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目录

文献综述3

第一章猪精液常温保存研究进展3

1.1猪精液常温保存研究进展4

1.1.1常温保存的方法4

1.1.2猪精液常温保存的意义4

1.2影响猪精液常温保存的因素5

1.2.1保存温度对猪精液保存效果的影响5

1.2.2pH对猪精液保存效果的影响6

1.2.3抗菌素对猪精液保存效果的影响6

1.3猪精液品质评定指标7

1.3.1精子活率7

1.3.2精子顶体完整率8

1.3.3精子质膜完整率8

试验研究9

第二章pH对猪精液常温保存效果研究9

2.1.材料与方法10

2.1.1试验动物和采精时间10

2.1.2采精方法10

2.1.3试验仪器10

2.1.4精液处理10

2.1.5精液品质检查方法10

2.1.6稀释剂配方11

2.1.7精液保存12

2.1.8数据处理12

2.2结果与分析12

2.2.1不同保存时间精子活率的变化12

2.2.2不同保存时间精液pH的变化13

2.3讨论13

2.3.1稀释粉对猪精子活力的影响13

2.3.2稀释粉对猪精液保存过程中pH的影响14

2.3.3稀释精液pH对精子活率的影响14

2.4结论14

参考文献15

致谢17

作者：

朱园园指导老师：

胡建宏教授

（西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌712100）

摘要：

猪精液常温保存技术随着人工授精技术的广泛应用日益显现出其重要性。

在常温保存过程中pH对于猪精液的质量影响比较大。

本试验选取自配稀释粉Modena和BTS，通过对比2种稀释液保存后精子的活力、有效保存时间、pH，证明当稀释精液pH处于7.0～7.3之间的稳定状态时，精子活率高于0.6，此时稀释精液可以用于人工授精。

当稀释精液pH呈酸性时，精子活率迅速下降到0.6以下显著低于pH稳定状态（p<

0.05）。

当稀释精液pH大于7.3时精子活率逐渐下降，在之后2d时间内精子活率显著低于pH稳定状态（p<

关键字：

猪人工授精；

常温保存；

pH；

精子活力

AnalysisofdifferentpHeffectsonporcinesemenstoredatroomtemperature

Abstract:

Pigsemenstoredatroomtemperaturetechnologyaswidelyusedartificialinseminationtechnologyisincreasinglyshowingitsimportance.pHduringstorageatroomtemperatureforboarsemenqualityimpactisrelativelylarge.WhenthistestwithdilutedpowderselectedfromModenaandBTS,bycomparingthetwokindsofdynamicdilutionpreservationofsperm,effectivelysavingtime,pH,provedthatwhensemenpH7.0to7.3inasteadystatebetweentherateofspermmotility0.6,thendilutedsemencanbeusedforartificialinsemination.WhenthepHisacidicsemen,spermmotilitydecreasedrapidlytopH0.6wassignificantlylowerthanthesteadystate（p<

0.05）.WhenthepHisgreaterthan7.3semenspermmotilitydecreasedgraduallyafter2dtimeinspermmotilitywassignificantlylowerthanthepHsteadystate（p<

0.05）.

Keywords:

SwineArtificialInsemination:

storageatroomtemperature:

pH:

spermmotility

文献综述

第一章猪精液常温保存研究进展

　　随着我国经济的飞速发展，人们的生活水平日益提高，使得人们对于物质的需求也越来越高，特别是在饮食方面对于肉类的需求和质量有了更高的要求。

而在我国的肉类消费中猪肉占到70%的比例[1]，为了适应市场的需求，养猪业一方面要扩大规模，另一方面要加速猪种的改良和猪的繁殖性能。

在这种情况向，猪人工授精技术得到进一步的发展与应用。

与传统的自由交配相比较，人工授精可以提高优良公猪的利用率，减少公猪的饲养头数，克服本交时体格悬殊的障碍，避免疫病的传播，特别是在规模化集约化养猪场，采用人工授精是提高经济效益的一项重要措施。

　　随着人工授精技术的发展与应用，人们开始对猪精液保存技术进行深入的研究。

随着精液保存技术的发展，猪人工授精技术将会得到更广泛的应用。

现在的猪精液保存方法基本上可以分为常温保存（15～25℃），低温保存（0～5℃）和冷冻保存（-79～-196℃）三类[2]。

目前应用猪冷冻精液进行人工授精后，母猪的受胎率低，且冷冻操作程序复杂，实际生产中存在很多问题，而低温保存技术也不甚成熟。

因此，猪的人工授精主要采用常温保存的精液，而稀释液是影响常温保存精液效果的关键因素。

猪精液常温保存稀释剂配制的稀释液可以为精子提供代谢所需的能量物质、适当的pH和渗透压环境，以保证精子在体外具有较强的抗逆性及结构功能的完整性，延长猪精子存活时间、保持其受精能力。

1.1猪精液常温保存研究进展

精液常温保存的定义与冷冻精液和低温精液相对应，国家颁布实施的《猪常温精液生产与保存技术》标准中对猪常温精液做出了明确规定，建立了以保存温度命名精液产品的规则，明确了猪精液稀释剂产品的分类标准。

