将选取合适的母种，采用袋装栽培技术，将母种进行培养至原种，然后在适宜的环境条件下培养至栽培种，进行袋装栽培，并定期的观察研究生长过程中的出现的一些现象及问题，并对这些问题进行分析，研究出更加合理的栽培方案。

二、国、内外研究现状和发展动态

1、羊肚菌的种类及生态环境

1.1、羊肚菌的种类

EmikJacouetant教授在《LesMorilles》（1984）一书中记载，羊肚菌属共有28个种。

，分布于亚州、欧州、北美州及大洋州等国家。

《中国真菌总汇》记入8种羊肚菌。

但根据目前报道资料统计，我国现有羊肚菌12个种:

小顶羊肚菌（黑脉羊肚菌、黑羊肚菌）MorchellaangusticepsPeck、尖顶羊肚菌（圆锥羊肚菌、羊肚子、阳雀菌、蘑菇菌、鸡足磨菇）M.conicaPers.、粗柄羊肚菌（粗腿羊肚菌、皱柄羊肚菌）M.crassipes（Vent）Pers.exFr.、小羊肚菌（美味羊肚菌、鲜羊肚菌、阳雀菌、狼肚菌）M.deliciosaFr.、羊肚菌（圆顶羊肚菌、羊肚子、编笠菌、可食羊肚菌）M.esculenta（L.）Pers.、普通羊肚菌M.vulgaris（Pers.）Boud、高羊肚菌M.elataFr.、硬羊肚菌M.rigidaKrombh.、开裂羊肚菌M.distansFr.、褐赫羊肚菌M.umbrina、白羊肚菌M.Morchellasp、紫变羊肚菌M.purpurascens。

分布于我国的西北、西南、华中、华北、华东、华南等地。

其中M.esculenta、M.deliciosa、M.conica、M.angusticeps、M.crassipes是比较常见的食用菌[1]。

1.2、羊肚菌的生态环境

1.2.1、土壤及植被

羊肚菌多生长在阔叶林或针阔混交林的腐殖质层上。

发生的土壤类型有黑壤土、山地灰褐森林土、沙壤土、黄壤土等[2]。

羊肚菌也常发生在火烧地上。

1.2.2、气候

羊肚菌子实体的生长季节在每年的3～5月和8～9月，当时气温达10～20℃，地表温度达12～24℃，月降水量一般35～60mm[3，4]。

所以，羊肚菌是在低温、高湿条件下萌发子实体的。

有研究表明，羊肚菌的野外发生条件主要取决于上年度11月的降雨量，而当年羊肚菌发生的迟早取决于当年春季5cm表层土壤温度是否稳定通过11.5℃。

[2]

1.2.3、形态特征

羊肚菌的菌丝体呈白色，有分隔，分隔处有缢缩，隔膜上有孔洞，多核，无锁状联合，异宗接合，常产生菌核（一种坚硬的、无性细胞团，是羊肚菌的营养贮藏器官，在休眠阶段可使其渡过不良的气候条件），尚未发现有分生孢子或其他无性孢子出现。

菌丝有短茸毛和颗粒状2种类型。

颗粒状菌丝可能是营养衰竭或不良外界条件的应变形态。

羊肚菌子实体的菌盖近球形或圆锥形，边缘全部与柄相连，表面起伏成蜂窝状网棱纹，因其形状像羊肚而被称为羊肚菌。

菌柄内部空心，外面平整或有凹槽，颜色从灰白到深褐色，子实体沿菌盖下陷部分生长。

子囊呈圆柱形，每个子囊含8个子囊孢子，单行排列，子囊之间有长的侧丝，子囊孢子呈卵圆形。

2、羊肚菌的菌种分离

菌种分离是在无菌条件下将所需要的食用菌与其他微生物分开，在适宜的条件下培养以获得纯培养的过程。

分离纯化得到的纯培养即是母种，母种的培育制种的关键，也是食用菌生产的关键。

母种可由孢子萌发而成，也可从子实体组织分离或用斜面菌的菌丝体一节扩增而得。

2.1、孢子分离法

孢子分离法是用食用菌成熟的有性孢子（担孢子或子囊孢子）在适宜的培养基上萌发成菌丝体而获得的纯培养的方法，孢子分离法的程序:

