生物技术心得体会Word下载.docx

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一.目的基因的获得

目的基因是指所要研究或应用的基因，也就是将要克隆或表达的基因。

获得目的基因是分子克隆过程中最重要的一步。

基因工程流程的第一步就是获得目的dna片段,。

所需目的基因的来源,不外乎是分离自然存在的基因或人工合成基因。

常用的方法有PcR法、化学合成法、cdna法及建立基因文库的方法来筛选

PcR方法

PcR是一种在体外快速扩增特定基因或dna。

聚合酶链式反应（PcR）是体外酶促合成特异dna片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的dna得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。

它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可用于疾病的诊断或任何有dna,Rna的地方。

化学合成法制备基因片段

采用dna合成仪，对目的基因进行分段合成，然后进行连接，可以得到所需的目的基因。

二、重组质粒的构建

dna体外重组是将目的基因在dna连接酶作用下，连接到合适的载体dna上，以便下一步转化之用。

重组的dna分子是在dna连接酶的作用下，有mg2、aTP存在的连接缓冲

系统中，将分别经酶切的载体分子与外源dna分子进行连接。

连接反应的温度在37℃时

有利于连接酶的活性。

但是在这个温度下粘末端的氢键结合是不稳定的。

因此采取折中的温度，即12～16℃，连接12～16h（过夜），这样既可最大限度地发挥连接酶的活性，又兼顾到短暂配对结构的稳定。

三、重组分子的扩增和鉴定

重组dna分子导入受体细胞

目的基因和载体在体外连接形成重组dna分子后，需要被导入受体细胞中才能进行增殖和（或）表达。

受体细胞是重组基因增殖的场所，所以对受体细胞也应具有几点要求：

①容易接纳重组dna分子；

②对载体的复制扩增无严格限制；

③不存在特异的能降解外源dna的内切酶体；

④不对外源dna进行修饰。

一般将重组dna分子导入原核细胞的过程称为转化，而导入真核细胞的过程称为转染。

将重组dna分子和感受态大肠杆菌细胞相混合，使重组dna分子进入大肠杆菌中，就可以实现重组dna分子的转化。

重组dna分子的鉴定

重组dna分子导入受体细胞后是否得到扩增，扩增后的重组dna分子是否正确，导入的重组dna分子是否含有正确的插入片段，重组dna分子能否表达插入的目的基因，一般可以采用X-gal筛选的方法对重组dna分子进行鉴定。

四、实验中的注意事项

1、大肠杆菌液体培养基和固体筛选培养基制备：

1）接种过程中，试管或三角瓶口等，也可通过火焰灼烧灭菌。

2）培养基、橡胶制品、塑料制品等不能使用干热灭菌。

3）在加热过程中应不断搅拌，以防琼脂粉沉淀糊底烧焦，并应控制火力，以免培养基起泡而溢出容器。

4）注意培养基分装时避免其沾污三角瓶口、试管口。

5）严格按照高压蒸汽灭菌的灭菌指标（温度、压力、时间）对培养基、器皿灭菌，确保灭菌彻底。

2、大肠杆菌工程菌平板培养：

1）划线分离时，挑菌量要小，严格无菌操作，避免环境中的杂菌污染。

2）画线时接中环圈内不能有菌膜产生，会造成接种数过多，结果不明显。

3、PcR扩增目的基因片段：

1）PcR体系所加成分的实际用量，应根据实验者选用的该成分的终浓度及所拥有的贮备液浓度进行核算。

2）加样时要认真,吸头垂直进入试剂管，每加完一样要换一个吸头，同时在已加的样品前做个记号以防止错加或漏加，避免污染。

3）Taq聚合酶（置于冰盒上）应最后加入，尽量减少室温接触机会。

加酶时吸头深入不可过深，酶量不能过多。

4、回收目的基因与载体连接：

1）注意调转速

2）敞开管盖放置

3）向吸附膜中间位置悬空滴加30ul洗脱缓冲液TE（洗脱缓冲液TE需使用前60℃水浴预热）

4）盖好管盖，静置10min

5、大肠杆菌液体培养:

1）接种环节应严格进行无菌操作。

2）实验中要注意细菌的生长状态和密度，尽量使用对数生长期的细胞。

密度过高或不足均会使转化率下降。

菌体密度与震荡培养的转速密切相关，根据测定的菌液od值调整培养时间。

3）接种的试管、三角瓶等应做好标记，注明菌种、日期、组别、姓名等。

6、大肠杆菌感受态细胞制备及转化:

1）所有操作均应在无菌条件和冰上进行。

2）所使用的器皿必须经过灭菌。

并且要防止迹量的去污剂或其它化学物质、杂菌、dna酶或杂dna所污染，否则会大大降低细菌的转化效率。

3）注意转化的质粒dna的质量和浓度。

当加入的外源dna的量过多或体积过大时，则会使转化率下降。

以质粒为载体的重组分子而言，分子量大的转化效率低，大于30kb的重组质粒将很难进行转化。

4）实验所用的溶液最好用3次蒸馏水配制。

7、筛选重组转化菌落:

1）在含有X-gal和iPTG的筛选培养基上，携带载体dna的转化子为蓝色菌落，而携带插入片段的重组质粒转化子为白色菌落，平板如在37℃培养后放于冰箱3-4小时可使显色反应充分，蓝色菌落明显。

不是一开始就4℃，是等菌长出来之后。

一般菌长出来就会有蓝色的了，4℃之后会进一步显色。

2）当出现蓝斑较大，白斑很小附在周围，还有蓝白镶嵌的斑即卫星菌落的时候，可以小心挑取中间的那个菌落，有可能是阳性克隆。

3）要注意培养时间不宜过长，出现阳性菌落就及时处理，以12-16小时为宜。

4）培养基中加抗生素的时候，温度不能高了，不烫手为宜，防止抗生素失效。

8、菌液PcR分析:

注意移液枪正确的使用方法，各种量程的调试，一般以接近最大量程的为准。

9、取大肠杆菌重组质粒dna和酶切分析

1）《质粒小量提取试剂盒》进行质粒的提取的第三步和第四步之间的时间，操作要流畅快速，决定了实验成败

2）禁止吸出沉淀

五、总结

在分子生物学中，基因克隆是一种常用的技术。

其中关键技术是dna重组技术，它利用酶学方法将不同来源的dna分子进行体外特异性切割，重新拼接组装成一个新的杂合dna分子。

在此基础上将杂合dna分子转入一定宿主细胞中进行扩增，形成大量的子代分子，此过程称基因克隆。

有目的地通过基因克隆技术，人为操作改造基因，改变生物遗传性状的系列过程总称为基因工程。

基因工程是把双刃剑。

如果不加节制的使用基因工程，让它去为你包治百病，那样你的整体免疫系统也将发生错乱，让你完全可以抵挡的疾病访问造成你的死亡。

如果人们想造什么动物就造什么动物，让这些动物急速的泛滥，动物的天敌关系，人类的生态平衡都将被破坏，动物也将超过人类，霸占我们赖以生存的地球。

而且，若是谁都想起死回生，我想终有一天我们将因为人口泛滥而灭亡。

基因工程知识一种让科技发展的手段，而不是我们的目的，我们要遵循自然规律，正确的对待基因工程，正确的对待生活。

篇二：

生物技术实验心得

姓名：

吴伙福学号：

11120222班级：

11（生）2

实验心得体会

我觉得生物技术实验它的目的在于锻炼我们的实际动手能力，让我们熟悉各种仪器的使用及实验的各种规范操作。

我认为要想学好这门实验课，首先，在做实验前，一定要事先对将要做的实验进行预习，记下有疑问或不懂得地方，因为这是做实验的基础，否则，在老师讲解时就会听不懂，这将使你在做实验时的难度加大,浪费做实验的宝贵时间。

比如做蛋白质的水解和氨基酸的纸层析法分离的实验，你要清楚水解蛋白质的方法和纸层析的基本技术，如果你不清楚，在做实验时才去摸索，这将使你极大地浪费时间,使你事倍功半。