常温精液是指猪原精液经稀释处理后在16～18℃下短期保存，并具有受精能力的精液。

1.1.1常温保存的方法

　　采集并检查合格的原精液在温室下进行稀释。

精液采集后应尽快稀释，原精贮存不能超过30min[3]。

稀释操作时要求精液与稀释液的温度不能超过1℃，并且只能通过调节稀释液的温度使精液与稀释液的温度尽可能的接近。

稀释时，将适量的稀释液缓慢的加入到精液中，然后轻轻摇动或用消毒的玻璃棒搅拌，使两者轻柔混匀。

稀释后的精液需要缓慢降温到16～18℃，然后在此温度下保存。

精液应在排出空气的密闭容器中避光保存，减少与氧气接触，抑制精子的代谢，延长精液的保存时间。

以上操作均为防止环境变化过于突然导致精子休克死亡或活力下降。

1.1.2猪精液常温保存的意义

我国的养猪业正在从传统的散户型向集约化、规模化、专业化方向发展。

养猪业是关系到我国人民的生活水平，影响我国经济发展的全局，发展好养猪产业，对于促进我国经济发展、维护社会和谐稳定具有重要的意义。

而人工授精技术的应用使养猪生产者降低成本，提高效益，加速品种改良的进程，克服地域限制，在很大的范围内实现资源共享，并且在一定程度上避免了疫病发生[4]。

而猪精液稀释保存是提高人工授精技术的首要环节，所以猪精液常温保存对于推动猪人工授精技术的发展具有重大意义。

1.2影响猪精液常温保存的因素

目前在猪人工授精技术应用中，精液的常温保存技术是影响受精效果的关键因素。

在我国猪的人工授精技术经过数年的推广，已得到了广泛的使用，普及率达到85%以上。

随着该项技术的广泛应用，家畜精液的保存技术也发展起来，并在繁殖控制和现代畜牧业生产中日益显出重要作用。

精液保存技术是通过降低或抑制精子的新陈代谢强度从而达到延长精子在体外存活时间的一项技术。

猪精液的保存不像牛精液保存技术那么成熟，猪精子的生理特点决定了猪精液对低温耐受性不强，对15℃以下温度敏感。

因此经过大量的实践证明，常温保存更有利于猪精液的保存，且保存条件要求低，操作简单，输精后受胎率高，更适合在养殖场和基层改良站开展生产。

国际上对猪精液液态常温保存也十分重视，多年来，各国研究者对影响精液保存效果的诸多因素进行了广泛而深入的研究，已经基本能确定影响猪精液常温保存效果的因素包括：

温度、pH、缓冲体系、抗菌素、渗透压、精子膜结构和延长精液贮存时间的添加物等[5]。

常温精液保存时，一方面可以通过控制环境温度、稀释液的pH和渗透压来抑制精子的活动，使精子处于可逆的静止状态来延长精液的保存时间；

另一方面，通过向稀释液中添加抗菌素来抑制精液中细菌的活动和繁殖，降低有害细菌对精子的伤害。

1.2.1保存温度对猪精液保存效果的影响

　　哺乳动物精液在较低温度保存时可有效降低精子能耗和有害代谢物生成，抑制精液内细菌的活动，延长精液的保存时间，提高精液的保存效果。

但是猪精子对低温很敏感，当猪精液保存温度低于15℃时，可能导致猪精子发生冷休克，造成精子活力下降和顶体完整性受损。

这可能与猪精子质膜中包含高浓度不饱和脂肪酸有关。

此过程中，精子细胞膜中不同脂类在不同温度发生由液相到胶相的相变、分离，使膜流动性下降，蛋白质运动和组装受阻，选择通透性丧失，胞内离子和酶外流，膜上酶活性下降，膜通道调节失控。

猪精子质膜磷脂酰胆碱含量较低，磷脂酰乙醇胺和鞘磷脂含量较高，胆固醇分布不对称，在质膜外侧较多，而且胆固醇与磷脂比率显著低于其它哺乳动物精子[6]，这些因素使猪精子对低温特别敏感。

稀释前的猪精液在室温下放置数小时，精子则能对冷休克产生一定程度的耐受，对于延长保存时间、保证精子活率和顶体完整是必要的,其机理尚不清楚[7]。

经长期研究，人们逐渐确立15～20℃为常温保存的适宜温度。

5℃和25℃条件下保存的精液活力和顶体完整率下降速度均比15℃条件下要快。

猪新鲜精液在15℃和20℃保存48h后其顶体完整率和存活率比4℃和39℃结果好。

鲜红[8]等在稀释液配方筛选试验中发现，猪常温精液的适宜保存温度为14～18℃，温度低于14℃或超过20℃则会降低精液的存活时间。

康文彪[9]等在筛选稀释液配方的试验中发现，15～18℃条件下保存精液的效果最好。

因此，15～18℃在现阶段被认为是比较理想的保存温度。

1.2.2pH对猪精液保存效果的影响

　　猪精液常温保存是利用一定范围的酸性环境抑制精子活动，在弱酸性条件下精子代谢和活动力均减弱，从而延长猪精子在体外的存活时间。

精子在一定的pH区域内其活性被可逆性抑制，一旦恢复到pH7.0左右仍然可以恢复活性，但如果超出一定的酸性范围，会造成精子死亡[10]。

为了确定猪常温保存稀释液保存精液的最佳pH，在不同pH条件下保存精液的结果显示出在其他条件相同时，pH为6.5～6.9时的保存效果明显好于pH为6.0～6.4为的保存效果。

为了检验保存效果进行精子顶体染色的结果也显示，在常温保存条件下，稀释猪精液原液后控制pH为6.5～6.9，保存3d后精子的顶体完整率超过96%，并且保存的精子具有较高的受精能力[20]。

1.2.3抗菌素对猪精液保存效果的影响

　　猪的精液富含多种营养物质，葡糖糖、牛血清蛋白（BSA）、各种微量元素都是微生物繁殖代谢的重要C源、N源和能量