选择种菇→种菇消毒→采收孢子→接种→培养→挑菌落→钝化菌种→母种。

2.2、组织分离法

切去子实体、菌核、菌索内部组织获得纯培养的方法都属于组织分离法。

2.3、菇木分离法

食用菌繁殖盛期已经长过子实体的菇木上，选择出菇良好，无病虫害的菇木晾干，截取2cm长的小段，放在0.1%氯化汞中浸1min，再用无菌水冲洗2～3次，吸干水分，或通过酒精灯火焰重复镣铐几次，用75%酒精表面消毒。

然后用解剖刀把木段四周切去，再把木段切成火柴枝大小的木枝，每木枝去两头，接入PDA培养基上在适当条件下3～5d长出菌丝体，即得母种，以上必须无菌操作。

2.4、培养料分离法

选择子实体发生早、产量高、无病虫害的移栽袋，待子实体长到成熟度80%时去掉子实体，然后用75%酒精消毒整个栽培袋，同时将接种工具和接种培养料一起放入接种袋，用甲醛熏蒸消毒。

分离时去掉袋料表面老菌丝，用接种针挑取小块长有菌丝的培养料，接入试管内，适宜温度下培养。

选取菌丝良好的试管转管纯化。

[5]

3、羊肚菌的栽培

羊肚菌为野生真菌，其产量受季节、气侯等因素的制约。

所以，一百多年来，羊肚菌的人工栽培研究，一直是真菌学家和业余爱好者最感兴趣的课题之一。

虽有人工栽培成功的报道，但试验的重复性仍较差，大面积栽培还有待进一步研究之[1]。

3.1、室外栽培

Barondyvoire（1898）在5、6月把羊肚菌子实体（组织块）接种到菊芋畦中，秋天在菊芋茎基四周施放苹果渣，1～2周后，再盖上枯枝落叶。

翌年春天，除去枯枝落叶，在比较潮湿的条件下，羊肚菌菌丝体在这种基质中蔓延生长。

其后年年产生子实体。

刘波（1953～1954）4月中旬在山西羊肚菌产区的自然条件下，进行了新鲜菌丝体人工栽培实验，并获得完全正常的第二代子实体。

他的实验结论之一是子实体组织块分离到的菌丝体移到自然条件下可以产生子实体。

陈惠群（1995）采用层播、从1991年冬季开始播种、野外栽培尖顶羊肚菌，连续三年均获成功。

试验面积由10m2大到40m2，单位产量最高达212朵/m2[6]。

罗凡（1995）报道，四川省青川县菇农从1990年起开始探索羊肚菌的人工栽培技术，通过摸拟野生羊肚菌的生境，已成功地培养出了子实体，有的单产达40朵/m2。

在清溪菌种场曾发现一特大型丛生羊肚菌，其由64朵组成，鲜重达1.825kg，是采用山上熬过香樟油后的经自然堆制的樟木渣作栽培原料人工栽培而成的[7]。

董淑凤（1995）野外栽培美味羊肚菌仅获8株硕大的子实体。

她认为菌核是转化为子实体的重要时期，也是营养阶段处于恶劣条件的标志。

菌核在外界适宜的条件下就转变为子实体。

当外界条件不适宜时，菌核就会老化，致使羊肚菌的人工栽培不易成功。

3.2、室内栽培

早在1889年，Baron即在用苹果渣和菊芋堆制而成的菌床上，用羊肚菌子实体的碎块作菌种栽培过羊肚菌。

其后，Molliard（1904，1905）用苹果渣，Matruchat（1909，1910）用废纸浆和腐木混合物以类似方法栽培羊肚菌，都获得了羊肚菌的子实体。

RonOwer（1982）首次报道栽培M.esculen