做实验时，一定要亲力亲为，务必要将每个步骤，每个细节弄清楚，弄明白实验后，还要复习思考，这样你的印象才深刻，记得才牢固，否则，过后不久你就会忘得一干二净，这还不如不做。

做实验时，老师还会根据自己的亲身体会，将一些课本上没有的知识教给我们，拓宽我们的眼界，使我们认识到这门课程在生活中的应用是那么的广泛。

通过那些实验，使我学到了不少实用的知识，更重要的是，做实验的过程，思考问题的方法，这与做其他的实验是通用的，真正使我们受益匪浅。

在实验的过程中我培养自己的独立分析问题，和解决问题的能力。

不在像以前做实验那样很随便，总是抱着等老师教你怎么做，拿同学的报告去抄。

尽管你成绩也许会很高，但对将来是不利的。

我觉得实验课还是有必要认真去学的，很多东西也许你现在觉得没用，但是它可能潜移默化的影响着你。

最后我觉得老师的指导也是很有必要的，学生们必然会有问题，老师偶尔的启发就可能让同学豁然开朗。

但是更多的还是得靠我们自己，我们也要注意与老师互动，这样才会使我们不仅能学好实验课也能增进与老师的感情。

篇三：

现代生物技术导论学习心得体会

拿到这本书后随便翻看了一下，其中很多内容在以前的学习中已经深入的学习过，刚开始觉得这门课程没必要开，后来学习完了以后觉得对以前的课程有归纳总结的作用，觉得不错，但是我认为应该在大一上才好，当时觉得应该上一点关于专业课程设置和发展方向的课程。

这是我在开始写心得之前的一点看法现将个学期以来学习《现代生物技术导论》的一些心得体会总结如下一，在学习方法上对于这门课程，在我来看应该是一门综述类型的科目，内容繁杂但是相对来说都比较浅不会在每个点上点的太深，所以针对这个特点，我觉得一概在上课的时候跟老师很好的互动这样就够了，学习之余可以试着写一个章节提纲，或者画一张各个知识的关系图谱，记得我在学习生物化学的时候做过一张个中循环之间的一个结构关系图，复习的时候可真派上大用场了，关于记笔记我该说几句，如果要的高分还是乖乖的记笔记，但是我习惯上课看书再听听老师讲课这样比较好，如果记笔记我可就不能专心了，不过我的笔记还是记了——-课后的功劳啊。

二，对于王老师的教学方式的一点认识这学期是王中风老师代我们这门课程，其中有一个新的教学方法就是给我们一次做“教受者”的机会，这样增加了我们在学习这门课程的的积极性和兴趣，而且锻炼了一些演讲交际的能力还有就是对ppt的应用有所提升，别看这点不起眼，到将来找工作的时候就知道重要了，古人不是说过--不以善小而不为吗?

所以还是认真做好没一个“善事”。

不过也有一些不足之处就是：

很多同学上讲台的时间太少没有能够很好的发挥，我还有一个设想可以把这个推广的全院去，设置一个“合肥学院百家讲坛”为在校学生提供一个演讲的平台，可以讲自己的专业知识，还有自己在某个方面的认识和看法，比如：

今大学生就业，大学生使用网络，或者可以讲述自己在某个方面的成就分享经验，我觉得这样会更好，虽然现在都强调交流，可是我们跟我们周围的人的交流还是相当少的。

我还有一个感觉，王老师是我见过的比较严格的老师，从笔记，上课点名，对布置任务（文章格式，字体，引用等各个方面都做了要求）都做了很严格的要求，很多同学都觉得老师这样要求太夸张了，不过仔细想来觉得对我没是有好处了的，因为将来不管是再学习或者工作都需要这样的品格。

三，生物技术的学习对我们今后的作用以及影响

过去学历史的时候老师给我们讲简史，那是因为什么我们对历史没有深入学习过，简史是一个概要，可以帮助我们去